纸层析法分离鉴定氨基酸实用教案

1、会计学1纸层析法分离纸层析法分离(fnl)鉴定氨基酸鉴定氨基酸第一页，共10页。将样品点在距滤纸一端约将样品点在距滤纸一端约23cm的某一处，该的某一处，该点称为点称为(chn wi)原点；然后在密闭容器中层原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配。由于分配系数（基酸在两相中不断分配。由于分配系数（Kd）不）不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。物质被同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。物质被分离后在纸层析图谱上的位置，可用比移值（分离后在纸层析图谱上的位置，可用比移值（Rf）来表示。）来表示。所谓所谓Rf

2、，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点（又称为点（又称为(chn wi)层析点）中心的距离（层析点）中心的距离（X）与原点至溶剂前沿的距离（）与原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值。如图）的比值。如图第1页/共10页第二页，共10页。第2页/共10页第三页，共10页。YXRf原点到溶剂前沿的距离离原点到层析点中心的距 在一定条件下（如温度、展层剂的组成、层在一定条件下（如温度、展层剂的组成、层析纸质量等不变），某种物质的析纸质量等不变），某种物质的Rf 值是常数，值是常数，因此可作为定性依据。因此可作为定性依据。 由于氨基酸无色，可利用由于氨基酸无色，可利用(l

3、yng)茚三酮反茚三酮反应使氨基酸层析斑点显色，从而作定性分析。本应使氨基酸层析斑点显色，从而作定性分析。本实验利用实验利用(lyng)纸层析法分离氨基酸。纸层析法分离氨基酸。 第3页/共10页第四页，共10页。三、操作三、操作(cozu)第4页/共10页第五页，共10页。 纸层析点样标准图纸层析点样标准图 Lys Gly Pro Val Leu 混合混合(hnh)样品样品第5页/共10页第六页，共10页。5、显色：、显色： 用喷雾器均匀喷上用喷雾器均匀喷上0.1水合水合(shuh)茚三酮正丁醇溶液，然后用电吹风吹茚三酮正丁醇溶液，然后用电吹风吹干即可显出各层析斑点。干即可显出各层析斑点。第6

4、页/共10页第七页，共10页。 卷成筒状的滤纸卷成筒状的滤纸氨基酸显色后的图谱氨基酸显色后的图谱 溶剂前沿溶剂前沿XY第7页/共10页第八页，共10页。四、计算：四、计算： 用直尺用直尺(zh ch)测量并计算出各种氨基测量并计算出各种氨基酸的酸的Rf值。值。 样品样品aa标准标准aaRf混合混合aaRf赖氨酸赖氨酸甘氨酸甘氨酸脯氨酸脯氨酸缬氨酸缬氨酸亮氨酸亮氨酸YXRf原点到溶剂前沿的距离离原点到层析点中心的距第8页/共10页第九页，共10页。试剂和器材：试剂和器材：1. 试剂：试剂：(1) 氨基酸溶液：氨基酸溶液：0.5% (m/V)的赖氨酸、脯氨酸的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液 (各组分的浓度均为各组分的浓度均为0.5)。(2) 展层剂：正丁醇展层剂：正丁醇 冰醋酸冰醋酸 水水4 1 3 (V/V)。(3) 显色剂：显色剂：0.1 (m/V)水合茚三酮正丁醇溶液水合茚三酮正丁醇溶液 。2. 器材：器材：层析缸；层析滤纸（新华一号）；毛细管层析缸；层析滤纸（新华一号）；毛细管;喷雾喷雾器；电