儿康宁药渣发酵研究【毕业论文绝对】

1、毕业论文论文题目:儿康宁中药渣发酵的研究学生姓名: 学生学号:专业班级:生物制药 2本组人员: 指导老师:儿康宁中药渣发酵的研究揭麥针对约厂里对儿康宁约渣的主要成分，选用em菌对其进行发酵，以 发酵产品的蛋白含量、还原糖、总糖以及粗纤维含量为指标，考察了发酵温度， 发酵时间，含水量，蛋白质含量，述原糖和总糖含量，粗纤维含量，接种量的影 响，结果表明：中药渣经em菌发酵后，发酵产物的蛋口质含量可以达到8.772%, 粗纤维的含量由11.35%降低到了 8. 535%,由此可见,用凯氏定氮法、费林试剂 热滴定法、化学法、划线分离培养法可以使中药渣得到合理的应用，其发酵产物就可以作为蛋白饲料的资源。

2、关键词儿康宇em菌发酵小药废渣erkangning in liquid fermentation of research（chongqing industry &trade vocational technical college of biological chemistry engineering biopharmaceutical professional technology）abstract： according to the couple, corning liquid pharmaceutical the main comp orient, choose em bacte

3、ria on the fermentati on, fermentati on product protein content, reducing sugar, total sugar and coarse fiber content as index, in spects the ferme ntation temperature, water con tent, ferme ntation time, protein conte nt, reducing sugars and total sugar con tent, crude fiber content, inoculation qu

4、antity, the result shows that the influence of the liquid to em bacterium after fermentation, fermented product protein can achieve 8.772%, crude fiber content by 11.35% drop to 8.535%, therefore, use kieldahl method, feili n reage nt hot titration method, chemical method, lineation separati on cult

5、ure method can make the liquid to get reas on able application of its fermented product can serve as protein feed resourceskey words： erkangning em bacteria fermentation liquid随着中医药事业的迅速发展，最近十年我国的医药行业得到了迅猛的发展， 但是随即而來的问题也不少；比如生产的品，废弃药渣对环境和居民生活的影响 fi益突出。按照国家环保部办公厅关于开展抗生索药渣等危险废物产生及处置 专项检查的通知（环控函（2009）

6、143号）要求，明确的指岀了药渣对环境影响 的整改要求。中国是中药生产大国，每年产生屮药药渣约2000多万吨，因其对环 境有不同程度的污染，故一直采用填埋的方法进行处理，这不仅占用了大量的土 地资源，污染了土地及地下水，而h还造成资源的浪费，中药渣中含有丰富的有 机质、糖类和粗蛋白质等中量及微量元素营养物质，用生物技术对其进行无害的 处理，发酵促其腐熟，就能生产出优质的有机肥，但是药渣屮含有蛋白质，纤维 素，多糖等可以利用的成分，及时对其进行综合的利用，不仅可以解决污染问题, 还可以带來一些经济效益。由于现在提取工艺比较单一，中药中的部分成分仍残留在中药渣中。但在中 药渣的处理和利用方面，研究

7、者主要集中在中药渣培养食用菌、中药渣造纸等方 面，有关于这方面的研究不多，尤其是对药渣屮次生药用物质的研究尚未见报道。 例如儿康宁药渣在国内外口前述没有研究，它具有节能排泄的功能，因此我们用 儿康宁药渣发酵生成蛋口质研究对刚生下來的小猪断奶以后所食用的饲料，这种 饲料可以提高小猪断奶以后的排泄问题，利用这种药渣可以生产-种新型的具有 保健功能的小猪饲料。1材料和方法：1.1菌种em菌：称取5g红糖加入到装有100ml无菌水的三角瓶中，然后包装好在 121°c高温灭菌20min,取岀冷却后加入菌种培养即可。1.2实验原料屮药熬制后干燥粉碎后备用，该药渣是经煎熬浸取后的红枣，白术，桑枝，

8、 慧攻仁，党参，山楂，红参，麦芽，莲子，山药，黄罠，茯苓，制何首乌，麦冬, 炒麦芽。2分析方法2. 1蛋白质含量：凯氏定氮法，所有的试剂均用不含氨的蒸憾水配制，所用到的试剂有硫酸铜, 硫酸钾，浓硫酸，2%的硼酸，混合指示剂，有0. 1%的甲基红乙醇溶液与5份0.1% 澳甲酚绿乙醇溶液临用时混合。40%氢氧化钠溶液。0.05mol/l硫酸标准溶液 或0.05mol / l的盐酸标准溶液。2. 1. 1消化液:称取lg药渣，l5g硫酸铜，l5g硫酸钾，20ml浓硫酸于凯氏烧瓶屮，稍 摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上，小火 加热，待内溶物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力

9、，并保持瓶内液体 微沸，注意约品的颜色变化（药品的颜色由黑色一红色黄色一亮绿色）， 至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5小时。取下放冷，小心加入 20ml水，放冷后，移入100ml容量瓶屮，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入 容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫 酸钾、浓硫酸同一方法做试剂空白试验。2. 1.2蒸憾先安装定氮蒸憾装置，于水蒸气发生瓶内装水至约2/3处，加甲基红指示液 数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调圧器控制, 加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。向接收瓶内加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示 液1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，

10、吸取10.0ml样品消化稀释液rfl小玻杯 流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻杯的棒状玻塞。 将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，立即将 玻塞盖紧，并加水于小玻杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸饰。蒸气通入反应室 使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸镭5min。移动接受瓶，使冷凝管下端离开 液面，再蒸镭1 min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.05mol / l硫酸或0.05mol/l盐酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点。还得做一组 对白实验，然后记录数据。2. 2粗纤维含量的测定：称取药渣2g置于50ml离心管中，加入5

11、%的氢氧化钠溶液30ml, 90°c水浴 90min,取岀调平衡，育至洗液ph呈中性或是微酸性，沥干后加入ph2. 00的盐酸 溶液30ml,再次90°c水浴90min,调平衡，离心清洗5次，沥干后送至干燥箱 80°c烘干至恒重，称重，计算每个做三个平行实验。2. 3述原糖和总糖的测定：所要用到的试剂有：斐林试剂（1）甲液：称取15g硫酸铜及0. 05g亚甲基蓝，溶于蒸憾水中病稀释至 1000ml定容（2）乙液:称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于蒸憾水中，再加入4g亚铁氧化钾，完全溶解后，用蒸饰水稀释到1000ml贮存于具有橡皮塞的玻璃 瓶中然后再配置0.

12、 1%葡萄糖标准溶液：用分析天平准确称取1. 000g经98100 度干燥至恒重的无水葡萄糖，加入蒸谓水溶解后移入1000ml容量瓶中，加入5ml 浓盐酸防止微生物生长，用蒸憾水稀释到1000ml待用6mol / l的盐酸：取250ml浓盐酸(35%39%)用蒸饰水稀释500ml碘-碘化钾溶液：取一颗碘，log碘化钾溶于蒸1：留水中，定容到100ml的容 量瓶中6mol/l氢氧化钠：称取120g氢氧化钠溶于蒸憾水中定容到500ml的容量 瓶屮0. 1%的酚駄指示剂材料:药渣lg所用到的器材有：试管，移液管，烧杯，锥形瓶，调温电炉，滴定管操作步骤：精确称取药渣5%的lg,放在100ml的烧杯中，

13、先以少量蒸谓水 调成糊状，然后加入约40ml蒸馆水，混匀，于50°c恒温水浴中保温20min,不 时搅拌，使述原糖浸出，过滤，将滤液全部收集在50ml的容量瓶屮，用蒸饰水 定容到刻度，即为还原糖提取液(即为v5%),然后根据相同的方法称取10%的药 渣，提取液为v10%,相同的方法得岀v15%准确称取药渣lg,放在大试管中，加入6mol / l盐酸10ml,蒸y留水15ml, 在沸水浴中加热0.5小时，取出两滴置于白瓷板上，加入一滴碘-碘化钾溶液检 查水解是否完全，如果已水解完全，则不显蓝色，水解完毕则呈蓝色。冷却至室 温后加入一滴酚瞅指示剂，以6mol/l氢氧化钠溶液中和至溶液呈微

14、红色，并 定容到100ml,过滤取滤液10ml t 100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为 稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖的测定空白滴定准确吸取菲林试剂甲液和乙液5. 00ml，置于250ml锥形瓶u,加蒸饰水10ml, 从滴定管滴加约9ml的葡萄糖标准液，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s, 趁热以2s/滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好退去为终点， 记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。平行操作3次取其平均值计算公式为：述原糖（以葡萄糖计）%=（菲林甲液和乙液10ml乘以述原糖 样品溶液的总体积）除以（样品重量乘以标定时平均消耗还原糖样品溶液的总体 积乘以1000）

15、乘以100注意事项：（1）菲林试剂甲液和乙液应该分别贮存，用时才混合，否则酒石 酸钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度 降低。（2）滴定必须在沸腾条件下进行，其原因一是加快还原糖与cu2+的反应 速度，二是亚甲基蓝的变色反应是可逆的，还原型的亚甲基蓝遇空气中的氧时会 被氧化为氧化型，此外，氧化亚铜也极不稳定，易被空气中的氧所氧化，。保持 反应液沸腾可防i上空气进入，避免亚甲基蓝和氧化亚铜被氧化而增加消耗量。（3）滴定时不能随意的摇动锥形瓶，更不能把锥形瓶从热源上去下了滴定, 以防空气进入反应液中。2. 4水分含量的测定：就是称取不同种类的药渣2g,每一样各口做三

16、份平行试验，放于100°c恒温 干燥箱屮干燥24小时，再精密称取各份药渣的重量，求得平均值之后再计算出 药渣是含水量。3工艺流程三角瓶摇床培养划线分离紫外线菌种复壮活化纯培养诱变菌种扩大培养一优良菌种接种屮药渣脱水添加辅料厌氧发酵检测分析（包描还原糖、蛋白质、纤维素、灰分、水分等）陈化翻转药渣 再发酵 质检 结论4结果分析4. 1原料的蛋白质含量经过一系列的平行试验得hh原料药中的蛋白质含量为8. 563%,原料药中的 粗纤维含量为12. 54%4. 2发酵结果及研究分析4. 2. 1将em菌按照药渣重量的比例加入em菌加入比例5%10%15%药渣重量（g）180180180加入量（

17、ml）918274.2.2发酵期间对药渣中的成分改变的研究（1）药渣的种类5%的发酵药渣药渣量（q180水分 含量65%接种量（ml）9发酵温度30°c发酵形式厌氧发酵乂）012345678项目水分（）6554.6152.6450.2147.8744.5741.8940.7640.135粗 纤维（）&7728.989.4710.55513.6314.5617.6417.9719.38总 糖（）11.35211.1310.7510.229.979.268.89&648.535蛋h 质含 量（）2.2432.1322.0041.5721.2630.9850.3750.21

18、10.021药渣量（g）180水分65%接种量（ml）9发酵温度30 °c发酵 形式厌氧 发酵y量012345678项目水分（）55.3454.9353.3650.2248.4246.2743.1241.1140.20粗 纤维（）12.3211.3511.0210.3410.049.259.078.458.31总 糖（）2.54342.1051.9741.8331.5891.2291.0860.8370.327蛋口 质含 量（）8.579&774&9789.53111.98614.2316.3417.8920.24药渣最（g）180水分 含量65%接种量（ml）9发酵 温度30 °c发酵 形式厌氧 发酵u 量 v）012345678项h水分（）54.9854.1750.2748.3947.5645.6044.6242.3740.78粗 纤维（）13.2111.2910.3910.059.738.998.798.3258.03总糖（）2.4322.0421.9351.4311.0940.8370.6380.4320.218蛋白 质含 量（）8.7949.43911.23413.7814.4316.9817.4918.9320