葛根芩连滴丸的药理毒理研究

1、葛根岑连滴丸的药理毒理研究摘要葛根黄岑黄连汤是为太阳病误下而致邪热下利的救误z方同时，要把握病位在胃 肠，性质属湿热，病机因陷下，治法宜外解如果湿热久积胃肠，菌株孳生，毒侵肌表 而热邪不退者，同样适宜另外，时邪趋里内迫于肺而致咳喘证者，服z效果亦住。关键字中药滴丸剂、抗菌活性胃肠道刺激、致敏、急性毒性、伤寒论、中药毒性、文献 研究正文“葛根黄茶黄连汤，再加廿草共煎尝，邓陷阳明成热痢，清里解表保安康。” 歌诀屮所说，即葛根黄菩黄连汤，简称为葛根等连汤。它是治疗急性腹泻的经典名方, 其卓越的清热止泻功效，不仅受到历代医家的普遍重视，也为现代临床广泛应用，现已 被制成多种剂型的中成药，疗效可靠，应用

2、方便。急性腹泻夏季常见，治疗腹泻的药物便是很多家雇的常备药。有些人一腹泻就 赶 紧用止泻 药，却不知，同是腹泻，致病机理却各不相 同，只 冇对症下 药，才能 起到治标又治本的效果。脾虚泄泻证是一种以腹泻、体质最下降、畏寒、倦怠等为主 要表现的屮医病证，病证范畴较广，包括西医的慢性腹泻、溃疡性结肠炎、肠易激性综 合征等多种疾病。它的病因和发病机制复杂，目前尚缺乏治疗效果比较好的西药。经 过系统临床观察.腹泻康具有健脾益气、缓急止痛、涩肠止泻等作用.临床缓解治愈率 达90%以上.因此本文观察它的治疗作用.为其临床应用提供试验依据。1.试验材料11药物及制剂药品葛根、黄苓、黄连、甘草等。按比例组成复

3、方。制成滴丸。试剂乙醇、硫化钠、生理盐水、2, 4-二硝基氯苯、十六醇、单硕脂酸廿油酯、液体 石蜡、羊毛脂、司盘80、尼泊金乙酯、氮酗、二卬基亚佩、氯化顿、硫酸等。1.2试验仪器电热恒温水浴锅、恒温磁力搅拌器、回流装置、真空冷冻干燥机（slphai-5）、离心 机、高压灭菌器、无菌操作台、冰箱、培养皿、蒸发皿。麦氏比浊标准管（取1.175% 氯化顿（）.5曲与1%硫酸99.5ml,充分混匀，装于与接种菌液管径相同的试管中）。1.3试验动物白色兔，体重15002000g；昆明系小白鼠，1822g；白色豚鼠，200-250go试验前临 床健康检查均止常。1.4菌种及培养基 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌

4、、无乳链球菌、停乳链球菌、牛棒状杆菌、革兰氏阴性小 杆菌6种病原菌。由琼脂培养基、营养肉汤培养基、血清琼脂培养基、血清肉汤培养 基。2 方法步骤2.1中药滴丸的制备2.2体外抗菌试验221菌液稀释川灭菌的接种环分别挑取血清琼脂斜面保存的无乳链球菌和停乳链球菌少 许，接种于血清琼脂培养基屮；再分别挑取营养琼脂斜血保存的金黄色匍萄球菌、人肠 杆菌、牛棒状杆菌和革兰氏阴性小杆菌少许，接种于营养肉汤中。将接种后的试管置 37摄氏度温箱，培养16-18h,取出接种管分别校正菌液浓度，使其相当于0.5麦氏比 浊标准管，再用营养肉汤将细菌悬液稀释为105 cuf/ml的含菌量，备用（链球菌用血 清肉汤稀释）

5、。稀释后的菌液应在15min内接种。2.2.2体外抗菌活性的测定 采用试管二倍稀释法，测定复方屮药对六种致病菌的mic和 mbco去8支灭菌试管,从16管各加2ml无菌营养肉汤（链球菌用血清肉汤）,然后 于第一支试管加入2ml的复方中药提収液，混匀取出2ml加入第二支试管中，再重复 加入第三支中，以此类推，至笫六支试管，充分混合弃去2ml, 16管的中药含量分别 为500、250、125、62.5、31.3、15.7g/lo笫八支加笏液2ml做对照。第七支加营养肉 汤2ml作为空白对照。16和第八管分别加稀释菌液0.05ml,加完样充分混匀，置3637 摄氏度温箱，培养16-18小时后观察结果

6、。凡无浑浊变化的的药物最低稀释浓度即为该 测试菌的最低抑菌浓度。再将肉眼观察无细菌牛长的所有试管,划线接种于营养琼脂（链 球菌接种血液琼脂），置36-37摄氏度培养24h后观察记录，以菌落数不超过5个的药 物最低稀释浓度为该菌的最小杀菌浓度。2.3急性毒性试验采用karber 计算ld50,來评价复方屮药的急性毒性强度。取小鼠，雌雄各半，饲养观察7d后，试验前禁食10ha在正式试验而，用少量小鼠， 设计若干个剂量组作预备试验，每组2只，以2倍量递增或递减，经口染毒，确定ld100 和ld0。在预备试验的ld100和ld0z间，设计5个剂量组，随机分组，每组动物数 10只。各组之间剂最差距按等比

7、级数1.4设计。染毒后观察7d小鼠的屮毒情况，主要 观察指标为小鼠出现屮毒的症状、死亡数和死亡时间。表1复方中药对"6种致病菌体外抗菌活性表2复方屮药提取液经口染毒急性毒性试验统计结果组别剂 m(mg/kg)动物数(n)死亡数死亡率(p)存活率(q)1500010001.0700010100.9398001030.30.74137201070.70.3519208101()1.00临床观察与病理解剖检表明，高剂量纽小鼠死前表现精神抑郁、拱背，进而兴奋、全身活性菌种金葡萄球菌无乳链球菌停乳链球菌牛棒状杆菌人肠杆菌g-小杆菌m1c31.362.562.512562.5125mbc62.5

8、62.562.5125125125颤抖、呼吸困难、窒息死广。解剖肝脏肿大，实质器官淤血、可视黏膜发绡，其他肉眼 未见显常。按照化学物质急性毒性剂量分级标准，ld50大于5000mg/kg,属丁实际无 毒物质，由其制成的滴丸是安全无毒的。2.4健康sd大鼠70只随机分成7组.即对照组模型组.柳氮磺胺毗唳0.5 g/kg组.葛根 苓连丸0.75 g/kg组.葛根苓连滴丸1,6. 0.8. 0.4 g/kg剂量组.每组10只雌雄各半。造模: 参照文献1方法制备。按20 ml/kg灌服200 g/l番泻叶浸剂j次/&连续7 *在灌 服3d后，禁食不禁水32 h,o造模同时每天在给200 g/l

9、番泻叶浸剂4 h后给予相应药物 治疗7 0,笫8天检测相关指标。稀便率(稀便率=稀便粪粒数/总粪粒数)；胸腺指数=胸腺 质最/体质最、脾脏指数=脾脏质最/体质最：血清d-木糖含最、淀粉酶活性、琥珀酸脱 氢酶比活性。主要观察指标：各组大鼠稀便率、胸腺指数、脾脏指数、血清d-木糖含 量、淀粉酶活性、琥珀酸脱氮酶比活性。统计学分析：实验数据由本文作者采用excel软 件进行统计学分析，结果以x土s表示，采用七检验。备组人鼠一般症状变化造模人鼠第2天出现腹泻、稀便.个别可见血便伴见精神委靡.竖毛.拱背.食欲差.蜷卧少动。给予商物治疗后.精神好转.食欲增强.稀便减少。正常 组大鼠活泼喜动.皮毛光亮无异常

10、。2.2.2各组大鼠稀便率分别记录7 d给治疗药物后 不同时间各纟r的人鼠干、湿粪便粒数.计算稀便率。造模人鼠均岀现稀便，模型组最严 重,柳氮磺胺毗睫0.5 g/kg组、葛根苓连丸075 g/kg组、葛根苓连滴丸16, 0.8, 0.4 g/kg 剂量组均较模型组明显改善，其中葛根苓连丸0.5 g/kg组、葛根苓连滴丸1.6 g/kg齐！j量 组效果最显著。结果见衣3表3各组大鼠稀便率比较组别1 24 h2448 h4872 h72 96 h对照组000.010模型组0.550.610.680.76柳氮磺胺毗i症0. 520. 550. 590. 690.5 g/kg 纽葛根苓连丸0. 390

11、. 430. 420. 530.75 g/kg 组葛根苓连滴丸0. 490. 460.410. 561.6g/kg 组葛根苓连滴丸0. 450. 460. 490. 590.8g/kg 组葛根苓连滴丸0. 550. 530. 520. 580.4g/kg 纟h.组别96-129 h120-144 h144-168 h对照组0.0100模型组0.92().8()0.73柳氮磺胺毗陀0.810. 740. 570.5 g/kg 纟r葛根苓连丸0. 690. 590.410.75 g/kg 组葛根苓连滴丸0. 670.510.431.6g/kg 组葛根苓连滴丸0.8g/kg 组0. 800.670.

12、 64葛根苓连滴丸0.4g/kg 组0. 770. 730. 66综上所述,腹泻康在一定程度上能保护人鼠肠黏膜,改善消化吸收和免疫功能，对脾虚泄泻证具有防治作用。小药在治疗泄泻方面具有标本兼治、壽性小、副反应少等显著 的优势，具有较突出的开发研究价值，本实验反映了腹泻康刈脾虚泄泻证有明显的防治 作用因而值得对其作用机制进一步深入研究。葛根苓连汤配伍抗腹泻药效实验研究目的：通过对葛根苓连汤各配伍与抗腹泻药效之间关系来探讨其配伍规律。方法：运用正交设计方法，用墨汁为显色剂，小鼠小肠推进率为指标;用番泻叶造成小鼠腹泻模型，以腹泻次数为指标，观察葛根苓 连汤各配伍与药效变化之间的关系。结果:葛根苓连汤

13、配伍降低小肠推进率的影响中，以黄连与炙甘草作用为主，葛根与黄苓能拮 抗黄连的作用，炙甘草则增强黄连的作用。减少腹泻小鼠di ,主要作用药物为黄连，苓拮抗黄 连，葛根能增加黄苓的作用，而炙甘草与黄苓黄连配伍后能增强黄连的作用。结论:在葛根苓连汤的抗腹泻药中，其最佳组合为黄连炙甘草。步骤：1材料与方法1. 1 实验材料各配伍组合煎液 由第一军医大学中药新药实验室提供,各配伍煎液中生药量同原方，煎法 相同，煎后均浓缩至39 ml ,使各配伍组合中各组成药生药浓度与全方中各相应生药浓度相 同。番泻叶煎液 狭叶番泻叶（cassia angustifo!ia vah/的小叶，符合2000版中国药 典规定并

14、加工炮制合格的饮片，药材由第一军医大学中医系中药鉴定室鉴定。取番泻叶100 g加水1200 ml ,浸泡15min后，煎煮15min,四层纱布过滤，滤液50 ° c减压浓缩至0. 3g-ml -1 o置于4 ° c冰箱中保存，临用时在水浴锅中加热至25 ° c3 o实验动物 普通级昆明鼠360只，体重1822g, 2 $各半。由第一军医大学动物中心提供, 动物合格证号:2002a029o分笼饲养，每笼10只，自由进食饮水，饲养7 d，选取活动正常，无 稀便者用于实验。半。由第一军医大学动物中心提供，动物合格证号：2002a029o分笼饲养, 每笼10只，自由进食饮

15、水，饲养7 d，选取活动正常，无稀便者用于实验。1 2 方法1. 2. 1药物组合的正交设计伤寒论中葛根苓连汤组成为：葛根15 g、黄苓9g、黄连9g、炙甘草6g。分为4个因素、 2个水平，选用l16 （215 ）表4 。表1拆方分组正交设计因素水平表tab. 1level and factor in orthogonal design水平因素a （葛根）因素b （黄连）因素c （黄苓）因素d （炙甘草）1用药用药用药用药2不用药不用药不用药不用药根据l16 （215 ）表及交互作用表，将相关的因素及交互作用排列如下：（列号与配伍）1 葛根a;2黄连b ;3葛根黄连ab ;4黄苓c;5葛根黄苓

16、ac;6黄连黄苓bc;7葛根黄连黄苓 abc;8炙甘草d;9葛根炙甘草ad;10黄连炙甘草bd;11葛根黄连炙甘草abd;12黄苓炙甘草 cd;13葛根黄苓炙甘草acd;14黄连黄苓炙甘草bcd;15葛根黄连黄苓炙甘草ab2cd。1. 2. 2 小肠推进运动实验 禁食12 h以后，按正交试验设计顺序给予相应药物,给药量 15. 21 ml kg - 1 , 20 min后，墨汁0. 5 mlp只，ig , 20 min后脱颈椎处死，开腹分离肠系 膜，剪取上端至幽门，下端至回盲部的肠管，置于托盘上，轻轻地将小肠拉成直线，测量肠管长 度作为“肠的总长度”，从幽门至墨汁前沿的距离作为“墨汁在小肠内推

17、进距离” 526 , 计算墨汁的推进率。墨汁推进率（%）=墨汁在肠内推进距离（cm） p/jx肠全长（cm） x100 % 表2葛根苓连汤对小鼠小肠推进率的影响tab. 2 effects of gegenqinlian on smai i intestine dr i ve rate试列号号 123456789101112131415推进率11111111111111110.7211±0.042121111111222222220.8300±0.051131112222111122220.6653±0.041541112222222211110.7150

18、7;0.051251221122112211220.8148±0.05161221122221122110.8088±0.047771222211112222110.8192±0.053981222211221111220.8035±0.046392121212121212120.7804±0.533102121212212121210.7857±0.0427112122121121221210.6097±0.0392122122121212112120.6490±0.0668132211221122112210.

19、8355±0.0501142211221211221120.8554±0.038152212112122121120.8918±0.0518162212112211212210.8402±0.0474k1 6. 176 5. 76 6. 356 6. 432 6. 168 6. 472 6. 122 6. 136 6. 152 6. 084 6. 16 6. 16 6. 198 6. 24 6. 135k2 6. 248 6. 672 6. 072 5. 992 6. 26 5. 956 6. 032 6. 288 6. 272 6. 34 6. 264

20、 6. 264 6. 228 6. 184 6. 289r1 - 0. 072 - 0. 912 0. 284 0. 44 - 0. 092 0. 516 - 0. 18 - 0. 512 - 0. 12 - 0. 256 一 0. 104 -0. 104 - 0. 03 0. 056 - 0. 1541. 2. 3 止泻试验 分别禁食不禁水12 h后,按有重复的正交设计实验次序分别ig各配 伍煎液15. 21 mlkg - 1 ,2 h后分别igo. 3 gml - 125 ° c番泻叶水煎液0. 4 ml , 扣于大鼠代谢笼上的烧杯下，代谢笼里放置102中速定性滤纸，连续观察6h

21、，每小时换一次 滤纸。共重复10次526 。按周干南3的方法观察总便数、稀便数和稀便级，并计算腹 泻指数(di) o稀便级的确定:粪便污迹直径< 1 cm为1 ,11. 9 cm为2 , 23 cm为3 , > 3 cm为4。腹泻指数为稀便率与稀便级的乘积。表3 葛根苓连汤对小肠推进率方差分析表rate方差来源离均差平方和自由度均方和f值p值葛根0. 003110. 00311.2440. 267黄连0. 521010. 5210211.960. 000黄苓0. 120010. 120048. 7670. 000炙甘草0. 014010.01405. 7060.018葛根黄连0.

22、050010. 050020. 3810. 000葛根黄苓0. 005910. 00592. 2780. 133黄连黄苓0. 168010. 168068. 3080. 000葛根黄连黄苓0. 019910.01998. 0970. 005葛根炙甘草0. 009610. 00963. 9000. 050黄连炙甘草0. 041210. 041216. 7650. 000葛根黄连炙甘草0. 006810. 00682. 7590. 099黄苓炙甘草0. 007110. 00712. 8730. 092葛根黄苓炙甘草0. 000610. 00060. 2510.617黄连黄苓炙甘草0. 001910

23、. 00190. 8040. 371葛根黄连黄苓炙甘草0. 015010. 01506. 1080. 015误差0. 35401440. 00251. 3 统计学方法:有重复的两水平正交设计方差分析。2 结果葛根苓连汤拆方各配伍对小鼠小肠推进率的影响见表23 ,对番泻叶致泻小鼠腹泻指数 影响见表45。直观分析:根据r1值，可知对番泻叶致泻小鼠的影响中，各单味药的极差的绝对值以黄连、 炙甘草与黄苓最大，葛根最小，从降低小鼠推进率的角度看,以黄连1水平、黄苓2水平与炙甘 草1水平为最佳。从方差分析来看，以主效应黄连、黄苓及炙甘草有统计学意义，其中黄连取 1水平,黄苓取2水平，炙甘草取1水平，而葛根

24、则无统计学意义。从交互作用看,结合表2可 知，葛根黄连、黄连黄苓、葛根黄连黄苓、葛根炙甘草、黄连炙甘草及葛根黄连黄苓炙甘草有交互作用。其中葛根能拮抗黄连的作用，增强黄苓的作用；黄苓能拮抗黄连的作用，对炙甘 草则无明显影响。而炙甘草则能增强黄连的作用。由于葛根能拮抗黄连的作用，故取葛根的2 水平，即全方最佳组合为葛根2黄连1黄苓2炙甘草1。直观分析法，从r值可知各单味药中对小鼠di的影响以黄连与黄苓较大，而葛根与炙甘草 影响较小。以黄连1水平与黄苓2水平为优。表4葛根苓连汤对番泻叶致泻小鼠的腹泻指数的影响tab. 4 effects of gegenqiniian on diarrae inde

25、x试列号号123456789101112131415di11111111111111111.2211±0. 290821111111222222221.2238±0. 355431112222111122220. 3327±0. 230341112222222211110. 8673±0. 231651221122112211221.3119±0. 336361221122221122111.6066±0. 371971222211112222112. 1033±0.446581222211221111222. 0920&#

26、177;0.401792121212121212121.4248±0. 2540102121212212121211.2151±0. 3122112122121121221210. 1500±0. 3187122122121212112120. 2200±0. 5143132211221122112211.4981±0. 2800142211221211221121.5953±0. 2129152212112122121121.9048±0. 4767162212112211212211.8611±0. 521k1

27、 107.5881 66. 5482 105.0422 110. 9669 94. 9931 130. 4604 101.0366 99.4681 98. 6057 102. 8358 100.9049 104. 9640 103.5757 109. 4322 105.2273k2 98. 6916 139. 7315 101.2376 95.3128 111.2866 75.8193 105.2432 106. 8116 107. 6739103. 4439 105. 3747 101.3157 102. 7039 96. 8475 101.0524r1 8. 8966 一 73. 1834

28、 3. 8046 15. 6541 - 16. 2934 54. 6411 - 4. 2066 一 7. 3466 - 9. 0683 - 0. 06082- 4. 4697 3. 6483 0. 8718 12. 5847 4. 1749表5葛根苓连汤配伍对di影响方差分析表on diarrae indextab. 5 ana lysis of variance of effects of gegenqi nlian方差来源离均差平方和 自由度 均方和 f值葛根0. 494710. 49474. 13410. 0439黄连33. 4738133. 4738279. 74270. 0000黄苓

29、1. 5315711. 5315712.79940. 0005炙甘草0. 337010. 33702. 81670. 0955葛根黄连0. 090510. 09050. 75610. 3860葛根黄苓1. 659211. 659213. 86620. 0002黄连黄苓18. 6603118. 6603155. 94550. 0000葛根黄连黄苓0. 110610. 11060. 92430. 3380葛根炙甘草0. 514010. 51404. 29520. 0400黄连炙甘草0. 002310. 00230.019320. 8897葛根黄连炙甘草0. 124910. 12491.043520

30、. 3087黄苓炙甘草0. 083210. 08320. 69520. 4058葛根黄苓炙甘草0. 004810. 00480. 039700. 8424黄连黄苓炙甘草0. 989810. 98988. 27220. 0046葛根黄连黄苓炙甘草0. 109010. 10900. 91040. 3416误差17. 23091440. 1197从方差分析看，对番泻叶致泻小鼠di值中，葛根、黄苓、黄连的影响有统计学意义。从 减少di值看黄连的1水平、葛根与黄苓的2水平优;交互作用中，结合表4可知，葛根黄苓、 黄连黄苓、葛根炙甘草、黄连黄苓炙甘草有统计学意义。其中葛根能增强黄苓的作用，炙甘 草能促进葛

31、根的作用。黄苓拮抗黄连的作用，炙甘草与黄连及黄苓均无明显影响，但是在黄连 黄苓炙甘草配伍中，以黄连炙甘草为优。从番泻叶致泻小鼠的di值角度看，最佳组合为葛根2 黄连1黄苓2炙甘1。3 讨论葛根苓连汤解表清里，清热止痢，用于协热下痢证。有相关文献报道其有显著抗腹泻作用， 并广泛应用于临床。在葛根苓连汤的配伍与抗腹泻药效之间关系的研究中，选用腹泻指数与 小肠推进率两个观察指标。自周干南提出腹泻指数既能反映腹泻质的变化，亦能反映腹泻量 的变化以来，已被广泛应用于止泻药的药效学研究中。而反映肠运动的指标中，无论是炭末法 还是酚红排空实验或是小肠推进实验，其基本原理都是直接或间接衡量小肠平滑肌的运动。

32、本研究中选用墨汁法小肠推进实验，亦是基于此。从方法学上来说，目前对于复方配伍规律的 研究方法中，有单纯用药味进行组合进行研究，亦有均匀设计及正交设计，本研究正是采用正 交设计方法,其要点为比较各因素两水平的研究，而不是单纯的比较各药与对照组间的差异。 早在五十年代对葛根、黄连、黄苓、炙甘草的研究中就知道黄连有明显的抗腹泻作用，其机 理与调节camp有关。在葛根苓连汤各配伍组合减少番泻叶致泻小鼠的di中，黄连为其主要 作用药物，而黄苓能明显拮抗黄连，有报道称黄连、黄苓配伍后黄连小槃碱的溶出率损失较多 7，此可能是黄苓能拮抗黄连作用的原因。而酸性药在煎液制备时亦存在一个溶出率的问 题,有报道黄苓与

33、炙甘草配伍时能影响黄苓的主要有效成分（黄苓昔）的溶出8 o这可能 是炙甘草与黄苓配伍时相互表现为拮抗的原因。葛根苓连汤对小鼠小肠推进率的影响中，黄 连与炙甘草为主要作用药物，黄苓能拮抗黄连的作用，其原因可能与黄苓昔能与黄连小槃碱 形成沉淀有关。我们认为，药物配伍“七情合和”的本质在于药效物质的运动变化。本实验 从配伍与药效的关系出发，对葛根苓连汤配伍与抗腹泻作用之间的变化进行研究，结果表明 葛根苓连汤的抗腹泻药效,无论是di还是小肠推进率,其最佳组合为黄连炙甘草。葛根与黄 苓对黄连与炙甘草的作用，或拮抗、或促进、或无关，两者不完全相同。我们将结合配伍与化 学成分变化之间关系，进一步分析该方的配

34、伍规律。表5 葛根苓连汤配伍对di影响方差分析表tab. 5 ana lysisof var ianeeof effects of gegenqinlian ondiarrae index方差来源离均差平方和自由度均方和f值p值葛根0. 494710. 49474. 13410. 0439黄连33. 4738133. 4738279. 74270. 0000黄苓1. 5315711. 5315712. 79940. 0005炙甘草0. 337010. 33702. 81670. 0955葛根黄连0. 090510. 09050. 75610. 3860葛根黄苓1. 659211. 659213

35、. 86620. 0002黄连黄苓18. 6603118. 6603155. 94550. 0000葛根黄连黄苓0. 110610. 11060. 92430. 3380葛根炙甘草0. 514010. 51404. 29520. 0400黄连炙甘草0. 002310. 00230. 019320. 8897葛根黄连炙甘草0. 124910. 12491. 043520. 3087黄苓炙甘草0. 083210. 08320. 69520. 4058葛根黄苓炙甘草0.004810. 00480. 039700. 8424黄连黄苓炙甘草0.989810. 98988. 27220. 0046葛根黄连

36、黄苓炙甘草0.109010. 10900. 91040. 3416误差17.23091440. 1197葛根苓连汤中黄连不同配伍对g6pd缺陷的痢疾杆菌感染大鼠红细胞渗透脆性的影响葛根苓连汤用于治疗协热下利，具有良好的解热、止泻、抗菌、抗轮状病毒等作用13。临床表明其对菌痢、急性肠炎及小儿病毒性腹泻等有良好疗效。方中含黄连，据报道一 定量黄连能引起婴幼儿黄疸4 ;也有报道一次服用10g黄连对葡萄糖26磷酸脱氢酶(g6pd) 缺陷者可致溶血5 ，但以上研究均没有考虑到临床病理状态下药物吸收对红细胞渗透脆 性的影响。本研究设计了g6pd缺陷的痢疾杆菌感染(bd)大鼠模型(g6pd2bd)，拟通过对

37、葛根 苓连汤拆方研究，观察黄连各配伍组对g6pd2bd大鼠红细胞渗透脆性的影响，为葛根苓连汤 临床使用及黄连合理配伍提供试验依据。1材料及方法1. 1试验药物 黄连、葛根、黄苓、甘草均购自广州致信中药饮片有限公司，批号均为 071220,经南方医科大学中药鉴定教研室刘传明讲师鉴定，质量均符合2005版药典规定。1. 2动物wistar远交系大鼠96只，雄性，体质量(200 ±20)g,由南方医科大学实验动物 中心提供，合格编号：scxk (粤)200620015«1. 3菌种 福氏iv型志贺氏痢疾杆菌由南方医科大学微生物教研室提供。1. 4方法5, 6 大鼠饲养在室温25&

38、#176;c、照明周期为12 /12h,常规饲养1周后，动物随 机分为12组，每组8只,分组情况见表1。正常组和g6pd缺乏组大鼠灌服无菌生理盐水1. 2ml,其余10组大鼠灌服浓度为9 x108cfu /ml的福氏痢疾杆菌1. 2ml ;第二天上午以1%乙酰苯月井（aph）生理盐水溶液按1ml/100g给g6pd大鼠和g6pd2bd大鼠皮下注射1次，连续2天°表1实验动物的分组情况组号123456789101112模型cab a +ba +ba +b a +b a +b a +b a +b a +ba +b注:痢疾杆菌感染（a） , g6pd缺乏模型（b），正常组（c）葛根苓连汤的

39、组成为：葛根24g,黄苓9g,黄连9g,炙甘草6g。大鼠每日给药量（按黄连重量计 算）为1. og/kg大鼠。黄连为固定给药因素，其余三味药正交设计给药组见表2,共分为8种给 药方式分别为黄连+葛根+黄苓+炙甘草（葛根苓连汤）、黄连+葛根+黄苓（连葛苓）、黄连+ 葛根+炙甘草（连葛甘）、黄连+葛根（连葛）、黄连+黄苓+炙甘草（连苓甘）、黄连+黄苓（连 苓）、黄连+炙甘草（连甘）和单味黄连.表2拆方分组正交设计因素水平表水平葛根黄苓炙甘草1用药用药用药2不用药不用药不用药将单味黄连9g及含黄连9g的各组均用10倍量水煎煮30min,共两次。过滤，减压浓缩至 120ml;含有葛根的配伍组，葛根先煎

40、20min后再和余药共煎两次，每次30min,减压浓缩至 120ml,即将药液浓缩至每毫升含黄连生药量为0. 075go -天灌胃给药2次、每次1. 5ml/200g 大鼠,共给药3天，期间观察大鼠粪便。末次给药后禁食不禁水16h,水合氯醛麻醉后，腹主动脉 采血，供实验用。精密称取氯化钠，用蒸f留水溶解，分别配成0. 60%0.38%的氯化钠溶液，相邻浓度差0. 02%,共12个盐水梯度。实验时，12只试管分盛不同浓度盐水2ml。每管滴入全血1滴，轻轻混 匀，置37°c水浴中放置4h后取出，采用改良sanford法，以隐血实验法检定始溶血的盐浓度 5 2结果2. 1动物表现造模结束观

41、察模型bd大鼠和g6pd2bd大鼠均有立毛现象，肛门脱垂、大便量 多、稀、出现白膜；g6pd大鼠和g6pd2bd大鼠具有耳、鼻、口、四肢、尾颜色均发青、变暗 淡,活动能力减弱，四肢无力，体软凉、尾尤其凉，食量减少，大便发黑。2. 2红细胞脆性 红细胞渗透性随始血盐浓度的降低而变小。与正常组大鼠比较，bd大鼠 红细胞渗透脆性明显降低（p<0. 01） , g6pd缺陷大鼠的红细胞脆性明显增高（p0. 01） o g6pd2bd大鼠红细胞脆性无显著差异，见表3序号124。和g6pd2bd大鼠模型组比较，给予药物 葛根苓连汤全方、连葛苓的g6pd2bd大鼠模型组对红细胞渗透脆性均无显著性差异;

42、而给予其 他拆方药物组（连葛甘、连葛、连苓甘、连苓、连甘、黄连）的g6pd2bd模型大鼠均对红细胞 渗透脆性有显著差异，红细胞渗透脆性增加，黄连红细胞脆性增加最大，见表3之序号4212。给 予不同拆方配伍组药物的g6pd2bd大鼠模型之间红细胞渗透脆性的比较：和单味黄连给药组 对比,黄连和葛根黄苓炙甘草三味药的配伍组合均能使红细胞渗透脆性降低，具显著性差异; 黄连配伍葛根炙甘草、葛根、黄苓炙甘草、黄苓、炙甘草能拮抗单味黄连对红细胞渗透脆性 的影响，具显著性差异，结果见表3之411序号。表3葛根苓连汤对细胞脆性的单项方差分析表（土 s）序号组别n剂量(mg/kg)出现溶血盐浓度（% ）1正常80

43、. 47 ±0. 022bd80. 45 ±0. 02aa3g6pd80. 49 ±0. 01aa4g6pd2bd80. 47 ±0. 015葛根苓连汤860000. 48 ±0. 01#6连葛苓852500. 48 ±0. 00#7连葛甘848750. 50 ±0. 01 * * #8连葛841250. 51 ±0. 01 * * #9连苓甘830000. 50 ±0. 01 * *#10连苓822500. 51 ±0. 01 * *#11连甘818750. 52 ±0. 02 *

44、*#12黄连811250. 57 ±0. 03 从与正常组相比p < 0.01;与g6pd2bd组相比3 3p < 0. 01;与黄连相比# p < 0. 012. 3粪便颜色本实验对造模结束后给药前，给药第二天，给药第三天的大鼠粪便颜色状态进行观察，结果见表4表4实验动物的粪便颜色及状态组号123456789101112造模结束后粪便1+y1+x2+y2+x2+x2+x2+x2+x2+x2+x2+x2+x给药第二天后粪便1+y1+x2+y2+x2+y2+x2+y2+y2+x2+x2+x2+x给药第三天后粪便1+y1+x2+y2+x2+y2+y2+y2+y2+y2+

45、y2+y2+y粪便黄色：1,黑色：2;硬便：y,稀便带有白膜：x3讨论3. 1实验中，为了考察某些g6pd缺乏人群在肠道感染情况下药物对红细胞脆性的影响，参 考了相关文献制作了病理条件下g6pd缺乏的动物模型。考察到痢疾杆菌在感染三天后症状最 明显，而注射了aph后要尽快给药，故第一天先灌胃bd,第二天及第三天分别皮下注射aph,第 四天给药。3. 2三种模型组与正常组大鼠比：g6pd大鼠组红细胞渗透脆性升高，粪便由黄色硬便变为 黑色硬便；bd大鼠组红细胞渗透脆性明显降低，粪便由黄色硬便变成黄色稀便；g6pd2bd大鼠 组红细胞脆性值恢复到正常，粪便由黄色硬便变为黑色稀便，由三者粪便变化提示造模成功, 但在痢疾杆菌感染情况下,大鼠的吸收、代谢发生了改变，引起红细胞渗透脆性变化，故各配 伍组红细胞渗透脆性应与g6pd2bd组进