UT对PQ中毒后损伤肺成纤维细胞的修复作用研究ppt课件

1、Company Logo 内容引见研讨背景123估计结果与展望4立项根据与创新实验技术及过程Company Logo 研讨背景-百草枯简介v 百草枯(paraquat,PQ)，20%，250mL装；是一种有机杂环类广谱非选择性接触性除草剂及脱叶剂。v PQ对人畜具有较强毒性，人口服致死量约为13g。v 中毒后致急性肺损伤及肺纤维化改动为其特异表现v 短少特效解毒剂和可以在血液或组织中与PQ结合的螯合剂，PQ中毒的病死率高达60%80%。Company Logo 研讨背景-乌司他丁简介v 乌司他丁乌司他丁 (Ulinastain ,UT) (Ulinastain ,UT)，本品是从，本品是从安康

2、成年男性新颖尿液中分别纯化出来安康成年男性新颖尿液中分别纯化出来的一种糖蛋白，由的一种糖蛋白，由143143个氨基酸组成，个氨基酸组成，相对分子质量约相对分子质量约67006700。本品属蛋白酶。本品属蛋白酶抑制剂，对胰蛋白酶、抑制剂，对胰蛋白酶、-糜蛋白酶等丝糜蛋白酶等丝氨酸蛋白酶及粒细胞弹性蛋白酶、透明氨酸蛋白酶及粒细胞弹性蛋白酶、透明质酸酶、巯基酶、纤溶酶等多种酶有抑质酸酶、巯基酶、纤溶酶等多种酶有抑制造用。另具有稳定溶酶体膜，抑制溶制造用。另具有稳定溶酶体膜，抑制溶酶体酶的释放，抑制心肌抑制因子酶体酶的释放，抑制心肌抑制因子MDFMDF产生，去除氧自在基及抑制产生，去除氧自在基及抑制炎

3、症介质释放的作用。炎症介质释放的作用。 Company Logo 研讨背景-肺成纤维细胞v 正常情况下，正常情况下，MRC-5MRC-5存在存在准确调控，分泌的细胞外准确调控，分泌的细胞外基质基质ECMECM处于动态平处于动态平衡。衡。v 胶原蛋白是主要的胶原蛋白是主要的ECMECM蛋蛋白，占肺干重白，占肺干重1/51/5、。v 肺损伤后，肺损伤后，MRC-5MRC-5及胶原及胶原蛋白过度合成，参与病理蛋白过度合成，参与病理修复。修复。v 胶原蛋白的生成和堆积将胶原蛋白的生成和堆积将导致肺纤维化导致肺纤维化 Company Logo 肺成纤维细胞炎症介质炎症介质百草枯百草枯细胞因子细胞因子力学

4、刺激力学刺激缺氧缺氧肺成纤维细胞肺成纤维细胞Company Logo 研讨背景-结缔组织生长因子CTGFvCTGF属于TGF-家族，作为TGF-的下游因子，主要促进细胞增殖、粘附，ECM异常沉淀v早期即刻蛋白，主要表达于活化的肺纤维细胞，见于肺纤维变性早期，晚期极弱。v可作为纤维化病变早期诊断标志物。v促纤维化作用呈剂量依赖，可被抗CTGF抗体拮抗。 Company Logo 研讨背景-细胞力学特性v 力学特性粘弹性是细胞的一种本质属性，细胞所处的生理/病理形状、组织环境和力环境不同，所表现的力学特性也不尽一样。v 解释一些组织器官的生理、病理变化以及解释疾病的发病与治疗机理等具有重要的意义。

5、 v 目前为止，国内外尚未见有关百草枯中毒过程中肺成纤维细胞生物力学特性变化的报道。 Company Logo 前期任务 课题组在这方面已有一定的任务根底。部分任务人员，曾在吉林省科技开展方案工程20210百草枯致中毒性肺纤维化发病机理的力学生物学研讨的支持下，研讨了百草枯致中毒后短时间内肺成纤维细胞的 CTGF 的表达、细胞增殖情况及细胞粘弹性的变化等，实验结果阐明百草枯影响了细胞的生物学特性和生物力学特性。并已发表文章2篇。 1. Guohui Wang，Yongpeng Xie，Dan Shi，Nan Zhang. The Effects ofmechanical stimulation

6、 on proliferation and CTGF expression of human lung fibroblast. The 4th International Conference on Image and Signal Processing, (2021年10月发表，EI收录) 2. Guohui Wang，Yongpeng Xie，Nan Zhang. The Study of CTGF Expression of Lung Fibroblasts After Treated by Paraquat，第十六届亚太呼吸年会.( 2021年11月发表，SCI收录)Company L

7、ogo 人胚肺成纤维细胞MRC-5Olympus倒置相差显微镜:培育皿中细胞正常生长，形状呈长梭形。 Company Logo 百草枯处置前后MRC-5细胞显微图片 A A：正常：正常MRC-5MRC-5细胞细胞 B B：50mg/LPQ50mg/LPQ培育液处置后培育液处置后 C C：100mg/LPQ100mg/LPQ培育液处置后培育液处置后 D D：200mg/LPQ200mg/LPQ培育液处置后培育液处置后 Company Logo PQ PQ对对MRC-5 CTGFMRC-5 CTGF表达的影响表达的影响 各组细胞CTGF浓度比较*P0.05 Company Logo 肺成纤维细胞在

8、肺成纤维细胞在30mm水柱负压下吸入长度随时间变化情况水柱负压下吸入长度随时间变化情况Company Logo v 经过经过PQPQ处置后处置后MRC-5MRC-5细胞的粘弹细胞的粘弹性各项参数均明显小于正常性各项参数均明显小于正常MRC-5MRC-5细胞细胞 v 也就是说经过也就是说经过PQPQ处置后的处置后的MRC-5MRC-5生物力学特性降低，变得较生物力学特性降低，变得较“软软 v 在经过在经过100mg/L100mg/L和和200mg/L200mg/L百草百草枯处置后枯处置后MRC-5MRC-5粘弹性要小于粘弹性要小于50mg/L50mg/Lv 而而100mg/L100mg/L和和2

9、00mg/L200mg/L百草枯处百草枯处置组之间细胞的粘弹性无明显置组之间细胞的粘弹性无明显差别差别 各组细胞粘弹性参数比较各组细胞粘弹性参数比较 Company Logo 实验目的 经过实验研讨乌司他丁对百草枯中毒后损经过实验研讨乌司他丁对百草枯中毒后损伤肺成纤维细胞的修复作用，得到乌司他伤肺成纤维细胞的修复作用，得到乌司他汀对百草枯致肺损伤的治疗效果及治疗原汀对百草枯致肺损伤的治疗效果及治疗原理。理。 Company Logo 实验内容运用乌司他汀注射液处置经不同浓度百草枯损伤的肺成纤维细胞，检测细胞CTGF的表达及细胞的粘弹性，阐明乌司他汀对百草枯中毒后损伤肺成纤维细胞的修复作用，研讨

10、乌司他汀对百草枯致肺损伤的治疗效果并解释其治疗原理。Company Logo 实验器材v仪器及资料 v细胞：人胚肺成纤维细胞MRC-5，中科院细胞库。v试剂：胎牛血清培育基、胰蛋白酶、CTGF ELISA 试剂盒。v主要仪器：二氧化碳培育箱、 高低速离心机、微管吸吮系统 、流式细胞仪、ELx-800 NB酶标仪及配套洗板机等。Company Logo 本实验我们采用微管吸吮技术检测肺成纤维细胞在一定负压下吸入长度随时间的变化，结合规范线性固体粘弹性模型得到了正常及百草枯处置后肺成纤维细胞的生物力学特性粘弹性参数，研讨百草枯对人肺成纤维细胞生物力学特性的影响。 Company Logo 实验方法

11、 1.用含不同浓度百草枯的细胞培育液50mg/L、100mg/L、200mg/L处置常规培育的肺成纤维细胞12h。12h后换含乌司他丁的细胞培育液继续培育，在乌司他丁处置后0h、12h、24h、36h、48h获取细胞进展检测。2.经过PCR技术及酶联免疫吸附实验技术检测肺成纤维细胞CTGF的表达。3.结合规范线性黏弹性模型，采用微管吸吮技术测试细胞的力学特性粘弹性参数 Company Logo 技术流程图 肺成纤维细胞的常规培育不同浓度百草枯处置细胞12h不同浓度乌司他汀处置细胞0h、12h、24h、36h、48h获取细胞PCR及ELISA法检测CTGF的表达微管吸吮技术检测细胞粘弹性乌司他汀对百草枯中毒后损伤肺成纤维细胞的修复作用及治疗肺损伤的机理Company Logo 拟处理的技术难题 第二 第三步第一选择适宜的力学刺激波形、拉伸幅度、频率、时间，模拟在体肺细胞的力学环境，对人胚肺成纤维细胞进展体外力学环境培育； 选用适宜的百草枯剂量处置人胚肺成纤维细胞；并选择适宜的乌司他汀治疗剂量处置中毒的人胚肺成纤维细胞。对实验结果从生物学-医学-力学角度进展综合分析 Company Logo 拟采集数据结果UTUT对对PQPQ处置后处置后MRC-5MRC-5增殖的影增殖的影响响 Company Logo 创新点va.从细胞层次来研讨乌司他汀治疗百草枯致肺损伤的效果及治疗原理。vb