生化工程复习题(2013.下)

1、复习题一、名词解释1.冷冻干燥：冷冻的提取液在真空状态下，可以由固体直接变为气体的方法称冷冻干燥法，该法能起到浓缩作用。冻干过程中，有效成分几乎不会破坏，能保持生物大分子的天然性质，还具有疏松，易于溶解的特性，便于保存应用。2.有效成分：欲纯化的某种单一的生命大分子物质。3.抽提：从一种固体或一种液体混合物中将所需要的物质根据其特性用溶剂提取分离出来的方法。亦即用适当的溶剂和方法，从原料中把有效成分分离出来的过程。4.盐析：是利用不同物质在高浓度的盐溶液中溶解度的差异，向溶液中加入一定量的中性盐，使原来溶解的物质沉淀析出的分离技术。5有机溶剂沉淀：在含有溶质的水溶液中加入一定量亲水的有机溶剂，

2、降低溶质的溶解度，使其沉淀析出。6等电点沉淀：调节体系pH值，使两性电解质的溶解度下降而析出的操作称为等电点沉淀。7. 分配系数(K)：在一定温度、压力下，一种溶质在两种互不相溶的溶剂中溶解达到平衡时，该溶质在两相溶剂中的浓度比值叫分配系数。8.吸附平衡：在吸附的同时发生脱附，吸附速度和脱附速度相等表观吸附速度为零，吸附物质在溶液中的浓度和吸附剂表面上的浓度都不再发生改变时的状态。9洗脱：利用适当的溶剂，将树脂吸附的物质释放出来，重新转入溶液的过程。10.洗脱体积：将样品中某一组分洗脱下来所需洗脱液的体积，用Ve表示。11层析分离：利用多组分混合物中各组分物理化学性质的差别，使各组分以不同的程

3、度分布在两个相中的分离方法。12.层析分辨率：层析中相邻两个峰的分开程度。用Rs来表示。Rs = 两峰尖距离/两峰宽度和的一半。13.流动相：在层析过程中，推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体等，都称为流动相。14.固定相：层析中固定不动的一相，是固体物质或者是固定于固体物质上的成分；能与待分离的化合物进行可逆的吸附、溶解、交换等作用。15.吸附剂：凡能够将其它物质聚集到自己表面上的物质，都称为吸附剂。16吸附层析：是以吸附剂为固定相，根据待分离物与吸附剂之间吸附力不同而达到分离目的的一种层析技术。17分配层析：是根据在一个有两相同时存在的溶剂系统中，不同物质的分配系数不同而达

4、到分离目的的一种层析技术。18凝胶过滤：层析是以具有网状结构的凝胶颗粒作为固定相，根据物质的分子大小进行分离的一种层析技术。19离子交换层析：是以离子交换剂为固定相，根据物质的带电性质不同而进行分离的一种层析技术。20疏水层析：是利用表面偶联弱疏水性基团（疏水性配基）的疏水性吸附剂为固定相，根据蛋白质与疏水性吸附剂之间的弱疏水性相互作用的差别进行分离纯化的层析技术。21高效液相色谱：是指选用颗粒极细的高效耐压新型固定相，借助高压泵来输送流动相，并配有实时在线检测器，实现色谱分离过程全部自动化的液相色谱法。22.液相色谱：用液体作为流动相的色谱法称为液相层析，或称液相色谱。23.气相色谱：以气体

5、作为流动相的色谱法称为气相层析，或称气相色谱。 24.阳离子交换剂:其电荷基团带负电，反离子带正电。因此，可以与溶液中的正电荷化合物或阳离子进行交换反应。25.阴离子交换剂：其电荷基团带正电，反离子带负电。因此，可以与溶液中的负电荷化合物或阴离子进行交换反应。26离子交换平衡：当正反应、逆反应速率相等时，溶液中各种离子的浓度不再变化而达平衡状态，即称为离子交换平衡。27.正相色谱:指固定相的极性高于流动相的极性，这种层析过程中非极性分子或极性小的分子比极性大的分子移动的速度快，先流出。28.反相色谱：指固定相的极性低于流动相的极性，这种层析过程中，极性大的分子比极性小的分子移动的速度快而先流出

6、。29.离子交换剂的转型：指离子交换剂由一种平衡离子转为另一种平衡离子的过程。如对阴离子交换剂用HCl处理可将其转为Cl型，用NaOH处理可转为OH型，用甲酸钠处理可转为甲酸型等。30.交换容量：在一定条件下，某种组分与基质（固定相）反应达到平衡时，存在于基质上的饱和容量，称为交换容量，数值越大，表明基质对该物质的亲合力越强。31.基质体积：凝胶颗粒实际骨架体积，用Vg表示。32.外水体积：凝胶颗粒之间体积的总和。33.洗脱体积：将样品中某一组分洗脱下来所需洗脱液的体积，用Ve表示。34.排阻极限：不能进入凝胶颗粒孔穴内部的最小分子的分子量。所有大于排阻极限的分子都不能进入凝胶颗粒内部，直接从

7、凝胶颗粒外流出，所以它们同时被最先洗脱出来。35.分级分离范围：表示一种凝胶适用的分离范围，对于分子量在这个范围内的分子，用这种凝胶可以得到较好的线性分离。36. 梯度洗脱：在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂样品中性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k 达到良好的分离目的。当混合物中组分复杂且性质差异较小时，一般采用梯度洗脱。它的洗脱能力是逐步连续增加的，梯度可以指浓度、极性、离子强度或pH值等，最常用的是浓度梯度。在水溶液中，亦即离子强度梯度。或者答流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每

8、个流出的组分都有合适的容量因子k，并使样品中的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。（可在离子交换层析中查)。37.亲和层析：利用生物分子与其配体间特异性的、可逆性的亲和结合作用而对样品进行分离的一种层析技术。配体被固定在载体上，特异性结合经过的与其有亲和性的生物分子。38.配体：亲和层析中被固定在基质上的分子称为配体。44.亲和吸附剂：亲和层析中被固定在基质上的分子称为配体，配体和基质是共价结合的，构成亲和层析的固定相，称为亲和吸附剂。39.分子筛效应：大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径凝胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率，这就是分子筛效应。40.线性梯度凝胶：梯度凝胶电泳通常采用聚丙

9、烯酰胺凝胶，不是在单一浓度（孔径）的凝胶上进行，而是形成梯度凝胶，凝胶的浓度从上到下逐渐增加，孔径逐渐减小，呈线性变化。41.再生：使用过的柱子，采用一定的方法令其恢复原来性状的过程。42.担体：气相色谱中，填充在层析柱内的颗粒状惰性支持物，其上涂布固定相。43.聚酰胺薄膜层析: 聚酰胺对极性物质的吸附作用是由于它能和被分离物之间形成氢键。这种氢键的强弱就决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。层析时，展层剂与被分离物在聚酰胺膜表面竞争形成氢键。因此选择适当的展层剂使分离物质在聚酰胺膜表面发生吸附、解吸附；再吸附、再解吸附的连续过程，就能达到分离目的。44.聚焦层析: 聚焦层析是利用层析

10、过程中固定相偶联具有两性解离功能的有机分子为配基，与流动相中某些具有两性的粒子发生等电聚焦反应而进行分离的一种方法。45. 聚焦效应-蛋白质按其等电点在PH梯度环境中进行排列的过程。46.基线：样品进入检测器前，在实验操作条件下，记录笔所走的路径，称为基线。47.噪声：基线在短暂时间内的波动。48.漂移：基线在较长时间内的位移。只有当噪声和漂移均很小时，仪器稳定性才好。 49.调整保留时间：扣除死时间后的保留时间，称为tR。50.基线宽度：通过色谱峰两侧的转折点(拐点)作切线，在基线上的截距，称为基线宽度。51.半峰宽: 色谱峰高一半处的峰宽度，又称半宽度。即通过峰高的中点作平行于峰底的直线，

11、此直线与峰两侧相交两点之间的距离。52.死体积: 不被固定相滞留的组分，从进样到出现最大峰值所需的流动相体积。53.保留时间tR: 被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度最大值时所需的时间，也即从进样开始到出现某组分色谱峰的顶点时为止所经历的时间，称为此组分的保留时间。54.高压电泳：电泳的电压1000V5000V，电泳时间短，有时只需几分钟，多用于氨基酸、多肽、核苷酸和糖类等小分子物质的分离。55.低压电泳：电泳的电压100V500V，电泳时间较长，适于分离蛋白质等生物大分子。55.等电聚焦：使电泳的介质中形成一个连续的、稳定并有一定范围的线性pH 梯度，电泳时蛋白质等待分离的两性分子

12、可以在这种pH 梯度中迁移，直到迁移聚集于与其等电点（pI）相同的区域，从而形成一种分辨率极高的电泳聚焦效应。这种按等电点的大小，生物分子在pH梯度的某一相应位置上进行聚焦的行为称等电聚焦。56.双向电泳：是一种由任意两个单向电泳组合而成的，在第一向电泳后再在与第一向垂直的方向上进行第二向电泳的分离方法。一般使用根据等电点和分子量两次分离（IEF/SDS-PAGE）。通常用等电聚焦电泳和SDS-PAGE 的组合的电泳方法，即先进行第一向水平电泳等电聚焦电泳（按照pI 分离），然后再进行第二向垂直电泳SDS-PAGE（按照分子大小）。57.免疫电泳是以琼脂（糖）为支持物，在免疫学基础上，将琼脂（

13、糖）区带电泳与免疫扩散相结合产生特异性的沉淀线、弧或峰。58.电渗：是指在电场中液体对固体支持物的相对移动。如支持物带有负电荷，吸引溶液中带正电荷的离子，这些带正电荷的离子在电场中向负极移动，引起缓冲液向负极移动(反之，缓冲液的移动方向相反)，从而影响到待分离物在电场中的移动。59.区带电泳：电泳过程中，待分离的各组分分子在支持介质中被分离成许多条明显的区带，这是当前应用最为广泛的电泳技术。60.泳动度：带电颗粒在电场中泳动的速度称泳动度。61.毛细管电泳(CE)：又称高效毛细管电泳(HPCE),是指离子或带电粒子以毛细管为分离室,以高压直流电场为驱动力,依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的

14、差异而实现分离的液相分离分析技术。62.Eastern印迹法：印迹法（blotting）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法；对双向电泳后蛋白质分子的印迹分析称为Eastern印迹法。63.脉冲电场凝胶电泳：用于分离大分子DNA的一种电泳方法。由于超过一定大小(>20 kb)的线状DNA分子在琼脂糖凝胶中电泳的速度几乎相同，无法在恒场强凝胶电泳中分离。此电泳法则以两个不同方向的电场周期性交替进行，DNA在电场方向变更中作出反应所需要的时间取决于其大小，较小的分子重新定向较快，在凝胶中移动也较快，从而能使不同大小的DNA分子(可大至5 Mb)分开。电场变换

15、方向的间隔时间为脉冲时间，通常脉冲时间越长分辨的DNA片段越长。64.酶传感器：是由固定化酶与转换器密切结合而成的传感装置，是生物传感器的一种。 65. 固定化酶的相对酶活力：游离酶的活力为100，与同样量的酶偶联于载体后所显示的活力之比。66.固定化酶和固定化细胞技术:是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术。67.固定化酶:固定在载体上，并在一定空间范围内进行催化反应的酶。 68.固定化细胞：固定在载体上，在一定的空间范围内进行生命的活动称为固定化细胞。又称为固定化活细胞、固定化增殖细胞或固定化完整细胞。 69.交联固定化技术：借助双功能团试剂使酶蛋白分子之间发生交联，可制成网

16、状结构的固定化酶。此固定化法称为交联固定化技术。 二、填空题1、目前纯化蛋白质等生物大分子的关键技术是 、 和 。电泳、层析、高速与超速离心2.常用于提取有效成分的生物材料有： 、 和 。动物脏器、植物组织、微生物。3.在提取、纯化酶的过程中， 和 要逐渐增高。纯度、比活性4.有效成分的提取、纯化过程中，常用的活性测定方法有： 、 、 、 和 。光谱法、电化学法、生物活性检测法、免疫分析法和生物传感器法。5.通常提取碱性蛋白质选用 的溶液，提取酸性蛋白质选用 的溶液。低pH值、高pH值6.提取有效成分时，提取液与提取物的比例要适当，一般以 为宜。5:17.透析法浓缩大分子样品溶液时，应选用 溶

17、液为透析液。聚乙二醇8.减压蒸馏法浓缩，一般适用于 的物质。常温下稳定性好9.冰冻干燥法干燥样品，优点是：有效成分几乎不会破坏，能保持生物大分子的天然性质，还具有疏松，易于溶解的特性，便于保存应用。10.一般来说，选择分离方法的依据，是提取液中有效成分和杂质之间理化性质的差异性。11. 所用的操作压比超滤更大，膜的平均孔径最小，用于分离小分子溶质，如海水脱盐，制高纯水等。反渗透12.除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到 的技术。透析13.一般来说，在第一次盐析时，pH应偏离 的pI值，靠近 的pI值；而在第二次盐析时pH应调至接近 的pI值。有效成分、杂质、有效成分14

18、.盐析时，蛋白质浓度 ，共沉淀现象越明显，盐析分离效果则越差。越高15影响盐析的主要因素有（溶质种类） ，（溶质浓度），（pH值）和（温度）。16.盐析用盐的选择需考虑（盐析作用强）、（溶解度大）、（生物学惰性）和（来源丰富、经济） 等几个方面的因素；17.影响有机溶剂沉淀的因素有（温度）、（pH）、（样品浓度）、（中性盐浓度）和（金属离子）。18、DNP是 和 以复合物形式存在的，解聚它们用去污剂 。DNA，蛋白质，SDS19.纯DNA溶液的OD260/OD280应等于 。1.8 20.提取核酸时，溶液中的多糖类物质应该用 除去。CTAB或十六烷基三甲基溴化铵；21.蛋白质在用盐析沉淀分离后

19、，需要将蛋白质中的盐除去，常用的办法是透析和凝胶过滤的办法除盐。22.常用的蛋白质沉析方法有（等电点沉淀），（盐析）和（ 有机溶剂沉淀 ）。23. 利用沉淀法分离纯化蛋白质时常用的中性盐是 。硫酸铵；24.生物大分子制备的整个过程分为 、 、 、 、 五个阶段。材料选择和处理，确立测定方法，分离与纯化，抽提，浓缩25.纯化方案评价的指标主要有 、 和 。回收率，纯化倍数，比活力26. 生物大分子主要包括： 蛋白质 、 酶 、 核酸 、 多糖 和 脂类 ，它们是生物体内存在的具有特殊生物学功能的高分子化合物。27. 生化分离技术主要有沉淀分离技术分离、层析分离技术分离、电泳分离技术分离和超离心分

20、离技术。28. 蛋白质和酶的种类繁多，在提取时应根据其存在的部位、分子结构及溶解性质的不同选择不同的提取方法。29. 影响提取的因素主要有 溶剂 、 溶解度 、 温度 、 pH 和 浓度差 等。30. 水溶液法提取酶和蛋白质时，要注意控制好盐浓度、温度、pH值等因素。31. 沉淀分离技术包括盐析 沉淀、等电点沉淀和有机溶剂沉淀等技术。32. 在核蛋白提取时，应选用0.14mol/L的氯化钠溶液提取 核糖 核蛋白，而选用1mol/L的氯化钠溶液提取 脱氧核糖 核蛋白。33. RNA的提取方法主要有 稀盐溶液 提取和 苯酚水溶液 提取。34. 苯酚水溶液提取核酸时， 蛋白质 和 DNA 沉淀于 苯

21、酚 层中，而 RNA和 多糖 溶解于 水层 中。35. 核酸沉淀分离主要有 有机溶剂沉淀法 、 等电点沉淀法 、 钙盐沉淀法 和 选择性溶剂沉淀法 四种方法。36. 能够选择性地沉淀DNA的试剂是 异丙醇 。37. 根据物质吸收光谱的频率范围不同分光光度检测可分为：紫外分光光度检测 、 可见光分光光度检测 和 红外光分光光度检测 。38. 层析分离技术按流动相状态可分为 液相 层析和 气相 层析；按分离过程所主要依据的物理化学性质分为 吸附层析、分配层析、离子交换 层析、 分子排阻(凝胶过滤) 层析、 亲和 层析等。39.聚酰胺薄膜层析只适用于 极性分子 的分离。40. 纸上层析是以滤纸纤维

22、的 结合水 为固定相，以 有机溶剂 作为流动相，展开时样品中各物质在两相之间不断地进行分配，由于各物质有不同的 分配系数 、 移动的速率 也就不同，从而达到分离的目的。41. 溶质在滤纸上移动的速度可用Rf值表示，Rf = 溶质斑点中心移动的距离溶剂前沿移动的距离 ，Rf值决定于 分配 系数，不同的物质在两相间的 分配系数 不同，Rf值也不同，由此可根据Rf值的大小对物质进行定性分析。42. 薄层层析中用的薄层板有 硬板(湿板) 与 软板(干板) 之分，常用的薄层板制作方法有浸涂 法、 喷涂 法、 倾斜涂布法 法和推铺法 法。43. 气相层析根据其固定相的不同可分为 气固 层析和 气液 层析两

23、种。44. 气相层析具有 分辨率高 、 分析速度快 、 灵敏度高 和 应用范围广 等特点。45. 气固层析的固定相为 固体 ，其分离的主要依据是 吸附剂 对 被吸附物 的 吸附力 不同，所以又称为 气相吸附 层析；气液层析的固定相为 液体 ，其分离的主要依据是 分配系数 的不同，又称为 气相分配 层析。46. 气相层析的流动相是 气体 ，称为 载气 ，常用的有 氢气 、 氮气 、 氦气 、 氩气 等。载气的选择主要根据所使用的 检测器 和 载体气流 决定。47. 红色担体用于分离 非极性 和 弱极性 物质；白色担体用于分离 极性 物质48. 气相层析时，样品在进柱前必须变为气体，有些物质难于气

24、化必须先将其转变为 易挥发 的衍生物再进行气相层析。49. 离子交换层析的操作过程包括上柱(加样) 、 洗脱 和 收集 、树脂再生四大步骤。58.大孔网状吸附剂有（非极性）、（中等极性）和（极性）三种主要类型；50.影响离子交换速度的因素有（树脂粒度）、（交联度）、（溶液流速）、（温度）、（离子的大小）、（离子的化合价）和（离子浓度）。51.分配色谱的基本构成要素有（载体）、（固定相）和（流动相）。52.分子筛色谱也称（凝胶色谱）的主要应用是（脱盐）和（分级分离）53.配体与基质之间引入 可以减少 效应。手臂，空间位阻54.纸层析中，各物质的Rf值决定于被分离物质在两相间的 以及两相间的 。分

25、配系数、体积比55.一般说来，极性吸附剂易吸附极性物质，非极性吸附剂易吸附非极性物质。无机吸附剂有极性的和非极性的两种。羟基磷灰石、硅胶、硅藻土、氧化铝和人造沸石属前者，活性炭属后者。56.柱层析的设备主要有层析柱、部分收集器、磁力搅拌器、梯度混合器、恒流泵、检测仪和记录仪，构成一个完整的层析系统。57.装好的层析柱中基质应合乎表面平整、填装均匀、松紧一致和没有气泡的标准。68.床体积可通过测量柱内径和凝胶床高度计算出来，即Vt = 0.25R2h 58.G类葡聚糖凝胶常用GX 代表，X数字既代表交联度，也代表持水量。X数字越小，交联度越大，网孔越小，适用于分离低分子质量生化产品。X数字越大，

26、交联度越小，网孔越大，适用于分离高分子生化产品。59.凝胶层析分两类： 是将样品混合物按分子量大小分成两组。如蛋白样品的脱盐或蛋白、核酸溶液去除小分子杂质等。 是将一组分子量比较接近的组分分开。分组分离、分级分离60.凝胶层析中凝胶柱的鉴定 通常可以 上柱，观察有色区带在柱中的洗脱行为，以检测凝胶柱的均匀程度。蓝色葡聚糖-200061.亲和层析，基质的活化，常用的方法有： 法和 法。溴化氰活化、环氧乙烷基活化。62.亲和层析中糖蛋白常用的配体是凝集素，用于抗体纯化的配体通常是抗原或者金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)。63.高效液相色谱仪通常由溶剂输送系统、进样系统、色谱分离系统和检测记录系统四部

27、分组成。64.HPLC样品可用微量注射器通过 的进样口注入样液。六通进样阀65.按所使用的支持体的不同分为 纸 电泳、 薄层 电泳、 薄膜 电泳、 凝胶 电泳和 等电聚焦 电泳。按支持介质的形状分为 平板 电泳和 柱状 电泳。66. 分子在电场中移动的方向决定于所带 电荷 的种类，带正电荷的向的 负极 移动；带负电荷的向 正极 移动； 静电荷为零 的分子在电场中不移动。分子在电场中移动的速度主要决定于于颗粒所带 净电荷的量 ，同时受分子的 大小 和 形状 的影响。67. 影响电泳的外界因素有电场强度 、 溶液的pH值 、 溶液的离子强度 、 电渗 以及缓冲液的粘度和温度。83. 凝胶电泳与其他

28、电泳的主要区别，在于凝胶电泳同时具有电荷效应 和 分子筛效应的双重作用，具有很高的 筛选效率 。68. 聚丙烯酰胺凝胶电泳按其凝胶系统的组成可分成 连续 凝胶电泳 、 不连续 凝胶电泳、 梯度 凝胶电泳和 SDS 凝胶电泳。69. 不连续电泳的凝胶由上至下可分为 样品胶 、 浓缩胶 、 分离胶 。70. 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，其迁移率主要取决于它 所带的电荷 以及分子的大小和形状 。在聚丙烯酰胺系统中加入SDS，则蛋白质分子的迁移率主要取决于其 相对分质量 ，而与它的 所带的电荷 及 分子的形状无关。71. 在聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳系统中不仅具有 电荷效应 效应和分子筛效应 效应，而

29、且还具有 浓缩效应 效应，因此比连续电泳系统具有更高的分辨率和区带清晰度。72.琼脂含有 ，带大量 电荷，因此，电泳过程中有强烈的 作用。琼脂胶，负，电渗73.核酸电泳中可以用EB即 来对样品区带染色。溴化乙锭74.离子交换纤维素目前种类很多，其中以 和 最常用，在生物大分子物质（蛋白质，酶，核酸等）的分离方面显示很大的优越性。DEAE-纤维素（二乙基氨基乙基纤维素）、CM-纤维素（羧甲基纤维素）75.离子交换剂的电荷基团对不同的离子有不同的结合力。一般来讲， 结合力越大； 结合力越大。离子价数越高、价数相同时，原子序数越大；76.阴离子交换剂的电荷基团带 电，可交换阴离子物质。正77.凝胶过

30、滤层析中常用的凝胶有 、 和 。葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶78.对于 的酶，可以用酸溶液提取。在酸性条件下稳定且溶解度大79.DEAE-纤维素的中文全称叫 ，CM-纤维素的中文全称叫 。 二乙基氨基乙基纤维素、羧甲基纤维素； 80. 二乙基氨基乙基纤维素的英文简称叫 ，羧甲基纤维素的英文简称叫 。DEAE-纤维素，CM-纤维素81.层析分辨率一般定义为 ，用 表示。两峰的分开程度 、 Rs82.聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳有两种系统：只有分离胶的 和有浓缩胶与分离胶的 。连续系统、不连续系统83. 法的灵敏度比考马斯亮蓝染色高100倍，可以检测低于1 ng的蛋白质。

31、银染84.精氨酸的pI值为10.76,将其溶于pH7的缓冲液并置于电场中，则精氨酸应向电场的 方向移动。负极85.蛋白质双向电泳时，如果第一向要根据等电点分离，第二向根据分子量分离，我们可以在第一向使用 ，第二向使用 电泳。第一向电泳后，必须 ，再进行第二向电泳。86.离子交换剂带有一定的反离子。为了提高交换容量，一般应选择结合力较小的反离子。所此，强阳性和强阴性离子交换剂应分别选择H型和OH型；弱酸性和弱碱性离子交换剂应分别选择Na型和Cl型。 87.对于增加离子强度的梯度溶液，不管用于何种类型的离子交换剂，其离子强度绝大部分是增加的。而改变pH值的梯度溶液则不然，如果使用的是阳离子交换剂，

32、pH值应从低到高递增；如果使用的是阴离子交换剂，pH值应从高到低递减。88.阳离子交换树脂按照活性基团分类，可分为（强酸型），（弱酸型）和（中等强度）；其典型的活性基团分别有（磺酸基团），（羧基），（磷酸基）。89.离子交换分离操作中，常用的洗脱方法有（pH梯度） 和（离子强度（盐）梯度）。90.阴离子交换树脂按照活性基团分类，可分为（强碱型），（弱碱型）和（中等强度）；其典型的活性基团分别有（季氨基）、（伯、仲、叔氨）、（强弱基团都具备）。91.离子交换树脂由（载体），（电荷基团）和（反离子）组成。92DEAE Sepharose是（阴）离子交换树脂，其活性基团是（二乙基氨基乙基）。93CM

33、 Sepharose是（阳）离子交换树脂，其活性基团是 （羧甲基）94. 影响吸附的主要因素有（吸附剂的性质），（吸附质的性质） ，（温度），（溶液pH值），（盐浓度）和（吸附物浓度和吸附剂用量）。95.简单地说，离子交换过程实际上只有（外部扩散），（内部扩散）和（化学交换反应） 三步；96.等电聚焦电泳法分离不同蛋白质的原理是依据其（等电点（pI）的不同；97.根据分离机理的不同，色谱法可分为（吸附色谱） ，（离子交换色谱），（凝胶色谱），（分配色谱）和（亲和色谱）。98.根据吸附剂与吸附质之间存在的吸附力性质的不同，可将吸附分为（物理） 、（化学） 、（极性）和（交换）吸附；99.如果想分

34、离出抗原，那么配体应该是 ，如果想分离出糖蛋白，那么配体应该是 。 抗体，凝集素100.离子交换剂可分为疏水性离子交换剂和亲水性离子交换剂，而疏水性离子交换剂又可分为 交换剂和 交换剂。101.多缓冲剂的PH值决定PH梯度的 ，多缓冲交换剂的PH值决定pH梯度的 。下限，上限102.离子交换剂由 、 和 几部分组成。基质，电荷基团，反离子103. 气相色谱仪的基本构造有两部分，即 单元和 单元。前者主要包括 、 、 、 和 ，后者主要包括 和 。显示，分析，气源，进样装置，恒温器，色谱柱，检测器，自动记录仪104.高效液相色谱仪的基本系统有 、 、 、 和 。进样系统，输液系统，分离系统，检测

35、系统，数据处理系统105.GC层析柱有两种，一是 二是 。 填充柱，毛细管柱 106. 含 25%硫酸铵饱和度的细胞色素C溶液150ml，需加入 克硫酸铵或 毫升饱和硫酸铵溶液，才能使其达到55%的饱和度?(已知温度为20，即G=533，A=0.3)。 28.95g, 100ml107.碱性不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳，最常用系统中电极缓冲液使用 ，凝胶缓冲液是 ；电极缓冲液PH值为 ，浓缩胶缓冲液PH值为 ；前导离子是 、尾随离子是 。Tris/甘氨酸，Tris/HCI，8.3， 6.7，氯离子，甘氨酸根离子108.离子交换剂的电荷基团对不同的离子有不同的结合力。一般来说， ，结合力越大； ，结

36、合力越大。离子价数越高；价数相同时，原子序数越大；109.聚酰胺薄膜层析中，DNS-Cl与氨基酸反应，会产生 和 两种主要副产物。DNS-NH2；DNS-OH；110.疏水层析中的固定相是由 和配体两部分构成，其配体对 具有一定的吸附力。基质；疏水性物质；111. Sephadex G75(分级分离范围是3 000-80 000) 分离分子量为1.0×105 Da和8×104 Da的蛋白质混合物。（填能或不能）不能；112.气相色谱仪检定器中，应用较多的有 和 。氢火焰离子化检测器（FID）；火焰光度检测器（FPD）；电子捕获检测器（ECD) ；热导检测器（TCD)（填对两

37、种就可以）。113. 凝胶过滤层析中常用的凝胶有 、 和 。葡聚糖凝胶；琼脂糖凝胶；聚丙烯酰胺凝胶114. 离子交换纤维素目前种类很多，其中以 和 最常用，在蛋白质的分离纯化方面显示很大的优越性。DEAE-纤维素（二乙基氨基乙基纤维素）；CM-纤维素（羧甲基纤维素）；115. 疏水层析中的固定相是由基质和配体两部分构成，其配体对 具有一定的吸附力。疏水性物质116.阳离子交换剂的电荷基团带 电，可交换阳离子物质。负117.如果想利用亲和层析法纯化抗原，配体可选择 。抗体118.一般来说，酶固定化会使酶的活性 。降低119.泳动度与球形分子半径、介质粘度、颗粒所带电荷以及电场强度有关。120.疏

38、水层析中的固定相是由 和配体两部分构成，其配体对 具有一定的吸附力。基质；疏水性物质121.HPLC的检定器中，应用较多的有 、 和 。紫外检测器；示差折光检测器；荧光检测器；光电二极管阵列检测器（答出其中三种即可）122. 电泳可分离20Kb1 000 Kb的DNA。脉冲电场凝胶电泳123.高效液相色谱定量分析方法有：面积百分法、归一化法、外标法、内标法 。124.高效液相色谱定量分析使用内标法可以抵消仪器稳定性差、进样量不够准确等原因带来的定量分析误差。125.毛细管电泳是20世纪80年代研制出的一种新型的区带电泳方法，具有分辨率好、灵敏度高、检测快捷等特点。126.DNA样品缓冲溶解液内

39、含有0.25% ,在电泳中形成肉眼可见的指示带，可预测核酸电泳的速度和位置。 溴酚蓝127.1983年，Schwartz等人根据DNA分子弹性弛豫时间与DNA分子大小有关的特性，设计了脉冲电场梯度凝胶电泳。128.PAGE据电泳装置不同分为垂直的圆盘及板状两种。129.毛细管电泳中的样品各组分，不管是否带有电荷或带何种电荷，都会从正极向负极移动，迁移速率正离子最大，负离子最小，中性分子_居中。130.常用的电泳染色法有考马斯亮蓝染色法和银染色法，其中银染色法灵敏度高，考马斯亮蓝染色法线性宽。131.固定化酶的细胞或原生质制备方法有： 、 、 和 。吸附法、包埋法、共价结合（偶联）法和交联法。三

40、、简答题1、选择制备生命大分子的材料应遵循的原则是什么? 答：材料选择应遵循的原则是有效成分含量高，来源丰富，稳定性好，保持新鲜；提取工艺简单；有综合利用价值。在实践过程中则需抓住主要矛盾，全面考虑，综合权衡。2、一般理想的提取溶液应具备下述条件？答：对有效成分溶解度大，破坏作用小；对杂质不溶解或溶解度很小；来源广泛、价格低廉、操作安全等。 3、吸附层析有什么优点？答：吸附层析是应用最早的层析方法，吸附剂来源丰富、价格低廉、易再生，装置简单、灵活，又具有一定的分辨率等优点，至今仍广泛应用于各种天然化合物和生物发酵产品等初级产品的分离制备，如尿激酶、绒毛膜促性腺激素等粗品的制备。4、增加吸附剂表

41、面积的方法有哪些？答：增加吸附剂表面积的方法有：将吸附剂磨碎成小的颗粒；通过处理使颗粒表面凹凸多变；使吸附剂成为凝胶状态；将吸附剂制成具有大量微孔的颗粒。5、与PAG圆盘电泳相比，PAG垂直板电泳有什么优越性？答：（1）表面积大而薄，便于通冷却水以降低热效应，条带更清晰。（2）在同一块胶板上可同时进行10个以上样品的电泳，便于在同一条件下比较分析鉴定，还可用于印迹转移电泳及放射自显影。（3）胶板制作方便，易剥离，样品用量少，分辨率高，不仅可用于分析，还可用于制备。（4）胶板薄而透明，电泳染色后可制成干板，便于长期保存与扫描。（5）可进行双向电泳。 6. 破碎生物细胞的常用方法有哪些？ 答：机械

42、法：研磨，高速捣碎机；物理法：反复冻溶，超声波破碎，压榨法，溶胀法；化学法：自溶，酶解法，有机溶剂处理。7、有机物的色谱分析，如何确定是选用HPLC还是GC？一般认为，对于有机物的色谱分析，当其相对分子质量小（一般在200以下）、沸点较低时，加热又不易分解的样品，可用GC进行分析；当沸点较高(450)、不能气化或热稳定性差者，可用HPLC分析。相对分子质量在200-2000的化合物，可用液固吸附、液-液分配和离子交换色谱法。相对分子质量高于2000，则可用空间排阻色谱法。 8.交变脉冲电场凝胶电泳原理和应用。答：电泳系统是由一个水平式电泳槽和两组独立，彼此垂直的电极组成，一组电极负极为N，正极

43、为S；另一组负极为W，正极为E。一块正方形琼脂糖凝胶板呈45°置于中央，电场在N-S和W-E之间交替建立。 电场交替改变的时间长短与欲分离的DNA分子大小有关。电泳时，DNA分子处在连续间隔交替的电场中。首先向S极移动，然后改向E极。在每次电场方向改变时，DNA分子就要有一定的时间松弛，改变形状和迁移方向。只有当DNA分子达到一定构型后，才能继续前进。DNA分子净移动方向与加样线垂直，使样品中各组分沿同一泳道形成各自的区带。交变脉冲电泳可有效分离数百万bp的大分子DNA。9.试述聚丙烯酰胺凝胶与琼脂糖凝胶的不同之处？（1）分离范围不同：琼脂糖凝胶电泳分离分子量比较大的物质，尤其是核酸

44、；聚丙烯酰胺凝胶分离分子量较小的物质，如蛋白质，多肽等。（2）凝胶配置程序不同：琼脂糖凝胶在缓冲液中加热融化，在凝固前倒入槽中即可；聚丙烯酰胺凝胶在配置时还要加多种成分，并且对聚合温度也有一定的要求，否则会影响凝胶孔径的大小。（3）凝胶的厚度不同：琼脂糖凝胶最薄只能达到；聚丙烯酰胺凝胶可以制成.，分辨率高。（4）安全性不同：琼脂糖没有毒性；聚丙烯酰胺凝胶单体及交联剂有毒性。10.离子交换层析的梯度洗脱，所用梯度溶液按组成来分，一般有哪两种？答：一种是增加离子强度的梯度溶液。是用一简单的盐（如NaCl或KCl）溶解于稀缓冲液制成的，习惯上不用弱酸或弱碱的盐类；一种是改变pH值的梯度溶液。该溶液是

45、用两种不同pH值或不同缓冲容量的缓冲液制成的，所用缓冲液的种类、pH值以及缓冲容量要认真选择，否则将达不到预期目的。11、HPLC（高效液相色谱）具有哪些特点？ 答：高压：由于液体比气体通过色谱柱时所受的阻力要大得多，所以必须施加高压，一般为15-30MPa，最高可达50MPa。 高速：由于HPLC采用了高压，使流动相液体的流速加快，一般分析周期为数分钟至数十分钟。通常分析一个样品在1530分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。 高效：由于HPLC的柱效较高(以理论塔板数计大约700010000)，有时一根柱子可分离数十种乃至上百种组分。比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多

46、倍。 高灵敏度：采用灵敏的检测器和自动化装置，可检出10-9g乃至10-11g 的物质；所需试样量很少，通常只需数十微升试样即可进行全分析。12、在酶的纯化过程中，如果某一纯化步骤中酶活力超过了100%，可能的原因是什么？ 答：在酶的纯化过程中，如果某一纯化步骤中酶活力超过了100%，则很有可能是由于此酶的激活剂（包括别构激活剂）的加入或抑制剂的丢失所造成的。这些激活剂或抑制剂可能原先并不知道。13.简述影响抽提的决定因素及其原则影响抽提的因子有溶剂的浓度和极性，PH值，离子强度，水解酶，温度，搅拌，氧化，金属离子，抽提液和抽提物的比例。14、选择分离纯化方法的依据和主要的要求是什么？如何评价

47、分离纯化的可靠性？ 答：依据就是生物大分子与杂质之间的生物学和物理化学性质上的差异。早期分离纯化要求：要快速、粗放。能较大地缩小体积。分辨力不必太高。负荷能力要大。晚期分离纯化要求：分辨力要高。分离纯化的可靠性可通过生物大分子制备物的均一性（即纯度）和活性的鉴定。纯度要高，最好是一维电泳一条带，二维电泳一个点，或HPLC和毛细管电泳都是一个峰。活性回收率要高，酶比活力要高。15、吸附剂的比表面积对吸附容量有什么影响？如何克服细颗粒吸附剂流速慢的问题？为什么？ 答：比表面积指每克吸附剂所具有的表面积。吸附现象发生在吸附剂的表面，因此吸附剂比表面积愈大，吸附量愈多。为克服细颗粒吸附剂流速慢的问题，

48、可以在吸附剂总量不变的情况下，选择较大径高比的层析柱或/和增加操作压。增大层析柱直径会使层析柱有较大横截面，使流速加快，分辨率降低；压强增大，流速加快，层析分辨率提高（流速慢有扩散现象）。16、在疏水作用层析纯化苯丙氨酸裂解酶时，为什么要用双梯度 NH4SO41.00.0mol/L,甘油020%Tris-HCl缓冲液(pH7.5)进行洗脱？答：双梯度指硫酸铵浓度从大到小和甘油浓度从小到大。降低盐浓度，使洗脱液的离子强度降低，疏水层析时洗脱液的洗脱能力增大。增加甘油浓度，使洗脱液极性减小，疏水层析时洗脱液的洗脱能力增大。17.下列五肽的混合物，上阴离子交换柱，以pH10到pH1连续变化的缓冲液洗

49、脱，它们洗脱的次序是怎样的？为什么？ a. Lys-Gly-Ala-Thr；b. Lys-Gly-Ala-Glu；c. His-Gly-Ala-Glu； d. Glu-Gly-Ala-Glu；e. Val-Gly-Ala-Lys答：阴离子交换树脂与带负电多的肽段结合牢固，后洗脱。带电相同的情况下，与疏水性较强的肽段结合牢固。所以从由先到后的洗脱顺序是 a, e ,b ,c ,d。18、为什么在凝胶过滤层析时，分子量小的蛋白质有较长的保留时间，而在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳时，它又跑得最快？ 答：凝胶过滤常用的是葡聚糖凝胶(Sephadex)，这种凝胶颗粒的交联介质排阻分子量较大的蛋白质，仅允许

50、分子量较小的蛋白质进入颗粒内部，所以分子量较大的蛋白质只能在凝胶颗粒之间的空隙中通过。这意味着它通过柱的体积为床体积减去凝胶颗粒本身所占的体积。而分子量小的蛋白质必须通过所有的床体积才能流出，所以，分子量小的蛋白质比分子量大的蛋白质有较长的保留时间。而SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳时，其凝胶介质并不存在象凝胶过滤中Sephadex那样的颗粒之间的空隙。所以，所有的蛋白质分子必须通过交链介质而移动。蛋白质的分子量越小，通过介质就越快，移动得越迅速。19.一种分子量为24,000、pI为5.5的酶被一种分子量类似、但pI为7.0的蛋白质和另外一种分子量为100,000、pI为5.4的蛋白质污染。提出一

51、种纯化该酶的方案。答：用凝胶过滤(即分子排阻层析)法先除去分子量为100,000、pI为5.4的蛋白质，余留7、下来的低分子量的含酶的混合物再用离子交换层析法分离，于是就能获得所需要的纯酶。20.凝胶过滤层析中的分子筛效应与SDS-PAGE中的分子筛效应有什么异同点？ 答：相同点：根据生物大分子的分子量大小进行分离。不同点：二者作用机制不同，凝胶过滤层析主要依靠分子筛效应，即大分子物质经凝胶间隙被洗脱，而小分子物质由于进入了凝胶颗粒内部，洗脱时走的路径较长，故而在凝胶中能保留较长的时间，中等大小的分子由于进入凝胶颗粒的程度不同，按照分子量由大到小的顺序先后洗脱。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳时，蛋

52、白质所带电荷性质被SDS所掩盖，SDS-蛋白质复合物变成雪茄状，其短轴均相同，而长轴与分子量大小成正比，在电泳时，SDS-蛋白质复合物的迁移率与其形状有关，分子量小的迁移较快。21、影响电泳时带电颗粒泳动度的主要因素有哪些？它们是分别如何影响的？ 答：（1）首先决定于带电颗粒的性质，即颗粒所带净电荷的数量，大小及形状。一般说来，颗粒带净电荷多，直径小而接近于球形，则在电场中泳动速度快，反之则慢。（2）电场强度。一般电场强度越高，带电颗粒移动速度越快。（3）溶液的pH值。溶液的pH值决定了带电颗粒解离的程度，也决定了物质所带净电荷的多少，对于蛋白质，氨基酸等两性电解质而言，溶液pH值离等电点越远，颗粒所带净电荷越多；电泳速度越快；反之则越慢。（4）溶液的离子强度。溶液的离子强度越高，带电颗粒泳动速度越慢，反之越快。 （5）电渗作用。电渗是指在电场中液体对固体支持物的相对移动。在电场中，若带负电荷颗粒向正极移动，而介质却向阴极移动，从而对颗粒的泳动起阻碍作用；反之加快。（6）支持物。对支持物的一般要求是均匀，吸附