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文档简介

1、分子生物学实验作业用分子生物学方法鉴定菌株专业：姓名：学号：生物化工王晓娜1043111039鉴定一株乳酸菌菌株一、实验目的和方法采用RAPD指纹图谱方法鉴定一株乳酸菌菌株二、实验材料2.1 菌株实验给定的菌株2.2 试剂Taq DNA聚合酶、DNA电泳buffer、弓I物、dNTR模板DNA2.3 仪器台式离心机，PCR仪，稳压稳流电泳仪，紫外检测仪，凝胶成像 系统三、实验步骤3.1制备细菌DNA羊品收集菌悬液于1.5mlepp管中，5 OOOr/min 离心5min。去上清， 在沉淀中加入567微升TE缓冲液、30微升10%的SDS5微升10mg/ml 的溶菌酶后，37C水浴3h。再加入3

2、微升20mg/ml的蛋白酶K, 37C 水浴 lh。加入 100 微升 5mol/l NaCl, 80 微升 CTAB/NaC溶液，65C 水浴10min。加入等体积的氯仿/异戊醇，12 000r/min离心5min。 取上清,加入等体积酚氯仿异戊醇,12 000rmin 离心 5min。取上清,加入 2 倍体积的冰乙醇, 12 000r/min 离心 10rnin ,沉降 DNA去上清，将沉淀吹干，用100微升TE缓冲液(pH8. 0)溶解。取 l微升DNA样品，稀释200倍后，紫外测定0D260和0D280。选取浓度1.8 < 0D& /0C280<2. 0的样品。然后，将DNA浓度稀释至48ng/ 4作为 模板备用。3.2 PCR 反应扩增体积为 25 4 (含 TapDNA聚合酶 2u,10x PCRreaction buffer 24, dNTP 24,弓I物l 4，模板DNA 14。扩增程序为：94C预变 性 5min, 94C变性 1min, 38 C复性 lmin , 72C延伸 2min，进行 40 个循环后72C延伸10min。取12 4扩增产物进行电泳，电压为100V, 琼脂糖凝胶为l %(0 . 5XTBE)电泳30 40min,用凝

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