《DNA重组技术的基本工具》

1、退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录1.DNA1.DNA的基本组成单位的基本组成单位: : 鸟嘌呤脱鸟嘌呤脱氧核苷酸氧核苷酸腺嘌呤脱腺嘌呤脱氧核苷酸氧核苷酸胞嘧啶脱胞嘧啶脱氧核苷酸氧核苷酸 胸腺嘧啶脱胸腺嘧啶脱氧核苷酸氧核苷酸脱氧核糖含氮碱基磷酸AGCT知识重温：知识重温：DNADNA分子的结构分子的结构退出退出目录目录氢键氢键平面结构平面结构立体结构立体结构ATGCTACG磷磷酸酸二二酯酯键键3.DNA3.DNA分子的结构分子的结构退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录12限制酶的识别序列有

2、何特点？限制酶的识别序列有何特点？退出退出目录目录限制酶识别序列的特点限制酶识别序列的特点 中轴线两侧的中轴线两侧的DNADNA上碱基呈反向对称，重复排列上碱基呈反向对称，重复排列 如：如：GAAGAA TTCTTC CCCCCC GGGGGG CTT CTT AAGAAG GGGGGG CCCCCC中轴线中轴线退出退出目录目录 1 1、EcoREcoR（大肠杆菌的一种限制酶）能（大肠杆菌的一种限制酶）能识别识别GAATTCGAATTC序列，并切割序列，并切割G G和和A A之间的磷酸二酯键。之间的磷酸二酯键。 2 2、SmaSma能识别能识别CCCGGGCCCGGG序列，并切割序列，并切割C

3、 C和和G G之间的磷酸二酯键。之间的磷酸二酯键。常用的两种限制酶常用的两种限制酶退出退出目录目录黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端退出退出目录目录 什么叫黏性末端？什么叫黏性末端？ 当限制酶从识别序列的当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开中心轴线两侧切开时，时，被限制酶切开的被限制酶切开的DNADNA的末端带有几个的末端带有几个伸出的核苷酸伸出的核苷酸，他们之间正好他们之间正好互补配对互补配对，这样的末端叫，这样的末端叫黏性末端黏性末端。退出退出目录目录平末端平末端平末端平末端退出退出目录目录什么叫平末端？什么叫平末端？ 当限制酶从识别序列的当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时中心轴线处切开时

4、，切开的切开的DNADNA的末端是平整的，这样的末端叫的末端是平整的，这样的末端叫平末端平末端。退出退出目录目录退出退出目录目录可把可把黏性末端黏性末端之间的之间的缝隙缝隙“缝合缝合”起来。起来。Ecoli DNA连接酶或连接酶或T4DNA连接酶连接酶退出退出目录目录 T4 DNA连接酶连接酶还可把还可把平末端平末端之间的之间的缝隙缝隙“缝合缝合”起来，但效率较低起来，但效率较低退出退出目录目录氢键氢键TGCGATAC磷磷酸酸二二酯酯键键TACGTGCA DNA DNA聚合酶的作用：把聚合酶的作用：把单个单个脱氧核苷酸脱氧核苷酸连接到连接到DNADNA片段末端。片段末端。磷磷酸酸二二酯酯键键

5、DNA DNA连接酶的作用：将两连接酶的作用：将两个个双链双链DNADNA片段片段连接起来。连接起来。退出退出目录目录退出退出目录目录1.载体需要的条件： 有1多个限制酶切点（便于外源基因的插入）（便于外源基因的插入）对受体细胞无害导入基因能在受体细胞中复制、表达有某些标记基因，便于筛选三、“分子运输车” 基因进入受体细胞的载体退出退出目录目录能复制并带着能复制并带着插入的目的基插入的目的基因一起复制因一起复制有切割位点有切割位点标记基因将来标记基因将来可用含青霉素可用含青霉素的培养基鉴别。的培养基鉴别。2、基因工程中常用的载体、基因工程中常用的载体质粒质粒质粒是一种裸质粒是一种裸露的、结构简

6、露的、结构简单独立于细菌单独立于细菌拟核之外、具拟核之外、具有自我复制能有自我复制能力的双链环状力的双链环状DNADNA分子。分子。退出退出目录目录 在进行基因工程操作中在进行基因工程操作中, ,真正被用作载体真正被用作载体的质粒都是在天然质粒的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工的基础上进行过人工改造的。改造的。 质粒噬菌体的衍生物、某些动植物病毒等2、基因工程中常用的载体、基因工程中常用的载体退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录退出退出目录目录一、基因工程的概念：一、基因工程的概念：二、二、DNA重组技术的基本工具：重组技术的基本工具：1.限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶“分子手术刀分子手术刀” 2. DNA连接酶连接酶“分子缝合针分子缝合针”