中国药典版抗生素品种增修订概况文档资料

1、品种品种原料原料新增新增制剂制剂新增新增总数总数新增新增-内内酰胺类酰胺类头孢菌素类头孢菌素类272711114848191975753030青霉素类与酶抑制剂青霉素类与酶抑制剂20203 328286 648489 9碳青酶烯类及单环碳青酶烯类及单环-内内酰胺类酰胺类2 21 12 21 14 42 2大环内酯类大环内酯类13132 235354 448486 6氨基糖苷类氨基糖苷类141425251 139391 1四环素类四环素类6 612121818利福霉素类利福霉素类1 17 78 8林可霉素类林可霉素类2 24 46 6酰胺醇类酰胺醇类4 411111515多肽类与肽类多肽类与肽类

2、4 42 24 42 28 84 4抗真菌类抗真菌类3 33 36 6抗肿瘤抗生素类抗肿瘤抗生素类6 62 26 61 112123 3磷霉素类磷霉素类3 35 58 8其他抗生素其他抗生素3 34 47 7喹诺酮类喹诺酮类12123 334345 546468 8总计总计120120242422822839393483486363l二、二、20102010年版药典抗生素类药标准增年版药典抗生素类药标准增修订要点修订要点: :l1 1、鉴别项下尽可能应用专属性强的鉴别、鉴别项下尽可能应用专属性强的鉴别反应反应, , 如：光谱法：如：光谱法：ir ir 色谱法：色谱法：hplc tlchplc

3、tlc等，与钠、钾、盐酸盐、硫酸等，与钠、钾、盐酸盐、硫酸盐的鉴别反应盐的鉴别反应. . 标准中鉴别反应标准中鉴别反应hplchplc与与tlctlc二法并列。有利于基层检验机构的选二法并列。有利于基层检验机构的选择。择。 l2. 2. 新方法新技术进一步在标准中扩大新方法新技术进一步在标准中扩大应用。应用。 2.1 2.1 应用应用hplc-elsdhplc-elsd测定氨基糖苷类抗生素测定氨基糖苷类抗生素的组分，有关物质，特定杂质及含量的品种进一的组分，有关物质，特定杂质及含量的品种进一步增加。步增加。 同时又用该方法测定硫酸盐（同时又用该方法测定硫酸盐（soso4 4）的含量。）的含量。

4、 用用hplc-elsdhplc-elsd替代替代tlctlc检查有关物质与组分，可检查有关物质与组分，可 提高检测灵敏度。提高检测灵敏度。 如如: : 硫酸依替米星及制剂的有关物质硫酸依替米星及制剂的有关物质, ,硫酸盐及硫酸盐及含量测定。含量测定。 硫酸卡那霉素及制剂的有关物质卡硫酸卡那霉素及制剂的有关物质卡b b以及含以及含量测定，量测定， 硫酸庆大霉素及制剂的庆大霉素硫酸庆大霉素及制剂的庆大霉素c c组分及有组分及有关物质测定，关物质测定， 硫酸小诺霉素及其制剂的组分测定。硫酸小诺霉素及其制剂的组分测定。 妥布霉素及制剂的有关物质测定等。妥布霉素及制剂的有关物质测定等。l2.2 2.2

5、 本版药典使用本版药典使用hpcehpce方法的品种有方法的品种有2 2个，其个，其中一个为盐酸头孢吡肟中中一个为盐酸头孢吡肟中n n- -甲基吡咯烷的含量甲基吡咯烷的含量测定。测定。l3. 3. 本版药典抗生素类增修订有关物质项较多，本版药典抗生素类增修订有关物质项较多，-内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素127127个品种中有个品种中有116116个品种个品种采用采用hplchplc测定有关物质。测定有关物质。l 喹诺酮类喹诺酮类4646个品种就有个品种就有4040个品种用个品种用hplchplc法测法测定有关物质。定有关物质。l 其他如其他如: :l 氯霉素类，大环内酯类，氨基糖苷类氯霉素类，

6、大环内酯类，氨基糖苷类, ,利利福平等均增修订了有关物质检查项。福平等均增修订了有关物质检查项。l3.1 3.1 对检查有关物质与含量测定的对检查有关物质与含量测定的hplchplc方法的方法的系统适用性试验进行修改并完善。系统适用性试验进行修改并完善。l3.1.1 3.1.1 在系统适用性试验中均规定了主峰与指在系统适用性试验中均规定了主峰与指定杂质峰的分离度，定杂质峰的分离度，l 梯度洗脱时标明主峰的保留时间，使方法的梯度洗脱时标明主峰的保留时间，使方法的可操作性强，保证了结果的准确性。可操作性强，保证了结果的准确性。l3.1.2 3.1.2 对杂质数多或多组分的、分离难度大对杂质数多或多

7、组分的、分离难度大的品种，中检所提供混合杂质对照品，多组分的品种，中检所提供混合杂质对照品，多组分对照品及标准图谱对照品及标准图谱. .l 如阿莫西林、阿莫西林克拉维酸、氨苄西如阿莫西林、阿莫西林克拉维酸、氨苄西林、吉他霉素、乙酰螺旋霉素等。林、吉他霉素、乙酰螺旋霉素等。l l 该混合对照品用于系统适用性试验，测得该混合对照品用于系统适用性试验，测得的色谱图应与标准图谱一致。便于操作，保证的色谱图应与标准图谱一致。便于操作，保证了方法的有效性。了方法的有效性。l3.1.3 3.1.3 由于系统适用性对照品及标准图谱的由于系统适用性对照品及标准图谱的提供，确定各杂质峰的保留时间，有利于制剂提供，

8、确定各杂质峰的保留时间，有利于制剂的有关物质检查。可利用对照品溶液色谱图中的有关物质检查。可利用对照品溶液色谱图中杂质的保留时间，对特定杂质进行控制。杂质的保留时间，对特定杂质进行控制。l3.1.4 3.1.4 有关物质采用自身对照时，对本身纯有关物质采用自身对照时，对本身纯度低于度低于85%85%的品种，提出对自身对照溶液主峰的品种，提出对自身对照溶液主峰进行校正。以免纯度较低品种采用自身对照法进行校正。以免纯度较低品种采用自身对照法引起的结果偏高而影响正确性引起的结果偏高而影响正确性。l4. -4. -内酰胺类抗生素的有关物质检查方法与国内酰胺类抗生素的有关物质检查方法与国外药典基本一致，

9、在分离度试验中根据实际情况外药典基本一致，在分离度试验中根据实际情况进行修改，更有利方法的可操作性。进行修改，更有利方法的可操作性。l 有很多品种采用有很多品种采用hplchplc梯度洗脱法测定有关物质，梯度洗脱法测定有关物质，如：头孢地尼，头孢唑林钠，拉氧头孢钠如：头孢地尼，头孢唑林钠，拉氧头孢钠, , 阿莫阿莫西林及其复方制剂，氨苄西林等。西林及其复方制剂，氨苄西林等。l5. 5. 喹诺酮类抗生素的有关物质检查，喹诺酮类抗生素的有关物质检查，epep、bpbp、uspusp均采用均采用tlctlc、hplchplc两种方法进行控制。两种方法进行控制。l 本版药典提出用本版药典提出用hplc

10、hplc在主峰洗脱后梯度洗脱的在主峰洗脱后梯度洗脱的方法，将方法，将epep用用tlctlc、hplchplc两种方法检测的杂质在同两种方法检测的杂质在同一一hplchplc系统中检测系统中检测. .l 同时根据各杂质最大吸收波长的不同，用双波同时根据各杂质最大吸收波长的不同，用双波长检测，长检测， l 对照品外标法与加校正因子与不加校正因子自对照品外标法与加校正因子与不加校正因子自身对照法同时并列。杂质身对照法同时并列。杂质a a用用hplchplc检测检测, ,灵敏度与灵敏度与正确性均优于正确性均优于tlctlc法。使该类品种标准的技术含量法。使该类品种标准的技术含量高于国外药典标准。高于

11、国外药典标准。l6. 6. 四环素类统一了该品种有关物质与含量测定的四环素类统一了该品种有关物质与含量测定的hplchplc法色谱条件，与法色谱条件，与20052005年版方法比较有较大改年版方法比较有较大改进。进。l 检出的杂质与检出的杂质与ep6.0ep6.0规定的杂质有相关性。并根规定的杂质有相关性。并根据国内产品实际情况，制定合理的限度。据国内产品实际情况，制定合理的限度。l7. 7. 氨基糖苷类用氨基糖苷类用hplc-elsdhplc-elsd替代替代tlctlc检查有关物质检查有关物质与组分，提高检测灵敏度；与组分，提高检测灵敏度；l l 同时可用该方法测定硫酸盐（同时可用该方法测

12、定硫酸盐（soso4 4）的含量。）的含量。l8. 8. 红霉素类经对几种红霉素类经对几种hplchplc方法比较后，采用方法比较后，采用同一同一hplchplc方法检查红霉素与其衍生物以及制剂方法检查红霉素与其衍生物以及制剂中红霉素中红霉素a a、b b、c c及有关物质。有利于同类品及有关物质。有利于同类品种间质量的比较。种间质量的比较。l9. 9. 有关物质含量采用多种计算方法，如：不有关物质含量采用多种计算方法，如：不加校正因子的自身对照法，加校正因子的自身加校正因子的自身对照法，加校正因子的自身对照法，杂质对照品外标法。根据各品种杂质对照法，杂质对照品外标法。根据各品种杂质的情况，在

13、同一品种中可以同时应用的情况，在同一品种中可以同时应用2 2种或种或3 3种种的计算方法。的计算方法。l10. 10. 增加有机溶媒检查的品种较多。增加有机溶媒检查的品种较多。l10.1 10.1 部分品种采用标准加入法，该方法可提高检部分品种采用标准加入法，该方法可提高检测灵敏度。测灵敏度。l10.2 10.2 另由于生产工艺的不同，各生产厂使用的有另由于生产工艺的不同，各生产厂使用的有机溶媒也不同，同一品种中可能有几十种的溶媒，机溶媒也不同，同一品种中可能有几十种的溶媒，为方便操作、经试验在标准中规定各溶剂的相对调为方便操作、经试验在标准中规定各溶剂的相对调整保留时间（整保留时间（rart

14、rart），检查时可先做供试品，从供），检查时可先做供试品，从供试品中检出的溶媒的试品中检出的溶媒的rartrart与规定的与规定的rartrart比较，确定比较，确定为何种溶媒时，再进行对照品测定，可减少工作量，为何种溶媒时，再进行对照品测定，可减少工作量，大大降低检验大大降低检验成本成本，提高工作效率。提高工作效率。l11. 11. 为保证临床使用的安全有效，供注射用为保证临床使用的安全有效，供注射用-内酰胺抗生素，除检查有关物质外，增加高分子内酰胺抗生素，除检查有关物质外，增加高分子聚合物的检查。在原来聚合物的检查。在原来2121个品种基础上增加至个品种基础上增加至4242个品种个品种.

15、 .l 20052005年版药典年版药典-内酰胺类抗生素品种进行高内酰胺类抗生素品种进行高分子杂质检查时，由于该方法的分析周期较长，分子杂质检查时，由于该方法的分析周期较长，本版药典对测定方法进一步完善，采用直径较细本版药典对测定方法进一步完善，采用直径较细内径为内径为1cm,1cm,长为长为30cm30cm的玻璃柱作为色谱柱。使分的玻璃柱作为色谱柱。使分析周期缩短至析周期缩短至45-6045-60分钟，为原来周期的分钟，为原来周期的1/31/3。l 20052005年版药典方法色谱柱填充剂均为年版药典方法色谱柱填充剂均为sephadex sephadex g10g10。本版药典增加球状蛋白亲

16、水硅胶为色谱柱填。本版药典增加球状蛋白亲水硅胶为色谱柱填充剂的高分子聚合物分析方法充剂的高分子聚合物分析方法l12. 200512. 2005年版药典氨基糖苷类、大环内酯类的含年版药典氨基糖苷类、大环内酯类的含量测定方法为微生物检定法的管碟法，本版药典量测定方法为微生物检定法的管碟法，本版药典增加微生物检定法浊度法，二法并列。增加微生物检定法浊度法，二法并列。l13. 13. 更多的品种用细菌内毒素的检查替代热原检更多的品种用细菌内毒素的检查替代热原检查查。l14. 14. 大容量注射液与眼用制剂增加渗透压摩尔浓大容量注射液与眼用制剂增加渗透压摩尔浓度检查。度检查。l15.15.眼用制剂增加防

17、腐剂检查。眼用制剂增加防腐剂检查。 l16.16.标准中涉及的已知杂质，其化学命名均在标准标准中涉及的已知杂质，其化学命名均在标准最后列出，便于与国外药典的杂质比较。最后列出，便于与国外药典的杂质比较。l三、抗生素品种分类介绍三、抗生素品种分类介绍 下面将重点介绍下面将重点介绍-内酰胺类、大环内酯类、内酰胺类、大环内酯类、氨基糖苷类、四环素类、酰胺醇类、利福霉素类、氨基糖苷类、四环素类、酰胺醇类、利福霉素类、喹诺酮类、抗肿瘤类、肽类的抗生素在新版药典喹诺酮类、抗肿瘤类、肽类的抗生素在新版药典中的增修订的情况。中的增修订的情况。l 1.-1.-内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 本类抗生素包括：头孢菌

18、素类、青霉素类、酶本类抗生素包括：头孢菌素类、青霉素类、酶抑制剂类、碳青霉烯类与单环抑制剂类、碳青霉烯类与单环-内酰胺类共内酰胺类共127127个品种，占抗生素品种的个品种，占抗生素品种的36.8%36.8%。 1.11.1品种收载情况品种收载情况： 表表1.1 1.1 头孢菌素类品种收载情况头孢菌素类品种收载情况 收载情况收载情况 原料原料 制剂制剂总计总计20102010年版药典收载品种年版药典收载品种 27 27 48 48 75 75新增品种新增品种 11 11 19 19 30 30l 头孢菌素类新增品种：头孢菌素类新增品种：l原料：原料： 制剂：制剂：l1.1.头孢尼西钠头孢尼西钠

19、 1.1.注射用头孢尼西钠注射用头孢尼西钠l2.2.头孢地嗪钠头孢地嗪钠 2.2.注射用头孢地嗪钠注射用头孢地嗪钠l3.3.头孢唑肟钠头孢唑肟钠 3.3.注射用头孢唑肟钠注射用头孢唑肟钠l4.4.头孢吡肟钠头孢吡肟钠 4.4.注射用头孢吡肟钠注射用头孢吡肟钠l5.5.头孢西丁钠头孢西丁钠 5.5.注射用头孢西丁钠注射用头孢西丁钠l6.6.头孢克肟头孢克肟 6.6.头孢克肟片；头孢克肟片；7.7.头孢克肟胶囊；头孢克肟胶囊；l 8.8.头孢克肟头孢克肟颗颗粒粒l7.7.头孢丙烯头孢丙烯 9.9.头孢丙烯片；头孢丙烯片；10.10.头孢丙烯干混悬剂头孢丙烯干混悬剂l8.8.拉氧头孢钠拉氧头孢钠 1

20、1.11.注射用拉氧头孢钠注射用拉氧头孢钠l9.9.盐酸头孢他美酯盐酸头孢他美酯 12.12.盐酸头孢他美酯片；盐酸头孢他美酯片；13.13.盐酸头孢他美干悬剂；盐酸头孢他美干悬剂；l 14.14.盐酸头孢他美酯胶囊；盐酸头孢他美酯胶囊；15.15.盐酸头孢他美酯盐酸头孢他美酯颗颗粒粒l10.10.头孢孟多酯钠头孢孟多酯钠 16.16.注射用头孢孟多酯钠注射用头孢孟多酯钠l11.11.头孢泊肟酯头孢泊肟酯 17.17.头孢泊肟酯片；头孢泊肟酯片；18. 18. 头孢泊肟酯胶囊；头孢泊肟酯胶囊；l 19.19.头孢泊肟酯干混悬剂头孢泊肟酯干混悬剂 品种品种 收载情况收载情况 原料原料 制剂制剂

21、总计总计青霉素类青霉素类20102010年版药典收载品种年版药典收载品种新增品种新增品种 16 16 2 2 28 28 6 6 44 44 8 8酶酶抑制剂抑制剂类类20102010年版药典收载品种年版药典收载品种新增品种新增品种 4 4 1 1 4 4 1 1碳青霉烯类碳青霉烯类20102010年版药典收载品种年版药典收载品种新增品种新增品种 1 1 1 1 2 2单环单环-内内酰胺类酰胺类20102010年版药典收载品种年版药典收载品种新增品种新增品种 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2l青霉素类与酶抑制剂青霉素类与酶抑制剂:l新增品种：新增品种：l 原料：原料： 制剂：制剂

22、：l 1.阿洛西林钠阿洛西林钠 1.注射用阿洛西林钠注射用阿洛西林钠l 2.美洛西林钠美洛西林钠 2.注射用美洛西林钠注射用美洛西林钠 l 3.他唑巴坦他唑巴坦 3.注射用哌拉西林钠他唑巴坦注射用哌拉西林钠他唑巴坦l 4. 阿莫西林克拉维酸钾分散片；阿莫西林克拉维酸钾分散片；l 5.阿莫西林克拉维酸钾颗粒；阿莫西林克拉维酸钾颗粒；l 6.阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂l单环单环-内酰胺类新增品种：内酰胺类新增品种：l原料：原料： 制剂：制剂：l氨曲南氨曲南 注射用氨曲南注射用氨曲南l1.2 20101.2 2010年版药典本类抗生素药质量标年版药典本类抗生素药质量标准要点

23、准要点 l1.2.1 1.2.1 性状性状 l 本类药物均为半合成的头孢菌素及其制剂，本类药物均为半合成的头孢菌素及其制剂，原料药外观性状一般为白色至微黄色粉末或结原料药外观性状一般为白色至微黄色粉末或结晶性粉末。晶性粉末。l 注射用粉针剂的外观性状与原料相同。注射用粉针剂的外观性状与原料相同。l1.2.2 1.2.2 鉴别鉴别 l 原料药与注射用粉针的鉴别均采用色谱法原料药与注射用粉针的鉴别均采用色谱法hplchplc，光谱法，光谱法irir以及钾、钠离子火焰反应，也以及钾、钠离子火焰反应，也有多个品种采用有多个品种采用hplchplc与与tlctlc二法并列。少数品二法并列。少数品种有用种

24、有用uvuv鉴别。鉴别。 l 固体口服制剂一般用固体口服制剂一般用hplchplc或或hplchplc与与tlctlc作作为鉴别，二法并列。少数有用为鉴别，二法并列。少数有用uvuv法作为鉴别。法作为鉴别。l1.2.31.2.3溶液的澄清度与颜色溶液的澄清度与颜色l 检查溶液的澄清度与颜色是控制检查溶液的澄清度与颜色是控制-内酰胺内酰胺类注射用的原料药与制剂内在质量的一个重要指类注射用的原料药与制剂内在质量的一个重要指标。标准中大部分采用与标准管进行比浊和比色标。标准中大部分采用与标准管进行比浊和比色的目测法。的目测法。l 本版药典有多个品种采用紫外本版药典有多个品种采用紫外- -可见分光光度

25、可见分光光度法在特定的波长处测定吸光度，控制溶液的颜色，法在特定的波长处测定吸光度，控制溶液的颜色，如：头孢尼西钠、如：头孢尼西钠、 头孢噻肟钠。头孢噻肟钠。l1.2.4 1.2.4 有关物质有关物质 l1.2.4.1 1.2.4.1 头孢菌素类药物原料头孢菌素类药物原料2727个品种均规定个品种均规定检查有关物质，制剂检查有关物质，制剂4242个品种除个品种除6 6个品种颗粒与个品种颗粒与干混悬剂由于辅料干扰未规定检查有关物质外干混悬剂由于辅料干扰未规定检查有关物质外, , 其他品种均有有关物质检查。其他品种均有有关物质检查。l 头孢菌素品种有关物质检查均采用头孢菌素品种有关物质检查均采用h

26、plchplc法，法，除头孢西丁钠以苯基键合硅胶为填充剂外；其除头孢西丁钠以苯基键合硅胶为填充剂外；其他均以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相他均以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色谱，紫外检测。色谱，紫外检测。l 其中有头孢地尼、头孢克洛、头孢唑啉钠、其中有头孢地尼、头孢克洛、头孢唑啉钠、 头孢西丁钠、头孢西丁钠、 头孢克肟、头孢噻肟钠、头孢克肟、头孢噻肟钠、 头孢头孢噻吩钠、噻吩钠、 拉氧头孢钠、拉氧头孢钠、 头孢呋辛钠、头孢丙头孢呋辛钠、头孢丙烯、头孢氨苄、头孢羟氨苄及其制剂共烯、头孢氨苄、头孢羟氨苄及其制剂共2929个品个品种用种用hplchplc法梯度洗脱。法梯度洗脱。表表1.3

27、头孢菌素的有关物质检头孢菌素的有关物质检查查 总数总数 有关物质有关物质 hplc hplc梯度洗脱梯度洗脱原料原料 27 27 27 27 12 12制剂制剂 42 42 36 36 17 17l1.2.4.2 1.2.4.2 青霉素类、酶抑制剂、碳青霉烯类与青霉素类、酶抑制剂、碳青霉烯类与单环单环-内酰胺类原料内酰胺类原料2222个品种均规定检查有个品种均规定检查有关物质，关物质，l 制剂制剂2525个品种除个品种除5 5个品种片，颗粒与干混悬个品种片，颗粒与干混悬剂等由于辅料干扰未规定检查有关物质外剂等由于辅料干扰未规定检查有关物质外, , 其其他品种均有有关物质检查。他品种均有有关物质

28、检查。l l有关物质检查均采用有关物质检查均采用hplchplc法，法，l 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色谱，紫外检测。谱，紫外检测。l 其中有阿莫西林、阿莫西林钠、青霉素钠其中有阿莫西林、阿莫西林钠、青霉素钠( (钾钾) )、青霉素、青霉素v v钾、氨苄西林、氨苄西林钠、钾、氨苄西林、氨苄西林钠、氨曲南等原料及其制剂共氨曲南等原料及其制剂共2727个品种采用梯度洗个品种采用梯度洗脱方法。脱方法。 总数总数 有关物质有关物质 hplc hplc梯度洗脱梯度洗脱 原料原料 20 20 20 20 11 11 制剂制剂 28 28 23 23 15 1

29、5 表表1.5 1.5 碳青霉烯类与单环碳青霉烯类与单环-内酰胺类内酰胺类 有关物质检查有关物质检查 总数总数 有关物质有关物质 hplc hplc梯度洗脱梯度洗脱 原料原料 2 2 2 2 1 1 制剂制剂 2 2 2 2 1 1l1.2.4.31.2.4.3 采用梯度洗脱时，由于不同色谱采用梯度洗脱时，由于不同色谱柱的行为略有差异，故在系统适用性试验中，柱的行为略有差异，故在系统适用性试验中，应规定主峰的出峰时间，主峰与已知杂质的分应规定主峰的出峰时间，主峰与已知杂质的分离度等要求。离度等要求。l 如：头孢地尼规定如：头孢地尼规定: :l 主成分头孢地尼峰保留时间约为主成分头孢地尼峰保留时

30、间约为2222分钟分钟，e-e-异构体异构体峰保留时间约为头孢地尼峰保留时间的峰保留时间约为头孢地尼峰保留时间的1.51.5倍，理论板倍，理论板数按头孢地尼峰计算不低于数按头孢地尼峰计算不低于70007000，头孢地尼峰与其相头孢地尼峰与其相对保留时间对保留时间0.950.95和和1.11.1处杂质峰的分离度均应不小于处杂质峰的分离度均应不小于1.01.0。l 如：头孢丙烯规定：如：头孢丙烯规定：l 头孢丙烯头孢丙烯(z)(z)异构体峰的保留时间约为异构体峰的保留时间约为23233030分钟，分钟，头孢丙烯（头孢丙烯（e e）异构体峰的保留时间约为）异构体峰的保留时间约为30304040分钟，

31、分钟，理论板数按头孢丙烯（理论板数按头孢丙烯（z z）异构体峰计算应不小于）异构体峰计算应不小于1000010000，头孢丙烯（头孢丙烯（z z）异构体峰与相邻杂质峰间的分离度应符）异构体峰与相邻杂质峰间的分离度应符合要求。合要求。 l如：头孢克洛规定如：头孢克洛规定: : l 头孢克洛峰的保留时间约为头孢克洛峰的保留时间约为2323分钟，头孢克洛峰分钟，头孢克洛峰与头孢克洛与头孢克洛-3-3-异构体峰的分离度应不小于异构体峰的分离度应不小于2.02.0，头孢，头孢克洛峰的拖尾因子应小于克洛峰的拖尾因子应小于1.21.2。l1.2.4.4 1.2.4.4 由于梯度洗脱基线噪音相对较大，故由于梯

32、度洗脱基线噪音相对较大，故规定供试品溶液色谱图中小于对照溶液主峰面积规定供试品溶液色谱图中小于对照溶液主峰面积0.050.05倍或倍或0.10.1倍的峰可忽略不计。以免基线噪音倍的峰可忽略不计。以免基线噪音影响结果正确性。影响结果正确性。l1.2.4.5 1.2.4.5 有关物质测定结果计算可分为三种方法：有关物质测定结果计算可分为三种方法：l(1). (1). 不加校正因子的自身对照法；不加校正因子的自身对照法；l(2). (2). 加校正因子的自身对照法；加校正因子的自身对照法；l(3). (3). 已知杂质对照品外标法已知杂质对照品外标法。l 用杂质对照品外标法计算已知杂质的含量用杂质对

33、照品外标法计算已知杂质的含量, ,用加校正因子与不加校正因子的自身对照法用加校正因子与不加校正因子的自身对照法计算已知杂质和未知杂质的含量和杂质的总计算已知杂质和未知杂质的含量和杂质的总量。量。l 有关物质包括已知杂质与未知杂质，故有关物质包括已知杂质与未知杂质，故在方法中可分别规定用杂质对照品外标法、在方法中可分别规定用杂质对照品外标法、加校正因子与不加校正因子的自身对照法计加校正因子与不加校正因子的自身对照法计算。算。l如：头孢他啶中吡啶与头孢拉定中头孢氨苄均如：头孢他啶中吡啶与头孢拉定中头孢氨苄均采用杂质对照品外标法。采用杂质对照品外标法。l 头孢拉定、头孢氨苄、头孢羟氨苄中头孢拉定、头

34、孢氨苄、头孢羟氨苄中7-7-氨基氨基去乙酰氧基头孢烷酸（去乙酰氧基头孢烷酸（7-adca7-adca）及头孢哌酮钠）及头孢哌酮钠中杂质中杂质a a等均采用杂质对照品外标法。等均采用杂质对照品外标法。l如：头孢拉定中已知杂质：如：头孢拉定中已知杂质：l 7-7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸（氨基去乙酰氧基头孢烷酸（7-adca7-adca）l 双氢苯苷氨酸（双氢苯苷氨酸（220nm220nm）l 头孢氨苄头孢氨苄l 头孢氨苄中已知杂质：头孢氨苄中已知杂质：l 7-7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸（氨基去乙酰氧基头孢烷酸（7-adca7-adca）l -苯苷氨酸苯苷氨酸l 头孢羟氨苄中已知杂质：头孢羟氨苄中已

35、知杂质：l 7-7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸（氨基去乙酰氧基头孢烷酸（7-adca7-adca）l -对羟基苯苷氨酸对羟基苯苷氨酸l 头孢哌酮钠中已知杂质：头孢哌酮钠中已知杂质：l 杂质杂质a a（原称为头孢哌酮降介物（原称为头孢哌酮降介物）l如：头孢羟氨苄如：头孢羟氨苄: : l 供试品溶液色谱图中如有杂质峰，含供试品溶液色谱图中如有杂质峰，含-对对羟基苯甘氨酸和羟基苯甘氨酸和7-7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸按外氨基去乙酰氧基头孢烷酸按外标法以峰面积计算，标法以峰面积计算，均不得过均不得过1.0%1.0%；其他单个杂；其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面（质峰面积不得大于对照溶液主峰面（1.

36、0%1.0%），其），其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的的3 3倍（倍（3.0%3.0%）, ,供试品溶液色谱图中任何小于对供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积照溶液主峰面积0.050.05倍的峰可忽略不计倍的峰可忽略不计. .l如：头孢哌酮钠如：头孢哌酮钠l 供试品溶液色谱图中如有杂质峰，含供试品溶液色谱图中如有杂质峰，含杂质杂质a a按按外标法以峰面积计算，外标法以峰面积计算，不得过不得过3.0%3.0%，其他单个，其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的2 2倍倍（2 2），其他各杂质峰面

37、积的和不得大于对），其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的照溶液主峰面积的3 3倍（倍（3.0%3.0%）, ,供试品溶液色供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积谱图中任何小于对照溶液主峰面积0.10.1倍的峰倍的峰可忽略不计。可忽略不计。l1.2.4.6 1.2.4.6 在检测中根据杂质最大吸收波长的在检测中根据杂质最大吸收波长的不同，采用双波长测定，不同，采用双波长测定，l 如：头孢拉定有关物质测定时，用不同波长如：头孢拉定有关物质测定时，用不同波长 测定不同杂质，测定不同杂质，l 用用220nm220nm波长检测双氢苯苷氨酸，波长检测双氢苯苷氨酸，l 用用254nm254nm

38、波长检测其他杂质。波长检测其他杂质。l1.2.5 1.2.5 高分子聚合物高分子聚合物l1.2.5.1 1.2.5.1 高分子聚合物是高分子聚合物是-内酰胺类抗生素临内酰胺类抗生素临床过敏反应的一个主要因素，故在注射用原料及床过敏反应的一个主要因素，故在注射用原料及其制剂标准中增加检查高分子聚合物，控制一定其制剂标准中增加检查高分子聚合物，控制一定的限度，对临床用药安全有效具有重大的意义。的限度，对临床用药安全有效具有重大的意义。l 20052005年版药典已有个品种收载高分子聚年版药典已有个品种收载高分子聚合物检查，本版药典增加到合物检查，本版药典增加到 42 42 个品种。个品种。l 其中

39、其中4040个品种以葡聚糖凝胶个品种以葡聚糖凝胶g-10(40g-10(40120m)120m)为填充剂的玻璃柱（为填充剂的玻璃柱（1.01.01.41.430cm30cm）色谱柱的凝胶色谱法测定，色谱柱的凝胶色谱法测定，l 2 2个品种以球状蛋白色谱用亲水硅胶（分子个品种以球状蛋白色谱用亲水硅胶（分子量为量为1000100050005000）为填充剂为色谱柱的）为填充剂为色谱柱的hplchplc法法测定。测定。表表1.6 1.6 凝胶色谱测定高分子聚合物凝胶色谱测定高分子聚合物（200年版已收载21个品种） 原料原料 制剂制剂 头孢哌酮钠头孢哌酮钠 注射用头孢哌酮钠注射用头孢哌酮钠 头孢唑林

40、钠头孢唑林钠 注射用头孢唑林钠注射用头孢唑林钠 头孢曲松钠头孢曲松钠 注射用头孢曲松钠注射用头孢曲松钠 头孢噻肟钠头孢噻肟钠 注射用头孢噻肟钠注射用头孢噻肟钠 头孢呋辛钠头孢呋辛钠 注射用头孢呋辛钠注射用头孢呋辛钠 头孢他啶头孢他啶 注射用头孢他啶注射用头孢他啶 青霉素钠青霉素钠 注射用青霉素钠注射用青霉素钠 青霉素青霉素v v钾钾 青霉素青霉素v v钾胶囊钾胶囊 阿莫西林阿莫西林 阿莫西林胶囊阿莫西林胶囊 头孢拉定头孢拉定表表1.7. 凝胶色谱测定高分子聚合物凝胶色谱测定高分子聚合物 （2010年版新增19个品种） 原料原料 制剂制剂 头孢唑肟钠头孢唑肟钠 注射用头孢唑肟钠注射用头孢唑肟钠

41、头孢替唑钠头孢替唑钠 注射用头孢替唑钠注射用头孢替唑钠 头孢尼西钠头孢尼西钠 注射用头孢尼西钠注射用头孢尼西钠 头孢噻吩钠头孢噻吩钠 注射用头孢噻吩注射用头孢噻吩 磺苄西林钠磺苄西林钠 注射用磺苄西林钠注射用磺苄西林钠 阿洛西林钠阿洛西林钠 注射用阿洛西林钠注射用阿洛西林钠 美洛西林钠美洛西林钠 注射用美洛西林钠注射用美洛西林钠 氯唑西林钠氯唑西林钠 注射用氯唑西林钠注射用氯唑西林钠 苯唑西林钠苯唑西林钠 注射用苯唑西林钠注射用苯唑西林钠 普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素 表表1.8 hplc1.8 hplc测定高分子聚合物测定高分子聚合物 （2010年版新增2个品种） 原料原料 制剂制剂 头孢地

42、嗪钠头孢地嗪钠 注射用头孢地嗪钠注射用头孢地嗪钠l1.2.5.2 1.2.5.2 国内关于国内关于-内酰胺类抗生素高分子内酰胺类抗生素高分子杂质的研究工作是于杂质的研究工作是于7070年代开始，经历了近年代开始，经历了近4040年的研究，于年的研究，于20002000年版药典在年版药典在4 4个品种个品种8 8个药品个药品标准中正式收载了高分子杂质检查。标准中正式收载了高分子杂质检查。l 20052005年版药典扩大到年版药典扩大到1111个品种的个品种的2121个药品标个药品标准中均有高分子杂质检查。准中均有高分子杂质检查。 l 但在但在20052005年版药典年版药典-内酰胺类抗生素品种内

43、酰胺类抗生素品种进行高分子杂质检查时，由于该方法的分析周进行高分子杂质检查时，由于该方法的分析周期较长，加之在执行过程中涉及到较多生产厂期较长，加之在执行过程中涉及到较多生产厂与检验部门，工作量大幅度增加。与检验部门，工作量大幅度增加。l 作为常规检验方法有必要进行改进，考虑到作为常规检验方法有必要进行改进，考虑到原药典收载的方法在原理，系统适用性试验，原药典收载的方法在原理，系统适用性试验，以及方法验证专属性、重现性、准确性等方面以及方法验证专属性、重现性、准确性等方面均符合要求，而仅仅是分析周期过长均符合要求，而仅仅是分析周期过长. . l 因此在研究建立新的方法时，我们仍采用凝胶色因此在

44、研究建立新的方法时，我们仍采用凝胶色谱的分离模式，并采用原方法中的自身对照外标法，谱的分离模式，并采用原方法中的自身对照外标法，进行高分子聚合物杂质的测定。在上述二个基本条进行高分子聚合物杂质的测定。在上述二个基本条件不变的前提下进行方法学的改进件不变的前提下进行方法学的改进, ,完善。完善。l1.2.5.2.1 1.2.5.2.1 拟采用直径较细，内径为拟采用直径较细，内径为1cm,1cm,长为长为30cm30cm的玻璃柱作为色谱柱。以的玻璃柱作为色谱柱。以sephadexg10sephadexg10为填充为填充剂，柱内径的缩小，柱床体积随之也变小。剂，柱内径的缩小，柱床体积随之也变小。kv

45、=0kv=0也也降低。分析周期缩短至降低。分析周期缩短至45-6045-60分钟，是原方法周期分钟，是原方法周期的的1/31/3。（见图。（见图1.11.1，图，图1.31.3）l1.2.5.2.21.2.5.2.2 在系统适用性试验中规定分离度的在系统适用性试验中规定分离度的要求，在高分子杂质检查时，某些药物分子单体要求，在高分子杂质检查时，某些药物分子单体与高聚物不能达到基线分离时，其分离度计算公与高聚物不能达到基线分离时，其分离度计算公式为：式为：l r=r=聚合体的峰高聚合体的峰高/ /单体与聚合体之间的谷单体与聚合体之间的谷高高l（分离度（分离度r r应大于应大于2.02.0）。）。

46、l 由于高分子聚合物的对照品不易获得，样品由于高分子聚合物的对照品不易获得，样品中的高聚物量较少，故不能直接用样品与聚合中的高聚物量较少，故不能直接用样品与聚合物对照品配制分离度试验用溶液，物对照品配制分离度试验用溶液，l 根据本方法的分离原理，拟加入一定量的蓝根据本方法的分离原理，拟加入一定量的蓝色葡聚糖色葡聚糖20002000，制成含一定浓度蓝色葡聚糖，制成含一定浓度蓝色葡聚糖20002000的样品溶液来进行分离度试验。的样品溶液来进行分离度试验。l根据上面公式，分离度随着聚合物峰高的增大根据上面公式，分离度随着聚合物峰高的增大而增大，故加入蓝色葡聚糖而增大，故加入蓝色葡聚糖2000200

47、0的量应该有一的量应该有一定的要求，在研究方法时，根据品种项下规定定的要求，在研究方法时，根据品种项下规定的限度及蓝色葡聚糖的限度及蓝色葡聚糖20002000在该系统中的响应值在该系统中的响应值, ,般加入的量为聚合物规定限度响应值的般加入的量为聚合物规定限度响应值的1-21-2倍即可。（见图倍即可。（见图1.21.2，图，图1.41.4） manual run 5:1_uv manual run 5:1_editedbaseline 0 20 40 60 80100mau0.010.020.030.040.0min6.54图图1.1 阿莫西林样品分析全程色谱图阿莫西林样品分析全程色谱图 ma

48、nual run 5:1_uv manual run 5:1_editedbaseline0.05.010.015.0mau4.06.08.010.012.014.016.0min6.54图图1.2 阿莫西林分离度计算色谱图阿莫西林分离度计算色谱图 manual run 0:1_uv manual run 0:1_editedbaseline 0 500100015002000mau0.010.020.030.040.050.060.070.0min18.23 图图1.3 头孢他啶样品分析全程色谱图头孢他啶样品分析全程色谱图(流速流速:0.8ml/min) manual run 7:1_uv

49、manual run 7:1_editedbaseline1 0100200300400500mau0.05.010.015.020.025.030.035.0min18.32图图1.4 1.4 头孢他啶分离度计算色谱图头孢他啶分离度计算色谱图 l1.2.5.2.3 1.2.5.2.3 方法比较方法比较 l 用用20052005年版药典方法和改进后的方法测定年版药典方法和改进后的方法测定20052005年版药典收载年版药典收载1111个品种的个品种的f f值与高聚物的值与高聚物的含量含量, ,结果基本一致（见表结果基本一致（见表1.9,1.101.9,1.10）。）。l 因此本版药典凝胶色谱高

50、分子聚合物项下因此本版药典凝胶色谱高分子聚合物项下仅将色谱柱修订为内径仅将色谱柱修订为内径1.01.01.4cm,1.4cm,长为长为303040cm40cm的玻璃柱。即两种不同规格柱并列，可根的玻璃柱。即两种不同规格柱并列，可根据实际条件选择，测定结果是一致的。据实际条件选择，测定结果是一致的。 品种品种20052005年版药典方法年版药典方法 f f值值改进后的方法改进后的方法f f值值相对偏差相对偏差 阿莫西林阿莫西林均值：均值：f=42.63f=42.63* *1010-3-3 (n=36) (n=36)均值：均值：f=41.0236f=41.0236* *1010-3-3 (n=31

51、)(n=31)1.92%1.92% 头孢唑林钠头孢唑林钠均值：均值：f=1.3807f=1.3807* *1010-3-3 (n=11)(n=11)均值：均值：f=1.3794f=1.3794* *1010-3-3 (n=33)(n=33)0.17%0.17% 头孢拉定头孢拉定均值均值 f=0.8150f=0.81501010-3-3 (n=5)(n=5)均值：均值：f=1.6768f=1.67681010-3-3(n=5)(n=5)1.42%1.42% 头孢他啶头孢他啶均值均值:f= 0.8682:f= 0.86821010-3-3 (n=5)(n=5)均值：均值：f=0.8984f=0.8

52、9841010-3-3(n=5)(n=5)1.71%1.71%* * f f值为对照品溶液浓度值为对照品溶液浓度(g/ml)(g/ml)与峰面积的比值与峰面积的比值表表1.10 高分子聚合物测定结果的比较高分子聚合物测定结果的比较 品种品种 批号批号20052005年版药典方法年版药典方法高聚物含量（高聚物含量（% %）改进后的方法改进后的方法高聚物含量（高聚物含量（% %） 相对偏差相对偏差阿莫西林囊阿莫西林囊05075010507501（联邦制药）（联邦制药）均值：均值：0.056%0.056% (n=2) (n=2)均值：均值：0.0506%0.0506% (n=4) (n=4)5.15

53、.1阿莫西林阿莫西林308507016a308507016a（联邦制药厂）（联邦制药厂） 均值：均值：0.0355%0.0355% (n=2) (n=2)均值：均值：0.033%0.033% (n=3) (n=3)2.92.9头孢唑林钠头孢唑林钠比对样品比对样品（苏州制药）（苏州制药） 均值：均值：0.0093%0.0093% (n=2) (n=2)均值：均值：0.011%0.011% (n=6) (n=6)8.38.3头孢唑林钠头孢唑林钠比对样品比对样品（上海新先（上海新先锋锋 ） 均值：均值：0.0154%0.0154% (n=2) (n=2)均值：均值：0.0148%0.0148% (n

54、=5) (n=5)2.02.0头孢唑林钠头孢唑林钠czss051142czss051142（奥奇特）（奥奇特） 均值：均值：0.016%0.016% (n=3) (n=3)均值：均值：0.017%0.017% (n=3) (n=3)0.30.3l1.2.61.2.6 应用应用hpcehpce测定盐酸头孢吡肟中测定盐酸头孢吡肟中n n- -甲甲基吡咯烷的含量，是本版药典正文收载应用基吡咯烷的含量，是本版药典正文收载应用hpcehpce的的2 2个品种之一。个品种之一。l1.2.7 1.2.7 标准中增加有机溶媒检查的品种较多标准中增加有机溶媒检查的品种较多l1.2.7.1 1.2.7.1 本检查

55、法大多采用涂层毛细管柱为本检查法大多采用涂层毛细管柱为色谱柱，等温，程序升温，顶空进样，色谱柱，等温，程序升温，顶空进样，l 内标法，外标法计算结果。本版药典部分品内标法，外标法计算结果。本版药典部分品种溶媒残留检查项下采用标准加入法计算，该种溶媒残留检查项下采用标准加入法计算，该方法可提高检测灵敏度。方法可提高检测灵敏度。l1.2.7.2 1.2.7.2 由于生产工艺的不同，各厂使用的有机由于生产工艺的不同，各厂使用的有机溶媒也不同，同一品种中可能有几十种的溶媒，溶媒也不同，同一品种中可能有几十种的溶媒，为方便操作、经试验在标准中规定各溶剂的相对为方便操作、经试验在标准中规定各溶剂的相对调整

56、保留时间（调整保留时间（rartrart），），l 检查时可先做供试品，从供试品中检出的溶媒检查时可先做供试品，从供试品中检出的溶媒的的rartrart与规定的与规定的rartrart比较，确定为何种溶媒时，比较，确定为何种溶媒时，再进行对照品测定，可减少工作量，大大降低检再进行对照品测定，可减少工作量，大大降低检验成本，提高工作效率。验成本，提高工作效率。l如：头孢泊肟酯如：头孢泊肟酯l残留溶剂残留溶剂 甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、异甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、异丙醇、丁酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙酸丁酯、丙醇、丁酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙酸丁酯、1,2-1,2-二氯乙烷、乙酸异丙酯、苯、四氯

57、化碳、二氯乙烷、乙酸异丙酯、苯、四氯化碳、环己烷、二氧六环、甲基异丁基酮、吡啶、甲环己烷、二氧六环、甲基异丁基酮、吡啶、甲苯苯 照残留溶剂测定法（附录照残留溶剂测定法（附录 p p）测定。）测定。l色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 以以6%6%氰丙基苯基氰丙基苯基- -94%94%二甲基聚硅氧烷为固定液（或极性相近）的二甲基聚硅氧烷为固定液（或极性相近）的毛细管柱为色谱柱，柱温毛细管柱为色谱柱，柱温4040，维持，维持2222分钟，分钟，以每分钟以每分钟100100速率升温至速率升温至120120，维持，维持1010分钟。分钟。进样口温度为进样口温度为200200，检测器温度为

58、，检测器温度为250250，顶，顶空瓶平衡温度为空瓶平衡温度为7070，平衡时间为，平衡时间为3030分钟，取分钟，取系统适用性溶液顶空进样，按正丙醇（内标）、系统适用性溶液顶空进样，按正丙醇（内标）、丁酮、乙酸乙酯的顺序出峰，各峰间的分离度丁酮、乙酸乙酯的顺序出峰，各峰间的分离度均应符合要求。均应符合要求。l内标溶液的制备内标溶液的制备 取正丙醇适量，用二甲基亚砜取正丙醇适量，用二甲基亚砜稀释制成每稀释制成每1ml1ml中约含中约含200g200g的溶液，作为内标的溶液，作为内标溶液。溶液。l系统适用性溶液的制备系统适用性溶液的制备 取丁酮和乙酸乙酯各适取丁酮和乙酸乙酯各适量，用内标溶液定量

59、稀释成每量，用内标溶液定量稀释成每1ml1ml中约含丁酮和中约含丁酮和乙酸乙酯各乙酸乙酯各1mg1mg的溶液，精密量取的溶液，精密量取1.0ml1.0ml，置顶空，置顶空瓶中，密封瓶口，作为系统适用性溶液。瓶中，密封瓶口，作为系统适用性溶液。l供试品溶液的制备供试品溶液的制备 取本品约取本品约0.2g0.2g，精密称定，精密称定，置顶空瓶中，精密加入内标溶液置顶空瓶中，精密加入内标溶液1.0ml1.0ml使溶解，使溶解，密封瓶口，作为供试品溶液。密封瓶口，作为供试品溶液。l对照品溶液的制备对照品溶液的制备 根据试验确定的具体检测对根据试验确定的具体检测对象，制备对照品溶液。分别精密称取各溶剂适

60、量，象，制备对照品溶液。分别精密称取各溶剂适量，用内标溶液定量稀释制成规定浓度的溶液，作为用内标溶液定量稀释制成规定浓度的溶液，作为混合对照品溶液，混合对照品溶液中各溶剂的浓混合对照品溶液，混合对照品溶液中各溶剂的浓度分别为每度分别为每1ml1ml中含甲醇中含甲醇600 ug600 ug、丙酮、丙酮1mg1mg、异丙、异丙醇醇1mg1mg、乙腈、乙腈82ug82ug、二氯甲烷、二氯甲烷120ug120ug、丁酮、丁酮1mg1mg、乙酸乙酯乙酸乙酯1mg1mg，四氢呋喃，四氢呋喃150 ug150 ug、四氯化碳、四氯化碳1 ug1 ug、环己烷环己烷760 ug760 ug、苯、苯1 ug1