病毒的检测PPT学习教案

1、会计学1病毒的检测病毒的检测第1页/共59页第2页/共59页标本采集标本采集杀灭杂菌杀灭杂菌（青链霉素青链霉素）接种接种鉴定病毒种型鉴定病毒种型易感动物易感动物出现病状出现病状鸡胚鸡胚病变或死亡病变或死亡细胞培养细胞培养细胞病变细胞病变三大方法三大方法大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感（结核杆菌对青霉素不敏感）；而革兰氏阴性菌大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感（结核杆菌对青霉素不敏感）；而革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感（但奈瑟氏菌中的流行性脑膜炎双球菌和淋病双球菌对青霉素敏感）则对青霉素不敏感（但奈瑟氏菌中的流行性脑膜炎双球菌和淋病双球菌对青霉素敏感），而对链霉素、氯霉素等敏感。所以首先区分病原菌是

2、革兰氏阳性菌还是阴性菌，而对链霉素、氯霉素等敏感。所以首先区分病原菌是革兰氏阳性菌还是阴性菌，在选择抗生素方面意义重大。在选择抗生素方面意义重大。第3页/共59页第4页/共59页第5页/共59页鼻液、脓汁、乳液汁等鼻液、脓汁、乳液汁等分泌物或渗出液分泌物或渗出液、粪便，应加入高浓度的抗生素，充分混匀后，置、粪便，应加入高浓度的抗生素，充分混匀后，置4度冰箱内处理度冰箱内处理24小时或过夜，离心后取上清作接种用；小时或过夜，离心后取上清作接种用；拭子拭子在取样后应迅速将其浸泡入含有在取样后应迅速将其浸泡入含有2%犊牛血清和一定浓度的青、链霉素的犊牛血清和一定浓度的青、链霉素的Hanks液中，充分

3、涮洗棉拭子，反复冻融液中，充分涮洗棉拭子，反复冻融35次，离心后取上清液作为接种材料。次，离心后取上清液作为接种材料。第6页/共59页第7页/共59页第8页/共59页第9页/共59页第10页/共59页第11页/共59页细胞培养所需要的一般器材第12页/共59页第13页/共59页培养基：培养基：状态状态: : 液体培养液（动物细胞生活的液体环境）液体培养液（动物细胞生活的液体环境）成分成分: : 葡萄糖（满足能量需求、作为细胞碳源）葡萄糖（满足能量需求、作为细胞碳源） 氨基酸（合成蛋白质）氨基酸（合成蛋白质） 无机盐（重要的细胞组成物质）无机盐（重要的细胞组成物质） 维生素、动物血清等维生素、动

4、物血清等 （生长调节作用）（生长调节作用）条件条件: : 恒温（恒温（ 动物细胞生长温度）动物细胞生长温度） 无菌条件（防止微生物污染）无菌条件（防止微生物污染） 一般还需要一定浓度的二氧化碳一般还需要一定浓度的二氧化碳第14页/共59页第15页/共59页第16页/共59页第17页/共59页第18页/共59页（1 1）生产有重要价值的蛋白质产品分泌性的蛋白质产）生产有重要价值的蛋白质产品分泌性的蛋白质产品品（2 2）培养皮肤细胞用于移植形成组织）培养皮肤细胞用于移植形成组织（3 3）检测有毒物质致癌致畸引起染色体目和结构改变）检测有毒物质致癌致畸引起染色体目和结构改变 （4 4）理论研究）理论

5、研究: :培养正常或异常细胞用于生理、病理、培养正常或异常细胞用于生理、病理、药药 理研究理研究 (5) (5) 病毒的分离鉴定病毒的分离鉴定第19页/共59页第20页/共59页第21页/共59页SARS-CoV in various cell linesRD293HeLa第22页/共59页A:正常正常A72细胞细胞(A72);B:CCV感染后，导致的合胞体细胞感染后，导致的合胞体细胞 (a)及凋亡现象及凋亡现象(b)AabB第23页/共59页图图3426-1 鸡胚接种途径示意图（据鸡胚接种途径示意图（据Flint等）等）第24页/共59页第25页/共59页第26页/共59页第27页/共59页

6、第28页/共59页第29页/共59页第30页/共59页Virus Plaques第31页/共59页病毒的空斑（据病毒的空斑（据Madigan等）等）病毒空斑病毒空斑单层细胞单层细胞高稀释度高稀释度低稀释度低稀释度第32页/共59页第33页/共59页第34页/共59页第35页/共59页第36页/共59页第37页/共59页第38页/共59页血凝试验血凝试验血凝抑制试验血凝抑制试验第39页/共59页第40页/共59页第41页/共59页第42页/共59页第43页/共59页第44页/共59页第45页/共59页第46页/共59页第47页/共59页第48页/共59页第49页/共59页M123465789101112131415161718192021bp750200010005001099第50页/共59页第51页/共59页标本滴加硝酸纤维素膜标本滴加硝酸纤维素膜加热和碱处理变性加热和碱处理变性标记的核酸探针杂交标记的核酸探针杂交放射自显影或其他技术检测放射自显影或其他技术检测第52页/共59页第53页/共59页探针是一小段单链探针是一小段单链DNA或者或者RNA片段（大约是片段（大约是20到到500bp），用于检测与其互补的核酸序列。双链），用于检测与其互补的核酸序列。双链DNA加热变性成为单链，随后用放射性同位素（通常用磷加热变性成为单链，随后用放射