临床耐多粘菌素CRE菌株的分子流行病学研究

1、会计学1临床耐多粘菌素临床耐多粘菌素CRE菌株的分子流行病菌株的分子流行病学研究学研究第1页/共34页MRSA碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌 （carbapenem-resistant Enterobacteriaceae，CRE）第2页/共34页第3页/共34页一位49岁的妇女2016年4月因尿路感染症状在宾夕法尼亚州的部队医院求医，分离到一种能够抵抗多种药物的大肠杆菌菌株，携带有15种不同的耐药基因，集中在两种能在细菌之间轻松移动的质粒上。一个质粒含有CTX-M型超广谱 -内酰胺酶；另外一个就是含有新发现的可怕的mcr-1基因（导致多粘菌素抗药性的基因）。第4页/共3

2、4页美国现首例美国现首例“超级细菌超级细菌”全球无任何抗生素可治！全球无任何抗生素可治！Colistin Resistance1、多粘菌素之所以能坚挺到现在，是由于它从抗生素早期开始就是一种毒性药物，由于副作用的缘故而很少被列入处方之中；正因为其很少被使用，细菌才没能适应它。2、在此之前，许多细菌已经能够耐受几乎所有的抗生素，而多粘菌素则是我多粘菌素则是我们最后的防线们最后的防线。3、而MCR-1之所以这么麻烦，是因为它为细菌提供了抵抗多粘菌素的能力。第5页/共34页1、 Walter Reed陆军研究所的Patrick 和Walter Reed国家军事医疗中心的Kurt 在报告中表示，这项发

3、现“预示着真正的泛耐药病原菌即将出现” 。2、“我们有身处后抗生素世界的风险”， 美国疾病控制和预防中心(CDC)主任弗里登(Tom Frieden) 。3、美国疾控中心人畜共患传染病研究部门主任Beth Bell表示，疾控中心已经开始与宾夕法尼亚卫生局合作研究：“这位女士是如何携带上这种有着高度耐药性的细菌？”4、宾夕法尼亚州州长Tom Wolf声明确认了这起病例，以及疾控中心参与联合调查一事。第6页/共34页1 Hancock RE, Scott MG. The role of antimicrobial peptides in animal defenses. Proc Natl Aca

4、d Sci USA, 2000, 97: 8856-8861.细菌对多粘菌素耐受的传统机制细菌对多粘菌素耐受的传统机制第7页/共34页细菌对多粘菌素耐受的传统机制细菌对多粘菌素耐受的传统机制第8页/共34页第9页/共34页very serious phenomenon that occurs nowadays Emergence of the mcr-1 colistin resistance gene in carbapenem-resistant Enterobacteriaceae（CRE)第10页/共34页一、有没有耐多粘菌素的肠杆菌科细菌？二、如有耐受菌是否同时又是CRE菌株？三、菌

5、株是否保存？CRE (碳青霉烯类碳青霉烯类耐药肠杆菌科耐药肠杆菌科细菌细菌)+mcr-1的研究的研究第11页/共34页 对我院（苏州大学附属第二医院）对我院（苏州大学附属第二医院）2011-2015 年年的多粘菌素耐受的多粘菌素耐受菌菌株株进行了进行了调查分析调查分析，发现，发现： 1、有4株分离自住院病人的肠杆菌科细菌携带MCR-1质粒，其中2株为MCR-1质粒整合与含NDM-5 (New Delhi metallo-lactamase-5) 质粒的CRE菌株； 2、 整合MCR-1质粒的CRE菌株表现出对包括多粘菌素、亚胺培南、美洛培南在内的几乎所有抗菌药物均耐药，感染该菌株的患者最终由于

6、抗生素治疗无效而导致死亡。 第12页/共34页大肠埃希菌J53AZ-R SZ03,SZ04 +NaN3 +多粘菌素37过夜单菌落SZ03,SZ04 大肠埃希菌J53AZ-R(1ml)LB+NaN3 (1ml)LB+多粘菌素37,250r/min1618h鉴定各取100l菌液(2ml)LB+NaN3+多粘菌素37,100r/min56h100l菌液+NaN3+多粘菌素37过夜各取100l菌液(2ml)LB+NaN3+多粘菌素37,100r/min56h100l菌液+NaN3+多粘菌素37过夜成功获得成功获得mcr-1的转移结合子，的转移结合子，证实证实了了 MCR-1 质粒能够质粒能够水平水平转

7、移至转移至受体菌。受体菌。 PCR质粒复制子分型质粒复制子分型：MCR-1质粒为质粒为IncI2和和IncX4第13页/共34页中科院JCR分区：一区影响因子：22.433第14页/共34页第15页/共34页第16页/共34页第17页/共34页1、高CRE流行地区（北部：北京；东部：苏州；南部：广州）2、低流行地区（西北：银川和西南：成都）3、边境地区的云南省昆明市。云南与缅甸、老挝、越南接壤，又靠近印度和孟加拉国（NDM高发病率）。6家三甲附属医院第18页/共34页美国Rutgers大学公共卫生研究院Kreiswirth教授纽约斯隆凯特林纪念医院汤一苇教授第19页/共34页第20页/共34页

8、碳青霉烯酶基因mcr-1KPC+NDM+IMP+VIM+多阳阴性菌株数1346918731595第21页/共34页肺炎克雷伯菌管家基因(rpoB,gapA,mdh,pgi,phoE,infB,tonB)大肠杆菌管家基因(adk,fumC,gyrB,icd,mdh,purA,recA) SZ03：ST25 SZ04：ST25 CDA6：ST167BJ10：ST156BJ13：ST457 第22页/共34页耐药基因耐药基因接合转移接合转移药敏试验药敏试验 CDA6、BJ10、SZ03和SZ04携带的NDM-5，与NDM-1相比，该变异株具有更高的碳青霉烯酶活性。 BJ13的碳青霉烯酶基因检测结果为

9、阴性，但是它含blaCTX-M-15和blaCMY-2，并在孔蛋白基因ompC的303位氨基酸处有一个提前终止密码子，可以解释其碳青霉烯酶耐药性。 CDA6、BJ10、SZ03和SZ04的mcr-1基因可以通过接合转移法转入J53(AZ-R)中，而而BJ13的的mcr-1基因难以转移。基因难以转移。 CDA6、BJ10、SZ03、SZ04菌株的blaNDM-5基因也可通过接合转移法转入大肠杆菌J53(AZ-R)中。mcr-1基因的转移仅与blaNDM-5整合的IncX3质粒紧密相关？ 所有的mcr-1转移接合子都只对粘菌素耐药，而对其他抗生素均敏感，表明mcr-1的质粒上不含有其他耐药基因;

10、blaNDM-5转移接合子都对除氨曲南以外的所有-内酰胺类耐药。CRE+MCR-1菌株菌株第23页/共34页第24页/共34页1、这种耐多粘菌素的这种耐多粘菌素的MCR-1质粒蔓延到了质粒蔓延到了CRE菌株，菌株，产生产生泛耐药株，提示泛耐药株，提示我国我国CRE菌株的耐药现状异常严峻菌株的耐药现状异常严峻，若想打赢抗生素耐药性这场仗，就迫，若想打赢抗生素耐药性这场仗，就迫切需要更好的监测和管理。切需要更好的监测和管理。结论与展望结论与展望2、MCR-1的表达调控仍不明确，需要进一步的深入研究！的表达调控仍不明确，需要进一步的深入研究！（但重视程度远远不够）（但重视程度远远不够）第25页/共34页第26页/共34页第27页/共34页第28页/共34页一、有没有耐多粘菌素的肠杆菌科细菌？二、如有耐受菌是否同时又是CRE菌株？三、菌株是否保存？CRE (碳青霉烯类碳青霉烯类耐药肠杆菌科耐药肠杆菌科细菌细菌)+mcr-1的研究的研究第29页/共34页第30页/共34页肺炎克雷伯菌管家