微生物实验内容汇总

1、会计学1微生物实验内容汇总微生物实验内容汇总Figure 1 - A Gram stain of Gram + Staphylococcus cells. 显微镜下的杆菌杆菌(bacillus) Figure 2 - Gram stain of Gram - E. coli cells霍乱弧菌Figure 3 - Gram stain of Gram Cholera cells芽孢产芽孢细菌的种类 菌体 （营养细胞）芽胞变形杆菌鞭毛1000细菌荚膜示意图细菌荚膜示意图 负染色负染色 由丹麦医生由丹麦医生Hans Christian GramHans Christian Gram于于188418

2、84年年创立创立。【操作步骤】结晶紫初染结晶紫初染碘液媒染碘液媒染乙醇脱色乙醇脱色复红复染复红复染涂片固定涂片固定1 min1 min30 s1 min滤纸吸干，油镜观察滤纸吸干，油镜观察 结晶紫结晶紫 1 1 碘液碘液 1 1 95% 95% 乙醇乙醇 3030” 复红复红 1 1 冲洗冲洗 滤纸干燥滤纸干燥 油镜观察油镜观察冲洗冲洗冲洗冲洗冲洗冲洗染色染色初染初染媒染媒染脱色脱色复染复染紫色（紫色（G）革兰氏染色步骤示意图革兰氏染色步骤示意图革兰氏染色革兰氏染色甲甲菌菌乙菌乙菌初染初染结晶紫结晶紫媒染媒染碘碘液液脱色脱色乙醇乙醇复染复染复复红红紫色（紫色（G）红色（红色（G-）革兰氏染色步

3、骤示意图革兰氏染色步骤示意图阳性菌阳性菌紫色紫色 阴性菌阴性菌红色红色n斜面培养基制作斜面培养基制作1、称量及溶化、称量及溶化2、调、调pH 3、加琼脂、溶化、定容、（过滤）、加琼脂、溶化、定容、（过滤）4、分装、加塞、包扎、分装、加塞、包扎5、灭菌、灭菌（6、摆斜面）、摆斜面）操作步骤操作步骤 1. 半固体培养基接种法（操作）半固体培养基接种法（操作）2. 斜面培养基接种法斜面培养基接种法3. 液体培养基接种法液体培养基接种法 细菌的分离接种接技术细菌的分离接种接技术（一）分离培养（一）分离培养1. 平板分离划线接种法（操作）平板分离划线接种法（操作）（二）纯培养（二）纯培养IVIII1/5

4、 I1/10 Rotate 90Flame loopRotate 90Rotate 90III1/4 Flame loop平板划线接种法（分离培养法）平板划线接种法（分离培养法）培养结果培养结果132注意事项：注意事项：1.1.各区之间接种环要灭菌各区之间接种环要灭菌2.2.用力适当，不要划破用力适当，不要划破 琼脂表面琼脂表面3.3.注意无菌操作注意无菌操作半固体培养基接种法（操作）半固体培养基接种法（操作）方法：穿刺接种方法：穿刺接种结果：沿穿刺线生长结果：沿穿刺线生长动力动力- 扩散生长扩散生长动力动力+三、细菌在培养基上生长现象三、细菌在培养基上生长现象沉淀沉淀成链生长成链生长浑浊浑浊

5、均匀分散生长均匀分散生长菌膜菌膜表面生长（需氧菌）表面生长（需氧菌）1. 固体固体2. 半固体半固体3. 液体液体菌落菌落 菌苔菌苔动力动力+ 动力动力-有鞭毛动力+无鞭毛动力沿刺线生长混浊生长 培养基培养基生长现象生长现象用途用途 固体平板固体平板 固体斜面固体斜面液体液体半固体半固体细菌在培养基上生长现象细菌在培养基上生长现象材料：培养基，无菌棉棒，酒精灯1. 1. 空气中细菌的检查空气中细菌的检查取三块琼脂平板，将取三块琼脂平板，将2 2个打开皿盖个打开皿盖分别置于不同的环境分别置于不同的环境1530min1530min后，后，盖好皿盖。另外盖好皿盖。另外1 1个不启盖作为对个不启盖作为

6、对照。置照。置3737培养培养1824h1824h。材料：材料：普通琼脂平板普通琼脂平板方法：方法：结果：结果：计数菌落数，观察菌落数的差异。计数菌落数，观察菌落数的差异。l在在1个平皿底部做好标记，分为个平皿底部做好标记，分为消毒前消毒前与与消毒后消毒后两个区域。两个区域。l取一支无菌棉签放入无菌盐水中浸泡，取一支无菌棉签放入无菌盐水中浸泡，在管壁上挤干水在管壁上挤干水后擦拭皮肤或其他后擦拭皮肤或其他物品，然后将该棉签涂布于无菌平皿消毒前区域，物品，然后将该棉签涂布于无菌平皿消毒前区域，作来回划线，注意勿划作来回划线，注意勿划破琼脂表面。破琼脂表面。l将将皮肤区域或物品皮肤区域或物品用碘酒棉

7、球及酒精棉球涂擦消毒，另取一支无菌棉棒用用碘酒棉球及酒精棉球涂擦消毒，另取一支无菌棉棒用消毒前所述方法取材，接种于标有消毒后的平皿区域。消毒前所述方法取材，接种于标有消毒后的平皿区域。l平皿平皿37、24h培养后取出观察表面有无细菌生长，比较消毒前后菌落数培养后取出观察表面有无细菌生长，比较消毒前后菌落数目，描述菌落特征。目，描述菌落特征。结果：结果：计数菌落数计数菌落数371824h消毒前消毒后 二、药敏试验（二、药敏试验（纸片扩散法）纸片扩散法）材料：材料：方法：方法：普通琼脂平板普通琼脂平板(2块平板块平板/组）组）大肠杆菌、金葡菌大肠杆菌、金葡菌氯霉素、青霉素、碘酒、结晶紫氯霉素、青霉

8、素、碘酒、结晶紫 大肠杆菌大肠杆菌葡菌球菌葡菌球菌氯氯青青庆庆链链氯氯青青庆庆链链371824hG+G-药敏实验药敏实验纸片法抑纸片法抑菌环直径菌环直径青霉素青霉素(10ug/片片)链霉素链霉素(10ug/片片)氯霉素氯霉素(30ug/片片)庆大霉素庆大霉素(10ug/片片)敏感标准敏感标准抗药抗药2011 10 12中度敏感中度敏感21-2812-1410-1713-14高度敏感高度敏感29 15 17 15白色葡萄球菌白色葡萄球菌（ G+ ）大肠杆菌大肠杆菌（ G- ）脑膜炎双球菌脑膜炎双球菌血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验步骤：步骤： 血浆血浆 血浆血浆12 金葡金葡 白葡白葡+ + + +

9、 凝集（凝集（+）不凝集（不凝集（-）血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验 生理盐水生理盐水+ + + + 无菌操作：无菌操作：l链球菌侵入体内产生链球菌侵入体内产生SLOSLO，刺激机体产生相应抗体，刺激机体产生相应抗体ASOASO，当两者中和后，再，当两者中和后，再加入加入SLO SLO 乳胶试剂，因病人血清中乳胶试剂，因病人血清中ASOASO量很多，未被中和掉的抗体与乳胶试量很多，未被中和掉的抗体与乳胶试剂反应，产生清晰凝集，为阳性；无凝集，为阴性。剂反应，产生清晰凝集，为阳性；无凝集，为阴性。方法方法：间接凝集：间接凝集结果结果：效价大于：效价大于400400单位单位意义意义：风湿热及其活动性

10、的辅助诊断风湿热及其活动性的辅助诊断抗抗“O”试验（试验（ASO test）： 阴性对照（阴性对照（1滴）滴） 待检血清待检血清 （1滴）滴） + + 胶乳试剂（胶乳试剂（1滴）滴） 胶乳试剂（胶乳试剂（1滴）滴）- ？2min2min肥达实验肥达实验 肥达试验（肥达试验（Widal test）是用已知的伤寒）是用已知的伤寒杆菌杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原抗原与与病人血清做定量凝集试验，以测定患者血清中有病人血清做定量凝集试验，以测定患者血清中有无相应抗体，根据抗体含量的多少以及增长情况，无相应抗体，根据抗体含量的多少以及增长情况，可帮助诊断伤寒及副伤寒。可

11、帮助诊断伤寒及副伤寒。 【原理原理】 肥达反应稀释法示意表肥达反应稀释法示意表试验管（每管试验管（每管0.5ml） 对照管对照管 1234567生理盐水生理盐水0.50.50.50.5 0.50.5 0.5-1“O”抗原抗原 0.50.50.50.5 0.50.50.52“H”抗原抗原0.50.50.50.50.50.50.53PA抗原抗原0.50.50.50.50.50.50.54PB抗原抗原0.50.50.50.50.50.50.5血清最终稀释度血清最终稀释度 1:401:801:1601:3201:640 1:1280- O H A B 诊诊 断断 意意 义（义（可能可能）伤寒及副伤寒伤

12、寒及副伤寒感染早期感染早期/交叉反应交叉反应伤寒及副伤寒伤寒及副伤寒感染晚期感染晚期/预防接种预防接种/非特异性回忆反应非特异性回忆反应伤寒伤寒甲型副伤寒甲型副伤寒乙型副伤寒乙型副伤寒接种接种伤寒及副伤寒伤寒及副伤寒三联疫苗三联疫苗非肠热症非肠热症/早期用抗生素早期用抗生素/免疫功能低下免疫功能低下3、O与与H抗体在诊断上的意义抗体在诊断上的意义l分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸脂质，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗抗酸染色酸染色。l齐-尼氏抗

13、酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色红色，而其他细菌及背景中的物质为兰色兰色。一、抗酸染色原理一、抗酸染色原理 实验方法：实验方法：1、细菌涂片标本的制备、细菌涂片标本的制备 涂片涂片 干燥干燥 固定固定3、油镜观察油镜观察1）初染：）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗待标本冷却后用水冲洗。2）脱色：）脱色： 3%盐酸酒精脱色30

14、1；用水冲洗。3）复染复染：用碱性美兰溶液复染1，用水冲洗后用吸水纸吸干。2、染色染色1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。、涂片包括涂片、干燥、固定三步。 涂片涂片 干燥干燥 固定固定 石炭酸复红维持石炭酸复红维持 3-5 5 3%盐酸酒精盐酸酒精30 1 美蓝复染美蓝复染1 冲洗冲洗 干燥干燥 油镜观察油镜观察冲洗冲洗冲洗冲洗初染初染脱色脱色复染复染抗酸菌呈红色抗酸菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长。背景及非抗酸性细菌呈兰色。注意事项：1、无菌操作、无菌操作2、菌种管摇匀后取菌、菌种管摇匀后取菌3、涂片均匀、涂片均匀4、初染加热维持、初染加热维持35分钟，勿沸腾烧干分钟，勿沸腾烧干

15、5、冷却后冲洗、冷却后冲洗6、油镜下从视野中找红色抗酸菌、油镜下从视野中找红色抗酸菌白色念珠菌钩端螺旋体类炭疽（枯草杆菌）类炭疽（枯草杆菌） 炭疽杆菌炭疽杆菌曲霉脓汁、脓性分泌物（未知菌液/固体培养物）涂 片革兰染色镜 检血琼脂平板接种直接菌落观察血浆凝固酶试验甘露醇发酵诊断报告n注：若染色后未发现细菌，可报告“直接镜检未发现细菌” 革兰染色镜检革兰染色镜检 形态形态 排列排列 染色性染色性 金黄色金黄色 葡萄球菌葡萄球菌 血平板培养结果观察血平板培养结果观察 菌落特点菌落特点 溶血性溶血性 菌落颜色菌落颜色金黄色金黄色葡萄球菌葡萄球菌结果报告： 标本标本+ +血浆血浆 白葡菌白葡菌+ +血浆

16、血浆阳性（阳性（+ +）/ /阴性（阴性（） 标本标本+ +甘露醇甘露醇 白葡菌白葡菌+ +甘露醇甘露醇 阳性（阳性（+ +）/ /阴性（阴性（）芽孢产芽孢细菌的种类 菌体 （营养细胞）芽胞 培养基培养基生长现象生长现象用途用途 固体平板固体平板 固体斜面固体斜面液体液体半固体半固体细菌在培养基上生长现象细菌在培养基上生长现象 二、药敏试验（二、药敏试验（纸片扩散法）纸片扩散法）材料：材料：方法：方法：普通琼脂平板普通琼脂平板(2块平板块平板/组）组）大肠杆菌、金葡菌大肠杆菌、金葡菌氯霉素、青霉素、碘酒、结晶紫氯霉素、青霉素、碘酒、结晶紫 大肠杆菌大肠杆菌葡菌球菌葡菌球菌氯氯青青庆庆链链氯氯青青庆庆链链371824hG+G