实验二蛋白质沉淀变性反应PPT学习教案

1、会计学1实验二蛋白质沉淀变性反应实验二蛋白质沉淀变性反应1 1、了解使蛋白质胶体溶液稳定的因素。、了解使蛋白质胶体溶液稳定的因素。2 2、了解蛋白质的可逆沉淀反应和不可逆沉淀反应。、了解蛋白质的可逆沉淀反应和不可逆沉淀反应。3 3、掌握蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及、掌握蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及 它们的相互关系。它们的相互关系。一、实验目的一、实验目的第1页/共17页维持蛋白质胶体溶液稳定的因素：维持蛋白质胶体溶液稳定的因素：水化水化膜膜同种电同种电荷荷外面的亲水基团结外面的亲水基团结合一层水，形成水合一层水，形成水化膜化膜同种蛋白质同种蛋白质表面带有相表面带有相同电荷同电荷第2

2、页/共17页破坏水化膜破坏水化膜中和电荷中和电荷使蛋白质沉淀使蛋白质沉淀的原理的原理聚集体的直径聚集体的直径100nm100nm即为不稳定的粗分散即为不稳定的粗分散系系第3页/共17页（1 1）盐析）盐析（2 2）有机试剂）有机试剂（3 3）重金属盐）重金属盐（4 4）有机酸）有机酸（5 5）加热）加热 使蛋白质沉淀的方法使蛋白质沉淀的方法第4页/共17页常用方法常用方法原理原理常用试剂常用试剂实用实用盐析盐析破坏蛋白质胶体溶液的水化破坏蛋白质胶体溶液的水化层和电荷层层和电荷层 (NH (NH4 4) )2 2S0S04 4、NaNa2 2S0S04 4、NaNa3 3P0P04 4、NaCl

3、NaCl、MgS0MgS04 4常用此法来分离和纯常用此法来分离和纯化蛋白质。化蛋白质。有机试剂有机试剂盐析盐析脱水作用；降低水的介电常脱水作用；降低水的介电常数和蛋白质溶解度；蛋白质数和蛋白质溶解度；蛋白质析出析出乙醇、丙酮、甲醇乙醇、丙酮、甲醇低温乙醇提取血液中低温乙醇提取血液中的蛋白质组分的蛋白质组分强酸、强强酸、强碱沉淀碱沉淀破坏蛋白质分子结构发生蛋破坏蛋白质分子结构发生蛋白质变性白质变性盐酸盐酸, , 硫酸硫酸, , 硝酸、氢氧硝酸、氢氧化钠化钠 灭活病毒灭活病毒加热加热变性变性鸡蛋、肉类等加工鸡蛋、肉类等加工重金属盐重金属盐沉淀沉淀变性；生成不溶性盐变性；生成不溶性盐Ag+Ag+，

4、Hg2+Hg2+，Cu2+Cu2+和和Pb2+Pb2+临床上常用蛋清或牛临床上常用蛋清或牛乳解救误服重金属盐乳解救误服重金属盐的病人的病人有机酸沉有机酸沉淀淀生成不溶性盐生成不溶性盐苦味酸、鞣酸、三氯醋酸、苦味酸、鞣酸、三氯醋酸、磺基水杨酸等生物碱试剂磺基水杨酸等生物碱试剂沉淀蛋白滤液等沉淀蛋白滤液等第5页/共17页蛋白质沉淀分类蛋白质沉淀分类（1 1）可逆沉淀反应：）可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构并未发生蛋白质分子内部结构并未发生显著变化，基本保持原有的性质，沉淀因素除去后显著变化，基本保持原有的性质，沉淀因素除去后，能溶于原来的溶剂中。例如：盐析、乙醇低温短，能溶于原来的溶剂中。例如：盐

5、析、乙醇低温短时作用，可用于蛋白质提纯。时作用，可用于蛋白质提纯。（2 2）不可逆沉淀反应：）不可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构、空蛋白质分子内部结构、空间构象遭到破坏，失去原来的天然性质，不再溶间构象遭到破坏，失去原来的天然性质，不再溶于原溶剂。例如：加热、有机酸反应。于原溶剂。例如：加热、有机酸反应。第6页/共17页蛋白质分蛋白质分子表面子表面水化膜水化膜同种电荷同种电荷稳定的亲水胶稳定的亲水胶脱水，失去电荷脱水，失去电荷沉淀反应沉淀反应可逆沉淀反应可逆沉淀反应（不变性沉淀反应）（不变性沉淀反应）如：盐析作用如：盐析作用不可逆沉淀反应不可逆沉淀反应（变性沉淀反应）（变性沉淀反应）如：重金属

6、盐沉淀作用如：重金属盐沉淀作用第7页/共17页蛋白质溶液：取10mL鲜鸡蛋清，用蒸馏水稀释至200ml，搅拌后用2-3层纱布过滤，新鲜配制。加入少量氯化钠可加速溶解球蛋白。 试剂：饱和硫酸铵溶液，硫酸铵粉，95%乙醇，2%硝酸银，0.5%乙酸铅，1%硫酸铜，10%三氯乙酸溶液，5%磺基水杨酸。1 1. . 试剂试剂三、实验仪器和试剂三、实验仪器和试剂第8页/共17页漏斗,滤纸,吸管,试管及试管架,量筒、离心机等。2 2. . 仪器仪器第9页/共17页1. 1. 蛋白质的可逆反应蛋白质的可逆反应盐析盐析步骤步骤现象现象解释结论解释结论取试管1，加入3mL蛋白质氯化钠溶液和等量的饱和硫酸铵溶液，混

7、匀，静置10分钟观察有无蛋白质（球蛋白）的沉淀倒出上清液于试管2，取试管1中沉淀，加少量蒸馏水观察沉淀的再溶解往试管2中，加入硫酸铵粉末，边加边用玻璃棒搅拌，直至粉末不再溶解，直至饱和观察有无沉淀（清蛋白）析出静置，弃去上清液，取出部分清蛋白沉淀，加少量蒸馏水观察沉淀的再溶解四、实验操作四、实验操作第10页/共17页2 2. . 蛋白质的可逆反应蛋白质的可逆反应乙醇乙醇步骤步骤现象现象解释结论解释结论取试管1，加入1mL蛋白质氯化钠溶液和21mL95%乙醇观察有无蛋白质的沉淀静置，弃去上清液，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸馏水观察沉淀的再溶解第11页/共17页试管操作现象操作现象试管 11mL蛋白

8、质溶液 3-4滴2%硝酸银溶液过量的硝酸银 观 察 有 无蛋 白 质 的沉淀 弃去上清液，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸馏水观察沉淀的再溶解试管 21mL蛋白质溶液 1-3滴0.5%乙酸铅 过量的乙酸铅观 察 有 无蛋 白 质 的沉淀弃去上清液，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸馏水观察沉淀的再溶解试管 31mL蛋白质溶液 3-4滴1%硫酸铜过量的硫酸铜 观 察 有 无蛋 白 质 的沉淀弃去上清液，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸馏水观察沉淀的再溶解3 3. . 蛋白质的不可逆反应蛋白质的不可逆反应重金属盐（重金属盐（3 3支试管）支试管）第12页/共17页试管操作现象操作现象试 管 11mL蛋白质溶液3滴10%三氯乙酸溶液 观 察 有 无 蛋白质的沉淀 弃去上清液，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸馏水观察沉淀的再溶解试 管 21mL蛋白质溶液3滴5%磺基水杨酸观 察 有 无 蛋白质的沉淀弃去上清液，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸馏水观察沉淀的再溶解4 4. . 蛋白质的不可逆反应蛋白质的不可逆反应有机酸（有机酸（2 2支试管）支试管）第13页/共17页五、结果与分析五、结果与