常用pH缓冲液

1、资料常用pH缓冲溶液的配制和pH值常用pH缓冲溶液的配制和pH值常用pH缓冲溶液的配制和 pH值序号溶液名称配制方法pH值1氯化钾-盐酸13.0 ml 0.2 mol/L HCl与 25.0 ml 0.2mol/L KCl混合均匀后，加水稀释至100ml1.72氨基乙酸-盐酸在500 ml水中溶解氨基乙酸 150 g,加480 ml浓盐酸，再加水稀释至1L2.33一氯乙酸-氢氧化钠在200 ml水中溶解2 g 一氯乙酸后，加40 g NaOH ,溶解完全后再加水稀释至1 L2.84邻苯二甲酸氢钾-盐酸把25.0 ml 0.2 mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与6.0 ml 0.1 mol/L H

2、Cl混合均匀，加水稀释至 100 ml3.65邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠把25.0 ml 0.2 mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与17.5 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml4.86六亚甲基四胺-盐酸在200 ml水中溶解六亚甲基四胺40 g ,加浓HCl 10 ml，再加水稀释至 1 L5.47磷酸二氢钾-氢氧化钠把25.0 ml 0.2 mol/L的磷酸二氢钾与23.6 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至 100 ml6.88硼酸-氯化钾-氢氧化钠把25.0 ml 0.2 mol/L 的硼酸-氯化钾与4.0 ml 0.1 mol/L N

3、aOH混合均匀，加水稀释至 100 ml8.09氯化铉-氨水把0.1 mol/L 氯化铉与0.1 mol/L氨水以2 : 1比例混合均匀9.110硼酸-氯化钾-氢氧化钠把25.0 ml 0.2 mol/L的硼酸-氯化钾与 43.9 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至 100 ml10.011氨基乙酸-氯化钠-氢氧化把49.0 ml 0.1 mol/L氨基乙酸-氯化钠与51.0 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀11.6钠12磷酸氢二钠-氢氧化钠把 50.0 ml 0.05 mol/L Na2HPO与 26.9ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至

4、100 ml12.013氯化钾-氢氧化钠把 25.0 ml 0.2 mol/L KCl与 66.0 ml0.2 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至100 ml13.0一、常用溶液的配制(一) 溶液配制注意事项1. 药品要有较好的质量试剂分为优级纯(保证试剂，Guaranteed reagent ,G. R.)、分析试剂(Antalytical reagent , A. R.)化学纯(Chemical pure ,C. P.)和实验试剂(Laboratory reagent , L. R.)等等。工业用的化学试剂， 杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。2.

5、 药品称量要精确。3. 配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸储水，比电阻值在50万欧姆以上， pH在5.57.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸偏水或去离子水。4 .配好后的溶液，应立即除菌处理(如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质)，以防 杂菌生长。(二) 0.067 (1/15 ) Mol/L 磷酸缓冲液1. 1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾 (KHPQ, A. R. ) 9.08g ,用蒸储水溶解后，倾入1 000ml容量瓶内，再稀释至刻度(1 000ml )。2. 1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠

6、( N&HPO, A.R.) 9.47g (或者N&HPO 2H2O 11.87g )用蒸储水溶解后，放入 1 000ml容量瓶内， 再加蒸储水稀释至刻度(1 000ml )。3. 按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。附表1磷酸盐缓冲液配制法(单位：毫升)pH1/15Mol/L Na 2HPO1/15Mol/L KH 2POpH1/15Mol/L NaHPC1/15Mol/L KH 2PO5.88.092.07.166.623.45.99.990.17.272.028.06.012.287.87.376.823.26.115.384.77.380.819.26.218.6

7、81.47.584.115.96.322.477.67.687.013.06.426.773.37.789.410.66.531.868.27.891.58.56.637.562.57.993.26.86.743.556.58.894.75.36.849.650.48.195.84.26.955.444.68.297.03.07.061.138.98.498.02.0(三) 0.15Mol/L PB 液附表2 0.15Mol/LPB 液配制法pH0.15Mol/L Na 2HPO (ml)0.15Mol/L NaH 2PQ (ml)6.426.573.56.637.562.56.849.051

8、.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.0NaHPO 2H2O分子量=175.05 0.15Mol/L 溶液含 26.7g/L 。N&HPO 12H2O分子量=358.22 0.15Mol/L 溶液含 53.7g/L 。NaHPO H2O分子量=138.00 0.15Mol/L溶液含 20.7g/L 。NaHPO - 2H2O分子量=156.03 0.15Mol/L 溶液含 23.4g/L 。(四) 0.2Mol/L PB 缓冲液附表3 0.2mol/L PB 缓冲液配制法pH0.2 Mol/L Na 2HPO (ml)0.2Mol/L

9、 NaH 2PO (ml)5.88.092.06.012.387.76.218.581.56.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.07.891.58.58.094.75.30.2Mol/L Na 2HPO 2 H2O溶液 35.61g/LNaHPO 12 H2O溶液含 71.64g/L0.2Mol/LNaH 2PO H 2O溶液含 27.60g/LNaHPQ 2 H2O溶液含 31.21g/L欲配0.1Mol/L PB缓冲液则在0.2Mol/L PB缓冲液的基础上加 H2O稀释1倍即

10、可。欲配制PBS液时，则在溶液中加 0.85 %的NaCl溶液即可。（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（ PBS（0.15Mol/L PH 7.2 ）NaCl 8.0gKCl 0.2gN&HPO 1.15g（如为 NaHPO 12HO,则为 2.89g ）KHPQ 0.2g将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115C高压灭菌10min15min，存在4C冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗 涤细胞培养物。（六）硼酸盐缓冲液（ Borate saline buffer ）1 .硼酸（H 3BO）0.2Mol/L 硼酸：硼酸 12.37g 加水至 1 000ml。

11、2. 硼砂（NaBO）0.05Mol/L 硼砂：硼砂 19.07g 加水至 1 000ml。附表4不同pH的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法pH0.05Mol/L 硼砂(ml)0.2Mol/L 硼酸(ml)pH0.05Mol/L 硼砂(ml)0.2Mol/L 硼酸(ml)7.41.09.08.23.56.57.61.58.58.44.55.57.82.08.08.76.04.08.03.07.09.08.02.0（七）巴比妥缓冲液1. pH8.2离子强度0.05MO1/L巴比妥缓冲液巴比妥钠47.6g蒸储水3 000ml1.17N HC1 55.0ml（1.17 N HC1=193m1 浓 H

12、C1 加 1 807ml 蒸（水）将4.76g巴比妥钠溶于 3 000ml蒸储水。 加 1.17 N HC1 55ml 。用HC1调节pH到8.2，并加蒸储水至 4 265ml。2. pH8.4 0.06MO1/L 巴比妥缓冲液巴比妥1.84g巴比妥钠10.30g加蒸储水至1 000.00ml3. pH8.6 0.06MO1/L 巴比妥缓冲液巴比妥1.66g巴比妥钠12.76g加蒸储水1 000.00ml（八）0.2MO1/L醋酸盐缓冲液见表附表5附表5 0.2MO1/L醋酸盐缓冲液配制法pH0.2MO1/LTris (ml)0.1MO1/LHC1 (ml)pH0.2MO1/LTris (ml

13、)0.1MO1/LHC1 (ml)23 C37 C23 C37 C9.108.952558.067.902527.58.928.76257.57.967.822530.08.758.602510.57.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.57.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222542.5（九）三羟甲基甲烷一盐酸缓冲液（ Tris HC1缓冲液）不同 pH, 0.05MO1/L25m10.2Mo1/L三羟甲基氨基甲烷加x m10.1NH

14、C1，加水稀释至100ml （见下表）附表6 Tris HC1缓冲液配制法pH0.2MO1/LTris(ml)0.1NHC1(ml)pH0.2MO1/LTris(ml)0.1NHC1(ml)23 C37 C23 C37 C9.108.962558.057.902527.58.928.78257.57.967.822530.08.748.602510.07.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.07.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.22254

15、2.58.238.102522.57.207.052545.08.148.002525.025三羟甲基氨基甲烷（Tris ）分子量=121.140.2Mol/L 三羟甲基氨基甲烷：Tris24.23g，加水至1 000ml。0.1NHC1:取 HCl8.6ml ,加水至 1 000ml。（十）0.5Mol/L pH9.5 碳酸盐缓冲液NaHCO3.70gN&CO 0.60g溶于600.00ml蒸储水中即得。不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。最好小量配制。（一）甘油磷酸缓冲液1 .配制pH8.0磷酸缓冲液0.1Mol/L Na 2HPO 94.50ml0.1N NaH2P

16、O 5.50ml混合即可2. 9份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。用途：用于免疫荧光试验。（十二）Hank' s 液1.贮存液NaCl 80.00gKCl 4.00gN&HPO 12 H2O 1.52gKHPO 0.60g葡萄糖4.00g0.4 %酚红液 50.00ml双储水加至100.00ml115C高压灭菌15min,冰冻保存。2.工作液贮存液1份双储水9份115C高压灭菌15min。临用时用灭菌的 5.6 %NaHC宓夜调pH值至7.2左右（溶 液呈橙红色）。（十三）荼（钠）氏试剂（Nessler ' s reagent ）配方1:氯化汞6

17、.0g碘化钾12.4g20% NaOH 30ml加蒸储水至100ml配方2：碘化汞11.5g碘化钾8g蒸储水50ml（完全溶解后）过滤，加 20% NaOH 50mE用途：检测溶液中氨离子。（十四）阿氏（Alsever ' s）液葡萄糖2.05g柠檬酸钠0.80g氯化钠0.42g蒸储水100ml溶解后，以10%宁檬酸调节pH至6.1，过滤，分装，10磅10min灭菌，4C保存。（十五）青、链霉素混合液（简称 S. P.液或双抗液）青霉素（40万U） 5支链霉素（ 200万g） 1支分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10C-20C冰箱保存备用（1万单位g/ml ）。临用时，按1%勺量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml,链霉素 100ug/ml 。（十六）洗液（清洁液）配方1:重铭酸钾150g蒸储水300ml浓硫酸3 000ml将重铭酸钾加入蒸储水中，使之自然溶解或水浴溶解， 亦可在大塔蜗中加热溶解