ImageLab中文操作手册（精编版）

1、image lab?中文操作手册fastan dreliableimage lab 全自动图像获取和分析软件用于molecular imager chemidoc? xrs+、molecular imager gel doc? xr+和 criterion stain freetm 成像系统，可应用于凝胶电泳和转印膜的数字成像和分析，而自动化的工作流程能加速图像获取步骤及参数优化，并针对 调整好的凝胶或转印膜影像进行系统性分析，进而得到所需的分析数据结果。一、软件操作界面主窗口工具列分析工具列启动精灵程序桌面1. 主窗口工具列档案管理分析数据 results data2. 显示工具列图 放 缩

2、像 大 小显示设定全亮改窗度变口明图大暗像小度色转彩换转图换像3d信成息模式像3. 分析工具列（1） ）图像工具（ image to ols）（2） ）泳道及条带工具（ lane andband tools）（3） ）分子量工具（ mw molecular w eight）（4） ）自动定量工具（ quanti ty tools）（5） ）注释工具（ annot ation tools）（6） ）手动定量工具（ volume tools）二、使用 image lab软件进行化学发光图像获取流程1. 建立图像获取程序：在 凝 胶 成 像 （ gelimaging ） 对 话 框 中 选 择che

3、mi （ 化 学 发 光 ） 应 用 程 序(1) 在成像区域（ imagingarea ）对话框中的下拉式选单中选择合适的样品大小（非必需， 可之后通过 position gel选择）(2) 选择成像曝光（ image exposure）方法，可以人为评估曝光时间并以手动设定（manual exposure ），或是使用信号累积模式（signal accumulation mode，sam ）来进行操作。在建立一个化学发光的程序时最难的任务就是图像曝光的确定，因为您想获得一个充分 利用了相机大的动态范围的图像。过短的图像曝光时间可能使高于膜背景的微弱信号不能被 识别；过长的图像曝光时间能够使

4、得某些条带饱和（也就是说，超出了相机准确报告信号的 能力）。如果这是您第一次用chemidocxrs+ 分析化学发光样品，您需要在使用手控或信号累积模式（ sam ）之前决定一个合适的成像时间框架。获得这个信息的最好的方式是取得一个相对短的手工曝光并利用image lab里的工具估计最适的曝光时间。2. 手动曝光(1) 选择手动设定曝光时间（manually set exposure time）并在读秒框中输入10 秒。(2) 选择 highlight saturated pixels。(3) 把胶置于透射箱的中心位置。(4) 在程序窗口中点击按钮。(5) 观察显示器中样品的实时图像，打开照胶

5、系统的门并移动样品直到位于视野的中心区域。(6) 可利用照相机的变焦滑板调节成像区域的大小。(7) 选择按钮获得你的第一个图像。若所需的图像出现在计算机的显示器上，确认图像中是否包含红色的饱和区域。若有饱和区域存在，请重新以较短的曝光时间来获取图像。若无饱和区域存在，则可移动鼠标置于最暗的条带之上，在较低的右下角 image lab 窗口中观察信号的强度数值。如图中显示强度为1994 ，照相机能记录的最大值的32 分之一（最大值为65,535 ）。用你的最初的10 秒曝光再乘以30 就可在照相机的最大动态范围附近成像你的样品。若你只需针对单一图像的成像时间进行评估，可直接在手动曝光区域中输入3

6、00 。3. 信号 累积 模 式（ signalaccumulationmode ，sam ）如果预估方法不足以精确满足您的目的，请选择sam 按钮，然后按setup 按钮。一个新的对话框会跳出来，其包含有可输入细分的成像时间的领域。在这个例子中，我们已经输入了小于和大于我们原始的300 秒曝光估计时间，因为我们有理由相信准确的成像时间将会在这些时间之中。我们总共想要5 个成像，推测其中一个将会与最佳成像极为接近。一个您的sam 设定的图像显示出现在对话框里。而 sam设定的影像显示对话窗口，在您选择按钮后再点选按钮，窗口会显示相关进度图标来说明整体图像获取的时间。在250 秒获取第一个图像，

7、同时一个小的缩略图会出现在窗口的下方，以此类推整个过程将持续到获取所有的图像。就像前面做过的那样，通过移动鼠标在图像上，您能判定强度值。您也可以通过使用位 于程序窗口左边的图像转换窗口（imagetransform ）中的调节划片改变图像的表观。在sam程序中的任何地方您都能通过点击缩略图查看图像。若确定调整到符合您要求的图像时，点击按钮舍弃其它不适合的图像来完成获取图像的程序。也可在sam 获取图像的过程中或之后来保存需要的所有图像，直接点选右键单点缩图窗口内的图像即可进行存盘保留下来。在决定获取图像的数量时，记住增加sam图像会导致背景信号的平均。当较多的图像被获得时，在背景强度水平附近的

8、弱的信号将会变得难以识别。如果辨别最弱的信号很重要，我们推荐在合适的时间下获得单一的成像。三、建立全自动图像获取及分析程序（ cr eatingpr otocols）1. 启动分析精灵窗口- step 1. gel imaging（1） ）按照应用（ nucleicacid/protein/blots）选择相关的程序（ choose an application）（2） ）选择成像区域（ choose th e imaging area）（3） ）选择成像曝光时间（ choose imageexposure time ）（4 ）选择显示设定（choo se di splay optio ns

9、, hi ghlight sa turated pixels and imagecolor ）2. 图像自动分析（analyzeimage） - step 2. d etect lanes and ban ds设定detect lanes and bands的参数（ low band detection sensitivity （low sensitivity = 25 ）、high band detection sensitivity（ high sensitivity = 75）或自行设定灵敏度。3. 分子量分析（ analyzemolecularweight） -ste p 3. ana

10、lyzemolec ular weight设定analyze molecular weight settings的 分 子 量 标 准 品 （ molecular weight standard ）类型，所有 bio-rad 的各类标准品（包括核酸、蛋白）均已预存。当然，您也可以根据您的实验设置您自定义的分子量标准品。并同时设定分子量标准品的泳道及回归方 式。4. 报告输出设定（reportsettings） - step 4. specify contentof r eports5. 结果（ resultsover view ）及报告（report）（1） ）数据显示信息（ displayi

11、ngdata ）（2） ）分析表格设定（analysistableoptions ）（ 3） lane信息（ lanepr ofile ）（ 4 ）标准曲线（standar d cur ve）四、建立图像分析程序（ cr eatingimages analyzingpr otocols）1. 图像分析 （ analyzingimages）（ 1 ） 分析工具 analysistool box（ a）自动分析（ auto an alysis ）点选进入detectionsettings 窗口设定detect lanes and bands的参数（ low band detectionsensit

12、ivity （low sensitivity = 25 ）、high band detectionsensitivity（ high sensitivity = 75）或自行设定灵敏度），接着再设定molecularweight analysis settings的molecular w eight standard 、standard lanes 及regr ession met hod 参数。2. 图像工具（imagetools ）可进行水平或垂直翻转、左右旋转90或自由旋转（rotate ）、裁剪（ crop ）、反转（ invertdata ）及迭合（merge ）。3. lanes及

13、 bands工具（laneandbandtools ）（1） lane tab使用自动（ automati c）或手动（ manu al）搜寻 lane 功能（a） 针对所有的lanes （ all lanes ）进行大小调整（resize ）、（ adjust） 及删除（ delete ）等参数调整。（b） 针对单一lane （ single lane ）进行增加（add）、弯曲（ bend ）、移动（ move ）、宽度（ width） 及删除 （ delete ）等参数调整。（c） 利用 lane background subtraction 进行背景值的扣抵，并可点选（apply to

14、 selected lane ）针对单一 lane 进行调整。- 可以藉由ro lling di sk参数设定（1-99 mm ）来去除背景值。（2） ）bands tab通过 detect bands进行自动搜寻 bands 功能或手动进行增加（add ）、删除（ delete ）及（ adjust ）等参数调整。4. 分子量分析工具（molecularw e ightanalysistools ）此工具可由已知的标准品测算相对的分子量或碱基对（base pairs ）。5. 定量工具（ quantityto ols ）（1） ）相对定量（ relative quantity tab ）从图

15、像中选择已知的 标准品（ reference ban d） 及其标准品浓度（以绿色 r 表示） ，其分析结果可从 analysi s table 观察。（2） 绝对定量（absolute quantity tab ）通过选择已知标准品浓度 的bands （至少两个以上 , 以r表示）， 并设定合适的回归参数计算所得之标准曲线来推算目标bands 的绝对浓度（回归参数设定如linear( 较常用)、point-to-point或cub ic sp line）。regressionminimum numberminimum number withmethodof standardforce thr

16、oughoptionlinearban2ds1point-to-point21cubic spline546. 注释工具（ annotationtools ）可以通过 add annotations工具增加文字批注及箭头批注，并可调整批注相对位置（ alignment ）、文字属性、颜色及旋转方向等参数7. 定量工具（ vo lumetools ）按下选择较适合的 band 型态, 选取想要定量分析的 band 位置, 并在 band 上点击左键两下可将样品定义为标准品、未知样品或背景空白 , 并分别定义其定量依据（如 kb，ppm ，mg/ml ）建议用 rect tool 方形，先框出适当的方形，并用复制方式将分析的 band 框出（ ctrl+c+ 左键/即可复制， 或 ctrl+c 复制/ctrl+v 粘贴）。在band 上点击左键两下可将样品定义为标准品、未知样品或背景空白。（1）volume backgroundsubtraction- local （ loca