大肠杆菌抗药性菌株的筛选_第1页
大肠杆菌抗药性菌株的筛选_第2页
大肠杆菌抗药性菌株的筛选_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、大肠杆菌抗药性菌株的筛选【实验目的 】掌握微生物变异的原理， 学习用梯度平板法分离抗药性突变株。【实验原理 】基因突变可分为自发突变和诱发突变。许多物理、化学、生物因素对微生物都有诱变作用。基因中碱基顺序的改变可导致微生物细胞的遗传变异。这种变异有时能使细胞在有害的环境中存活下来，抗药性突变就是一个例子。抗药性突变株是指野生型菌株基因突变产生的对某些化学药物的抗性变异类型， 可在加有相应药物的培养基平板上选出。抗药性突变是 dna 分子的某一特定位置的结构改变所致，有药物的存在无关， 药物的存在只是作为分离某种抗药性菌株的鉴别手段。在含有一定浓度抑制生长的药物平板上涂布大量的细胞群体，极个别抗

2、性突变的细胞在平板上长成菌落。纯化后进一步进行抗性试验，就可以得到所需的抗药性菌株。为了便于选择适当的药物浓度，分离抗药性突变株常用梯度平板法。本实验用梯度平板法分离大肠杆菌抗链霉素、青霉素和红霉素突变株。【实验器材 】大肠杆菌; lb 液体培养基；lb 琼脂培养基；链霉素、青霉素和红霉素； 70%乙醇；无菌吸管，烧杯，试管，玻璃涂棒，水浴锅等。【操作步骤 】1.接种大肠杆菌与盛有5ml l b 培养液的试管中， 37震荡培养24h。2.在水浴锅中融化lb 培养基。3.倒 10ml 已融化不含药物的lb 琼脂培养基于无菌培养皿中，将培养皿一端垫起使培养皿表面在垫起的一端刚到培养皿的底与边的交界

3、处凝固。4.在凝固的平板底部高琼脂一边标上低，放平后在底层培养基上分别加入每毫升含有100ug 链霉素、青霉素和红霉素的lb 琼脂培养基 10ml，凝固后制得链霉素浓度从0 到另一端的100ug ml的梯度平板。5.用 1ml 无菌吸管吸取0.2ml 大肠杆菌培养液加到梯度平板上。用无菌玻璃涂棒将菌液均匀涂布到整个平板表面。如用蘸有乙醇并经火焰灭菌的玻璃涂棒， 可在火焰旁或伸进培养皿在板盖上充分冷却以免烫死细胞。6.将平板于 37培养 48 h. 7.选择 12 个生长在梯度平板中部的单个菌落，用无菌接种环接触该菌落朝高药物浓度的方向划线。8.将平板倒置于37培养 48 h。【注意事项 】1.玻璃涂布棒在火焰上灼烧后要待其冷却后再进行涂布，以免烫死细胞；可以蘸上乙醇后在火焰上灼烧，以缩短冷却的时间。2.制备含药平板时，务必使药物与培养基充分混匀。3.严格无菌操作，勿将杂菌误为抗药性大肠杆菌。注：lb(luria-bertani) 培

人人文库> 全部分类> 生活休闲 > 科普知识

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论