食用菌液态培养条件的研究

1、实验一食用菌液态培养条件的研究食用菌固体菌种常规培养周期长，菌龄不一致，容易带來菌种质量不高的问 题。为了缩短原种或栽培种的制种时间，采用液体培养技术。在液体培养中，菌丝体 新陈代谢旺盛，菌丝生长分裂迅速，能在短时间内产生大量的菌丝休（菌种）。并且液体菌种接 入同体培养料时,乂具有流动快，易分散,萌发快，发菌点多等特点。菌种可进行工业化生产，生 产周期短，菌龄整齐，发展食用菌液体培养技术前景广阔。一、目的和要求1、掌握微生物斜而培养基、种子培养基及发酵培养基确定方法，学会对已确定 菌种确定实验室发酵工艺。2、筛选微生物最适生长及产物形成的营养条件和培养条件，确定特定产物发酵的工艺参数。二、仪器

2、与试剂1、菌种：黑平菇2、仪器设备：天平、电炉、烘箱、恒温振荡培养箱。3、玻璃仪器（按20组准备，以下是每纽需用量）三角瓶（棉塞）、接种铲、试管菌种、烧杯50（） ml、量筒100 ml等三、实验步骤1、培养基配置（正交试验设计一一培养基成分）2、接种3、培养（止交试验设计培养条件确定）4、结果观察、检测（菌丝球直径、菌丝体积、生物量比浊法和直接称垂法、 总糖、还原糖的测定）表培养基的配制止交表试验设计因素水平筒萄糖维生索bmgso4kh2po411.00.00.050.322.000.100.533.00.20.150.8表2正交表实验方案编号葡萄糖维牛素bmgso4kh2po4菌丝球牛物量

3、多糖含直径量1(1)(1)(1)2(1)(2)(2)3(1)(3)(3)4(2)(1)(2)5(2)(2)(3)(1)6(2)(3)(1)7(3)(1)(3)8(3)(2)(1)9(3)(3)(2)衣3培养条件确定止交表试验设计因素水平接种量装液量温度振荡速度15%252510023%5028150编号接种量装液量温度振荡速度菌丝球牛物量 直径多糖含 量1(1)(d(1)2(1)(2)(2)(2)3(1)(3)(3)(3)4(2)(1)(2)(3)5(2)(2)(3)(1)6(2)(3)(1)(2)7(3)(1)(3)(2)8(3)(2)(1)(3)9(3)(3)(2)(1)31%100303

4、00表4 正交表实验方案四、实验结果分析1、如何通过设计正交试验确定食用菌液态发酵的培养条件。2、根据所查资料说明接种量、装液量、温度和振荡速度对培养结果的影响。实验二食用菌液态培养的结果分析和测定一、目的1、学习液态培养结果观察。2、掌握丝状真菌液态培养的生物量的测定和总糖、还原糖的测眾方法。二、仪器和试剂1、仪器设备：天平、电炉、烘箱、紫外分光光度计、离心机。2、玻璃仪器及其它平姑培养摇瓶种子、接种铲、表面皿、洗瓶、刻度离心管、刻度尺等三、实验原理和方法1. 菌丝球直径和菌丝体体积的测量直径：由刻度尺直接测得；体积：用刻度离心管离心后测得体积。2. 生物量的测定2.1 原理生物量的测定方法

5、有比浊法和氏接称重法等。酵母在液休深层通气发酵过 程中是以均一混浊液的状态存在的，可以采用直接比色法进行测定。而丝状真 菌则一般用直接称重法测定其生物量。2.2 实验步骤：取发酵液在3000r/min离心lomin,弃上清液。水洗，离心lomin,沉淀称 湿重和干重。3. 多糖的测定苯酚硫酸法。3.1原理此法通过制备显色溶液在紫外分光光度计上进行光度测定。苯酚-硫酸为此法小所用到 的试剂，另外还包括：葡萄糖溶液（用作标液）、样詁（作样品液）、乙醇（使多糖沉淀）。食品中分子量10000的高分子物质（多糖）在80%乙醇溶液屮沉淀，与水溶性单糖和 低聚糖分离，粗多糖在硫酸的作用下，水解成单-糖，并迅

6、速脱水生成糖醛衍生物，与苯酚缩 介成有色化介物，用分光光度法测定样品在粗多糖含量。3.2步骤：3.2.1标准曲线的制作标准液制备：精密吸取葡萄糖标准使用溶液0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0,各取2.0ml分别置于0号、 1号、2号、3号、4号、5号25ml比色管中，各加入苯酚溶液1.0ml,在旋转混匀器上混匀, 在冰水浴屮小心加入浓硫酸5.0ml,于旋转混匀器小心混匀，置沸水浴屮煮沸lomin,冷却 后用分光光度计在490nm波长处以试剂空白溶液为参比，1cm比色川l测定吸光度值。标准曲线的制作：以0号管为空口，在分光光度计上测定1-5号管的吸光度值。以吸光度值 为纵坐标，

7、葡萄糖毫克数为横坐标，绘制标准曲线。322样品液制备:提取：精密称取混介均匀的含粗多糖样品4.0g,置于100ml容量瓶屮，加水80ml左右，于沸水浴 上加热2h,冷却至室温后补加水至刻度，混匀，过滤，滤液供沉淀多糖。沉淀粗多糖：精密取液休样品5.0ml（即被测多糖就是液体而不是固休样品）置于50ml离心管中，加入 无水乙醇至90%,混匀厉，以4000rpm离心lomin,弃去上清液。沉淀用80%乙醇溶液数毫升洗 涤，离心后弃去上清液，反复3-4次操作。接下来沉淀用水溶解并定容至50ml,混匀后，供沉淀 葡聚糖。测定：精密取样品测定液2.0ml置于25ml比色管中，加入苯酚溶液1.0ml,在旋转混合器上混 匀后,在冰水浴中小心加入浓硫酸5.0ml后于旋转混合器上混匀后，置于水浴中煮沸lomin,冷 却至室温用分光光度计在490nm波长处，以试剂空白为参比,1cm比色皿测定吸光度值。以上步骤必须做三个重复。3.2.3计算取样品液中三个重复的