[高三理化生]培养基ppt课件

1、实验三实验三 常用培育基的制备、灭菌与常用培育基的制备、灭菌与消毒消毒实验目的：了解培育基的配制原理实验目的：了解培育基的配制原理 并且掌握配制培育基的普通方法和步骤并且掌握配制培育基的普通方法和步骤 培育基是人工配制的，适宜微生物生长繁衍或产生代谢产物培育基是人工配制的，适宜微生物生长繁衍或产生代谢产物的营养基质的营养基质原那么原那么: :目的明确目的明确; ;营养协调营养协调; ;控制控制pHpH、浸透压等条件、浸透压等条件; ;经济节经济节约约方法：查阅文献方法：查阅文献; ;精心设计精心设计; ;实验比较实验比较 步骤：称量、熔化、调步骤：称量、熔化、调PHPH、过滤、分装、过滤、分装

2、、 加塞、包扎、灭菌、冷却、无菌检查加塞、包扎、灭菌、冷却、无菌检查 培育基种类培育基种类: :一、按成份的不同划分一、按成份的不同划分 天然培育基、合成培育基、半天然培育基、合成培育基、半合成培育基合成培育基二、按培育基的物理形状划分二、按培育基的物理形状划分 固体培育基、液体培育基、半固体培育基、液体培育基、半固体培育基固体培育基三、按培育基用途划分三、按培育基用途划分 根底培育基、加富培育基、鉴根底培育基、加富培育基、鉴别培育基、选择培育基别培育基、选择培育基 牛肉膏蛋白胨培育基n牛肉膏蛋白胨培育基是一种运用最广泛和牛肉膏蛋白胨培育基是一种运用最广泛和最普通的细菌根底培育基。其配方如下：

3、最普通的细菌根底培育基。其配方如下：n牛肉膏牛肉膏5g5g，蛋白胨，蛋白胨10g10g，NaCl5gNaCl5g，琼脂，琼脂151520g20g，水，水1000mL1000mL，pH7.0pH7.07.2(7.2(后调后调) )高氏1号培育基n高氏高氏1 1号培育基是用于分别和培育放线菌的号培育基是用于分别和培育放线菌的合成培育基。其配方如下：合成培育基。其配方如下：n可溶性淀粉可溶性淀粉20g20g，KNO3 1gKNO3 1g，NaCl 0.5gNaCl 0.5g，K2HPO43H2O 0.5gK2HPO43H2O 0.5g，MgSO47H2O 0.5gMgSO47H2O 0.5g，FeS

4、O47H2O 0.01gFeSO47H2O 0.01g，琼脂，琼脂151520g20g，水，水1000mL1000mL，pH7.4pH7.47.67.6。 查氏合成培育基n查氏合成培育基是用来分类和培育霉菌的查氏合成培育基是用来分类和培育霉菌的培育基培育基,其配方如下：其配方如下：nNaNO3 3g,K2HPO4 1g, KCl 0.5g,n MgSO4.7H2O 0.5g,FeSO4 0.01g,蔗糖蔗糖 30g,水水1000mL,pH自然自然麦芽汁培育基n用来培育酵母菌用来培育酵母菌, ,干麦芽粉加干麦芽粉加4 4倍水倍水, ,在在50-50-6060保温糖化保温糖化3-43-4小时，运用

5、碘液实验检查小时，运用碘液实验检查, ,至糖化完全为止至糖化完全为止, ,调整糖液浓度调整糖液浓度, ,煮沸后，煮沸后，过滤，调过滤，调pHpH为为6.06.0。消毒与灭菌消毒与灭菌消毒：消灭病原菌和有害微生物的消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体营养体灭菌：杀灭一切微生物的营养体，灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。芽胞和孢子。方法：方法：物理的方法：加热、过滤、辐射物理的方法：加热、过滤、辐射化学的方法：用化学试剂抑制或杀化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏细菌代谢机灭微生物。主要破坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物能。如重金属离子，磺胺类药物及抗生素等。及抗生素等

6、。 加热法：加热法：干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌1 1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属器、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属器具如镊子等，试管口和瓶口，涂布用玻璃具如镊子等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。棒。2 2、热空气灭菌利用高温枯燥空气、热空气灭菌利用高温枯燥空气160160170170加热灭菌加热灭菌1 12h2h，适用于玻璃器皿，适用于玻璃器皿和培育皿等。原理加热使蛋白量变性，与和培育皿等。原理加热使蛋白量变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。凝固越快。3 3、本卷须知：、本卷须知： 1 1

7、培育基、橡胶制品、塑料制品不能用培育基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；此法； 2 2温度控制在温度控制在180 180 ； 3 3物品不能太挤；物品不能太挤； 4 4温度降至温度降至70 70 时才开箱门。时才开箱门。 湿热法湿热法 ：原理：由于湿热中菌体吸水，蛋原理：由于湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白质含水白质容易凝固，因蛋白质含水量添加，所需凝固温度降低；量添加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜热存在。所以湿热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。效果比同温度下干热好。高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌法：1 1、设备：高压灭菌锅、设备：高压灭菌锅2 2、时间长短根据灭菌物品的种、

8、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。类和数量不同有所变化。3 3、适用于培育基、任务服、橡、适用于培育基、任务服、橡胶物品等的灭菌，也可用于玻胶物品等的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。璃器皿的灭菌。4 4、本卷须知：、本卷须知： 1 1冷空气彻底排除；冷空气彻底排除；2 2加加水；水；3 3压力降为压力降为“0 0时方可时方可翻开。翻开。 n在运用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内在运用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除能否完全极为重要，由于空冷空气的排除能否完全极为重要，由于空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力

9、下，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温度的关系见表度的关系见表2 常压蒸汽灭菌： 对于不宜用高压蒸汽灭菌的培育基如明胶培育基、牛乳培育基，含糖培育基等可采用此法。彻底灭菌那么采用间歇灭菌方法。 煮沸灭菌法： 适用注射器和解剖器皿，时间1015min， 超高温杀菌 -150C和2-8s对牛乳和其它液态食品灭菌。 优点 ：坚持食品价值和营养成分。 过滤除菌：过滤除菌： 原理：介质在有压力时阻隔微生物。原理：介质在有压力时阻隔微生物。 适用范围：许多资料如

10、血清、抗生素及糖溶液采用此法。适用范围：许多资料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。 设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。 优缺陷：不破坏培育基成分，只适用少量滤液。优缺陷：不破坏培育基成分，只适用少量滤液。 本卷须知：本卷须知：1 1、压力适当；、压力适当； 2 2、无菌条件下进展；、无菌条件下进展； 3 3、防止浸透景象。、防止浸透景象。 辐射灭菌： 原理：紫外线波长在200300nm，具有杀菌作用，以265-266杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可产生臭氧和过氧化氢。杀菌效能与强度和时间的乘积成正比。 缺陷：穿透力不大。距照射物1.2m为宜。 运用：无菌室，医院

11、。 本卷须知：对眼睛和皮肤有刺激作用。 化学药品灭菌： 原理：运用化学制剂破坏细菌代谢机能。 杀菌剂如重金属离子； 抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。 留意：与药品的浓度高低，时间长短，微生物种类以及微 生物所处的环境有关。 常用化学杀菌剂有：乙醇、醋酸、石碳酸 福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等 分别与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程。 为什么要进展纯培育：平板上的单一菌落并不一定保证是一种菌。 常用的分别、纯化方法：单细胞挑取法、稀释涂布平板法稀释混合平板法、平板划线法 实验四 微生物的分别、纯化及培育技术稀释涂布平板法 ：步骤： 1、倒平板：牛肉膏蛋白胨培育基，高

12、氏I号培育基，查氏培育基冷却至55-60时，混匀后倒平板，牛肉膏蛋白胨培育基倒4皿，高氏I号培育基和查氏培育基各倒3皿。 2、制备污水稀释液：10g土样，参与90ml无菌水中，在三角瓶中振摇20min。取0.5ml 参与盛有4.5ml无菌水的试管中，以此类推，制成不同稀释度。 3、涂布：将上述每种培育基平板底面标志稀释度，然后用无菌吸管从最后三种稀释度，即10-4、10-5和10-6的试管中汲取0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。 4、培育：高氏I号和查氏倒置培育于28培育箱中培育3-5days，牛肉膏蛋白胨琼脂培育基在37培育1-2days。 5、挑菌落：转至斜面，检查能否一致，保管。 平

13、板划线法： 1、倒平板，标志培育基称号，编号和实验日期。2、划线方法 稀释混合平板法 ：1、先加菌2、倒平板时留意培育基温度3、混合均匀 微生物培育技术微生物培育技术1、斜面接种、斜面接种2、液体培育基接种、液体培育基接种3、穿刺接种、穿刺接种将已接种的斜面、半固体和液体培育基将已接种的斜面、半固体和液体培育基放置培育箱中培育将生长好的菌种用放置培育箱中培育将生长好的菌种用牛皮纸包好，置牛皮纸包好，置4冰箱中保管。冰箱中保管。察看菌落形状并记录序号 来源 大小 外形 边缘 颜色 外表 代谢物 种类实验五：放线菌及霉菌形状察看实验五：放线菌及霉菌形状察看目的要求目的要求1.1.了解放线菌、霉菌的

14、形状察看的原了解放线菌、霉菌的形状察看的原理。理。2.2.学习并掌握察看放线菌、霉菌形状学习并掌握察看放线菌、霉菌形状的操作方法。的操作方法。3.3.初步了解放线菌、霉菌的形状特征。初步了解放线菌、霉菌的形状特征。放线菌是一群丝状，放线菌是一群丝状，G+G+的细菌，在气生菌的细菌，在气生菌丝末端构成孢子。丝末端构成孢子。细胞壁主要成分是肽聚糖，最适细胞壁主要成分是肽聚糖，最适pHpH与细菌与细菌类似。主要以孢子方式进展无性繁衍。类似。主要以孢子方式进展无性繁衍。其其DNA DNA 碱基组成中碱基组成中GCGC含量特别高。超越任含量特别高。超越任何知的细菌。何知的细菌。 许多临床运用的抗生素都由

15、链霉菌种产生。许多临床运用的抗生素都由链霉菌种产生。 放线菌放线菌(Actinomycetes)分生孢子丝分生孢子丝琼脂外表琼脂外表基内菌丝基内菌丝气生菌丝气生菌丝The cross section of an actinomycete colony showing the substrate mycelium 基内菌丝基内菌丝and aerial mycelium气生菌丝气生菌丝 with chains of conidiospores分生孢子分生孢子分生孢子丝分生孢子丝琼脂外琼脂外表表基内菌丝基内菌丝气生菌丝气生菌丝The cross section of an actinomycete

16、colony showing the substrate mycelium基内菌丝基内菌丝 and aerial mycelium 气气生菌丝生菌丝with chains of conidiospores分生孢子分生孢子n放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，经过横割分列的方式产生成串的分生孢孢子丝，经过横割分列的方式产生成串的分生孢子。孢子丝形状多样，有直、弯曲、钩状、螺旋子。孢子丝形状多样，有直、弯曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形状。孢子也有球形、椭圆形、状、轮生等多种形状。孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。它们的形状构造都是放线菌

17、杆状和瓜子状等等。它们的形状构造都是放线菌分类鉴定的重要根据。分类鉴定的重要根据。 放线菌的菌落早期绒状同放线菌的菌落早期绒状同细菌菌落月牙状类似，后期构成孢子菌落呈粉状、细菌菌落月牙状类似，后期构成孢子菌落呈粉状、枯燥，有各种颜色呈同心圆放射状。枯燥，有各种颜色呈同心圆放射状。链霉菌的各种孢子丝构造链霉菌的各种孢子丝构造链霉菌的分别链霉菌的分别 ： pH中性偏碱中性偏碱 喜干含水少喜干含水少 采用含各种无机盐的选择性培育基采用含各种无机盐的选择性培育基知放线菌可以产生500多种抗生素。大多数抗生素对不同的细菌有独特的疗效有50多种被实践运用Antibiotics放线菌放线菌Actinomyc

18、etes 霉菌霉菌 ( molds)( molds)n是丝状真菌的总称是丝状真菌的总称,即即“发霉的真菌。通常指菌发霉的真菌。通常指菌丝体比较兴隆而又不产生大型子实体的真菌。常丝体比较兴隆而又不产生大型子实体的真菌。常在潮湿的气候下大量生长繁衍。在潮湿的气候下大量生长繁衍。形状特征形状特征 Morphological Morphological characteristics characteristics n属异养型真核生物，具有丝状或管状构造，单个分支称为菌丝。菌丝构成的网络状构造称为菌丝体。n营养菌丝vegetative mycelium：汲取营养n气生菌丝aerial mycelium

19、n繁衍菌丝:孢子丝，进展繁衍。分类分类classificationclassificationn有隔菌丝：有隔菌丝中有横隔膜将菌丝分隔成多个细胞，在菌丝生长过程中细胞核的分裂伴随着细胞的分裂，每个细胞含有一至多个细胞核。横隔膜可以使相邻细胞之间的物质相互沟通。如曲霉和青霉。n无隔菌丝：菌丝中无横膈膜，整个细胞是一个单细胞，菌丝内有许多核，在生长过程中只需核的分裂和原生质体质量的添加，没有细胞数目的增多。如毛霉和根霉。 nonseptate(2)septate繁衍方式n无性繁衍：无性繁衍：n芽生孢子芽生孢子n节孢子节孢子n孢囊孢子孢囊孢子n后垣孢子后垣孢子n分生孢子分生孢子n有性繁衍：有性繁衍：

20、n卵孢子卵孢子n接合孢子接合孢子n子囊孢子子囊孢子Sporangiospores 孢囊孢子Sporangiospores are formed within a sporangium 节孢子Arthrospores分生孢子分生孢子ConidiosporesConidiospores卵孢子卵孢子OosporesOosporesantheridiumoospheresoosporesoogoniumOospores formation接合孢子接合孢子 Zygospores Zygospores接合孢子接合孢子构成过程构成过程子囊孢子子囊孢子 AscosporesAscospores几种常见霉菌属主

21、要特征分布作用与用途根霉属菌丝无隔,单细胞迅速蔓延,有假根,孢子囊呈黑色,产生孢子囊和接合孢子常长在淀粉类食品上如馒头、面包、甘薯等能将淀粉转化为糖，用于生产糖化酶，酿造甜酒等曲霉属菌丝分隔，分生孢子梗顶端膨大，顶囊上生辐射状小梗菌落疏松、颜色多样空气、谷物、土壤和各种有机物上分解淀粉和蛋白质能力强，用于制曲、制醋、生产柠檬酸、酶制剂及糖化饲料等青霉属菌丝分隔，孢子梗呈扫帚形，菌落由紧密到疏松，多呈蓝绿色空气、土壤及物品上，腐烂的柑橘上更多青霉素产生菌，也用于制备农用抗生素和发酵饲料根霉 根霉的形状构造曲霉曲霉曲霉的形状构造左侧分生孢子梗具有一层小梗；右侧分生孢子梗具 有二层小梗 青霉 青霉的

22、形状构造 A单轮型 B非对称型 C对称二轮型实验内容n人们设计了各种培育和察看方法，人们设计了各种培育和察看方法，这些方法的主要目的是为了尽能够这些方法的主要目的是为了尽能够坚持放线菌和霉菌自然生长形状下坚持放线菌和霉菌自然生长形状下的形状特征。本实验采用插片法。的形状特征。本实验采用插片法。插片法插片法: 倒平板倒平板插片插片接种接种培育培育镜检镜检记录绘图记录绘图 压印法压印法: 倒平板倒平板划线接种划线接种挑取菌落挑取菌落加盖加盖玻片玻片镜检镜检记录绘图记录绘图埋片法埋片法: 倒琼脂倒琼脂切槽切槽接种接种培育培育镜检镜检记录绘图记录绘图 n倒平板倒平板 将培育基熔化后，倒将培育基熔化后，

23、倒10-1210-12毫升左右于灭菌培育皿毫升左右于灭菌培育皿内，凝固后运用内，凝固后运用. . n插片插片 将灭菌的盖玻片以将灭菌的盖玻片以4545度角插入培育皿内的培育基度角插入培育皿内的培育基中，插入深约为中，插入深约为1/21/2或或1/31/3。n 接种与培育接种与培育 用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，放置放置2828培育培育3 37 7天。天。n 察看察看 培育后菌丝体生长在培育基及盖玻片上，小心用培育后菌丝体生长在培育基及盖玻片上，小心用镊子将盖玻片抽出，悄然擦去生长较差的一面的镊子将盖玻片抽出，悄然擦去生长较差的一面的菌丝

24、体，将生长良好的菌丝面子向的载玻片，压菌丝体，将生长良好的菌丝面子向的载玻片，压放于载玻片上。直接在显微镜下察看。放于载玻片上。直接在显微镜下察看。 关键步骤及本卷须知关键步骤及本卷须知n倒平板要厚一些，接种时划线要密。倒平板要厚一些，接种时划线要密。n插片时要有一定角度并与划线垂直。插片时要有一定角度并与划线垂直。n察看时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到察看时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，改换高倍镜察看。适当视野，改换高倍镜察看。 n假设用假设用0.1%0.1%美蓝对培育后的盖玻片进展染美蓝对培育后的盖玻片进展染色后察看，效果会更好。色后察看，效果会更好。 实验六、菌种保藏 几种常用

25、的保藏方法： 1、传代培育法 保藏的菌种经过斜面、穿刺或疱肉培育基用于厌氧细菌培育好后，置4C冰箱中存放，定期进展传代培育、再存放。 可用胶塞替代棉塞或在斜面上覆盖一层无菌液体石蜡来进一步延伸保管期。 2、载体法 使生长适宜的微生物吸附在一定的载体上进展枯燥。 常用的载体有土壤、砂土、硅胶、明胶、麸皮、磁珠和滤纸片等。 3、悬液法 将细菌、酵母菌细胞悬浮在一定的溶液中保管。 溶液包括蒸馏水、糖溶液、磷酸缓冲液、食盐水等。 4、冷冻法 使菌种一直存放在低温环境下的保藏方法。包括低温法和液氮法。 此法关键是要抑制细胞的冷冻损伤。留意控制降温速率及维护剂的运用。 5、真空枯燥法 这类方法包括冷冻真空

26、枯燥法和L枯燥法。 冷冻真空枯燥法是将要保藏的微生物样品先经低温预冻，然后在低温形状下进展减压枯燥。 L-枯燥法那么不需求低温预冻样品，只是使样品维持在1020C范围内进展真空枯燥。 操作方法 1、斜面保藏法 将菌种转接在适宜固体斜面培育基上，待其充分生长后，用牛皮纸将棉塞部分包扎好棉塞换成胶塞效果更好，置4C冰箱中包藏。 保藏时间依微生物的种类而定。霉菌、放线菌及芽孢菌保管24个月移种一次，酵母菌间隔两个月，普通细菌一个月，假单胞菌两周传代一次。 此法优点是操作简单、运用方便，缺陷是保藏时间短、易被污染。 2、液体石蜡保藏法 将无菌石蜡加在已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端1CM为准，使菌种与空气隔绝。 将试管直立，置低温或室温下保管。 此法适用且效果较好。霉菌、放线菌、芽孢菌可保藏两年以上，酵母菌可保藏12年，普通细菌也可保藏1年左右。 3、穿刺保藏法 按穿刺接种方式培育菌种，菌种长好后用胶塞封严，置4冰箱存放。 4、砂土管保藏法 1河砂处置 取河砂假设干参与盐酸10% ，加热煮沸30min除去有机机质。倒去盐酸溶液，用自来水冲洗至中性，最后一次用蒸镏水冲洗，烘干后用40目筛子过筛，弃去粗颗粒，备用。土壤处置 取非耕作层不含腐殖质的痩黄土或红土，加