美白剂实验研究及临床应用ppt课件

1、美白剂实验研讨及临床运用美白剂实验研讨及临床运用 大连医科大学附属第二医院皮肤科大连医科大学附属第二医院皮肤科 涂彩霞涂彩霞 1. 1.研讨方法研讨方法 2.2.研讨方向研讨方向 3.3.美白剂的运用美白剂的运用1.1.主要研讨方法主要研讨方法 1 1美白活性成分分析美白活性成分分析 是指经过高效液相色谱等方法对美白化装品是指经过高效液相色谱等方法对美白化装品中的美白活性物质进展种类和含量的测定。中的美白活性物质进展种类和含量的测定。 1.1.主要研讨方法主要研讨方法 2 2细胞程度效果测定细胞程度效果测定 检测内容：黑素含量测定、酪氨酸酶活检测内容：黑素含量测定、酪氨酸酶活性、蛋性、蛋 白表

2、达、白表达、mRNAmRNA程度测定、信号传导通路程度测定、信号传导通路等。等。 1.1.主要研讨方法主要研讨方法 2 2细胞程度效果测定细胞程度效果测定1 1细胞模型细胞模型 B16B16黑素瘤细胞黑素瘤细胞 大多数研讨中，采用大多数研讨中，采用B16B16黑素瘤细胞黑素瘤细胞检测色素抑制造用检测色素抑制造用PIPI 1 1细胞模型细胞模型melan-a或mel-ab黑素细胞或正常人黑素细胞(nHEM) 正常人黑素细胞(nHEM)更好的模拟体内环境，但黑素细胞更难维持培育。源于小鼠或人皮肤的黑素细胞和角质构成细胞共培育更贴近体内环境，体外系统的皮肤等效模型SEM也用于皮肤美白研讨。2主要实验

3、方法主要实验方法n酪氨酸酶活性检测方法有放射性同位素法、免疫学法酪氨酸酶活性检测方法有放射性同位素法、免疫学法和生化酶学法，其中以生化酶学法较为简单成熟，如和生化酶学法，其中以生化酶学法较为简单成熟，如氧化多巴法。氧化多巴法。n细胞中色素含量测定是美白化学物功能评价的最重要细胞中色素含量测定是美白化学物功能评价的最重要检测目的。目前多采用生物化学检测目的。目前多采用生物化学-分光光度法测定黑素分光光度法测定黑素细胞中的黑素含量，此法经典稳定细胞中的黑素含量，此法经典稳定 。2主要实验方法主要实验方法n信号传导通路蛋白表达信号传导通路蛋白表达Western Blot，免疫组化，免疫组化，流式细胞

4、术，流式细胞术，ELISA等等nmRNA转录转录Rt-PCR3动物实验动物实验n 棕色豚鼠模型 黄棕色豚鼠皮肤黑素细胞和黑素小体的分布近似于人类，实验结果反复性好，常采用UV或-MSH诱导色素冷静。斑马鱼模型 对显示美白制剂体内毒性具有意义 4人体实验人体实验视觉评分客观性强，不准确照相对比受光线及拍摄条件的影响 FoToFinder dermoscope 仪，由摄像机和显微镜头组成，可以对色素冷静区进展拍照、放大，并进展图像处置，计算各种参数如皮损大小、边缘情况、构造参数，同时作出平安评价，是一种常用的色斑评价法。 4人体实验人体实验三色分析法：经过检测皮肤表层构造上的紫外可见反射光，采用三

5、维颜色空间分量的定量，来模拟并复原描画人肉眼所看到的物体的颜色，经过计算来综合评价皮肤的色度。4人体实验人体实验漫反射光谱法：针对皮肤颜色的特征性发色基团，如黑漫反射光谱法：针对皮肤颜色的特征性发色基团，如黑色素、血红蛋白等，选择特定波长扫描，测定皮肤外色素、血红蛋白等，选择特定波长扫描，测定皮肤外表的反射光谱，从而对皮肤中的血红蛋白和黑色素等表的反射光谱，从而对皮肤中的血红蛋白和黑色素等进展定量，其丈量参数能较好地从生理学上解释皮肤进展定量，其丈量参数能较好地从生理学上解释皮肤颜色的改动。颜色的改动。4人体实验人体实验数字化成像定量技术是显微镜照相技术和计算机处置系数字化成像定量技术是显微镜

6、照相技术和计算机处置系统的结合，可以对色素冷静进展扫描并进展色度定量，统的结合，可以对色素冷静进展扫描并进展色度定量，经计算机处置系统进展数据信息的转换，可以计算得经计算机处置系统进展数据信息的转换，可以计算得出各种发色团的含量，以此来综合评价皮肤色度的变出各种发色团的含量，以此来综合评价皮肤色度的变化，从而可对化装品的祛斑效果进展准确的定量评价。化，从而可对化装品的祛斑效果进展准确的定量评价。 1. 1.研讨方法研讨方法 2.2.研讨方向研讨方向 3.3.美白剂的运用美白剂的运用2.2.主要研讨方向主要研讨方向2.1 2.1 抑制酪氨酸酶活性及表达抑制酪氨酸酶活性及表达2.2 2.2 抑制黑

7、素向角质构成细胞转移抑制黑素向角质构成细胞转移2.3 2.3 抑制氧化反响抑制氧化反响2.4 2.4 抑制炎症反响抑制炎症反响2.5 2.5 调理黑素生成信号通路调理黑素生成信号通路2.1 2.1 抑制酪氨酸酶活性或表达抑制酪氨酸酶活性或表达 n4-4-羟基茴香醚：作为酪氨酸酶替代底物引起色素减羟基茴香醚：作为酪氨酸酶替代底物引起色素减退退n针叶中提取茶多酚或从黑桑树中分别的查尔酮衍生针叶中提取茶多酚或从黑桑树中分别的查尔酮衍生物可抑制酪氨酸酶活性。物可抑制酪氨酸酶活性。 n从大豆胚轴酒曲从大豆胚轴酒曲soygerm kojisoygerm koji分别出来的两个分别出来的两个8-8-羟基羟基

8、异黄酮：异黄酮：n 具有不可逆抑制酪氨酸酶活性作用具有不可逆抑制酪氨酸酶活性作用 n面包树面包树(Artocarpus incisus)(Artocarpus incisus)或龙胆或龙胆( (根根) (Sophora ) (Sophora flavescens)flavescens)分别的间苯二酚特有的侧基与分别的间苯二酚特有的侧基与C4, C5 C4, C5 或或C8C8位置置换抑制酪氨酸酶活性位置置换抑制酪氨酸酶活性2.1 2.1 抑制酪氨酸酶活性或表达抑制酪氨酸酶活性或表达 n对天然化合物进展修饰，如经对天然化合物进展修饰，如经Veratrum patulumVeratrum patu

9、lum提取物的纤维素酶的处置，使二苯乙烯化合物去提取物的纤维素酶的处置，使二苯乙烯化合物去糖基化，可提高对酪氨酸酶的抑制造用。糖基化，可提高对酪氨酸酶的抑制造用。 2.1 2.1 抑制酪氨酸酶活性或表达抑制酪氨酸酶活性或表达 nN-N-乙酰氨基葡萄糖乙酰氨基葡萄糖(Nacetylglucosamine(Nacetylglucosamine，NAG)NAG)是构成细胞外基质透明质酸的主要成分，部分外是构成细胞外基质透明质酸的主要成分，部分外用用NAGNAG可以减轻女性面部皮肤色素冷静。能够与可以减轻女性面部皮肤色素冷静。能够与抑制酪氨酸酶的糖基化有关。抑制酪氨酸酶的糖基化有关。2.1 2.1 抑

10、制酪氨酸酶活性或表达抑制酪氨酸酶活性或表达 2.2 2.2 抑制黑素向角质构成细胞转移抑制黑素向角质构成细胞转移n蛋白酶激活受体蛋白酶激活受体2 2PAR-2PAR-2对于黑素小体从黑素细对于黑素小体从黑素细胞向角质构成细胞的转移非常重要，可以用于皮肤胞向角质构成细胞的转移非常重要，可以用于皮肤美白的靶点。美白的靶点。n维生素维生素B3B3衍生物烟酰胺是一种抑制黑素小体转移的衍生物烟酰胺是一种抑制黑素小体转移的制剂。制剂。 n黑素细胞表达高程度的黑素细胞表达高程度的sAPPsAPPnsAPPsAPP在经过树突末梢释放黑素小粒过程中能够发扬重在经过树突末梢释放黑素小粒过程中能够发扬重要的作用要的

11、作用n阻断阻断sAPPsAPP信号能够是另一种影响黑素小体保送的途径信号能够是另一种影响黑素小体保送的途径2.2 2.2 抑制黑素向角质构成细胞转移抑制黑素向角质构成细胞转移2.3 2.3 抑制氧化反响抑制氧化反响减少黑素细胞中活性氧减少黑素细胞中活性氧ROSROS程度能够阻止黑素合成的活化程度能够阻止黑素合成的活化 FujiwaraFujiwara等发现每日给棕色豚鼠服用维生素等发现每日给棕色豚鼠服用维生素C C抗坏血抗坏血酸、维生素酸、维生素E E和半胱氨酸可减少和半胱氨酸可减少UVBUVB诱导的色素冷静诱导的色素冷静维生素维生素C C更稳定的衍生物如抗坏血酸葡糖苷和抗坏血酸棕更稳定的衍生

12、物如抗坏血酸葡糖苷和抗坏血酸棕榈酸酯已被用在不同的皮肤美白配方中榈酸酯已被用在不同的皮肤美白配方中 2.4 2.4 抑制炎症介质抑制炎症介质n马尾藻提取物具有抑制炎症介质产生的作用。经过马尾藻提取物具有抑制炎症介质产生的作用。经过这种间接的方法减少色素细胞内黑素生成。这种间接的方法减少色素细胞内黑素生成。2.5 调理黑素生成信号通路调理黑素生成信号通路2.5 2.5 调理黑素生成信号通路调理黑素生成信号通路nUVUV反响经过反响经过cAMPcAMP和和PKAPKA介导信号系统及蛋白激酶介导信号系统及蛋白激酶C C (PKC)(PKC)，能够添加小眼畸形转录因子，能够添加小眼畸形转录因子(MIT

13、F)(MITF)表达，导表达，导致酪氨酸酶活化。致酪氨酸酶活化。n经过特异性经过特异性PKCPKC抑制剂抑制剂bisindolylmaleimide (bis)bisindolylmaleimide (bis)可减少豚鼠的晒黑反响，使其毛发颜色变淡。可减少豚鼠的晒黑反响，使其毛发颜色变淡。 n信号系统可诱导多种途径产生碱性成纤维细胞生长因信号系统可诱导多种途径产生碱性成纤维细胞生长因子子(bFGF)(bFGF)、肝细胞生长因子、肝细胞生长因子(HGF)(HGF)、干细胞因子、干细胞因子(SCF)(SCF)、内皮素、内皮素-1 (ET-1)-1 (ET-1)、促肾上腺皮质激素、促肾上腺皮质激素A

14、CTHACTH和和-促黑激素促黑激素(-MSH)(-MSH)，结合黑素细胞上，结合黑素细胞上的受体，刺激色素产生。的受体，刺激色素产生。2.5 2.5 调理黑素生成信号通路调理黑素生成信号通路nWnt/-catenin途径途径 ：n Wnt蛋白和其受体的结合可被蛋白和其受体的结合可被Dikkopf 1(DKK1)抑制，抑制，DKK1是一种成纤维细胞分泌的因子，可是一种成纤维细胞分泌的因子，可抑制黑素细胞生长并剧烈抑制黑素生成。抑制黑素细胞生长并剧烈抑制黑素生成。 2.5 2.5 调理黑素生成信号通路调理黑素生成信号通路nSCF/c-kit途径：途径：n 肝细胞因子是一种结合于肝细胞因子是一种结

15、合于c-kit受体受体 (CD117)的细的细胞因子，活化胞因子，活化c-kit而导致多重信号级联的活化。而导致多重信号级联的活化。 n Na等发现苯基咪唑磺酰胺衍生物阻止干细胞因等发现苯基咪唑磺酰胺衍生物阻止干细胞因子诱导的人类黑色素瘤细胞子诱导的人类黑色素瘤细胞ckit磷酸化，进而阻磷酸化，进而阻止了止了UV诱导的棕色豚鼠的色素冷静。诱导的棕色豚鼠的色素冷静。 2.5 2.5 调理黑素生成信号通路调理黑素生成信号通路nYaar等提出骨构成蛋白等提出骨构成蛋白(BMPs)参与调理黑素合成。黑参与调理黑素合成。黑素细胞表达素细胞表达BMP受体并产生受体并产生BMP-4，可降低培育的人，可降低培

16、育的人黑素细胞的黑素合成。黑素细胞的黑素合成。n过氧化物酶体增殖子活化受体过氧化物酶体增殖子活化受体(PPAR)：十八碳烯二酸：十八碳烯二酸octadecenedioic acid结合结合PPAR降低黑素合成和酪降低黑素合成和酪氨酸酶表达。氨酸酶表达。2.5 2.5 调理黑素生成信号通路调理黑素生成信号通路nKimKim等报道细胞外信号调理激酶等报道细胞外信号调理激酶(ERK)(ERK)的信号通路可的信号通路可调理黑素生成。生长因子调理黑素生成。生长因子bFGFbFGF和和HGFHGF和细胞因子和细胞因子(SCF)(SCF)可激发此途径。可激发此途径。n c2-c2-神经酰胺经过活化神经酰胺经

17、过活化ERKERK抑制黑素合成抑制黑素合成n 2-2-亚胺基亚胺基-1,3-1,3二氢噻唑衍生物，可经过诱导二氢噻唑衍生物，可经过诱导ERKERK降降低低B16B16黑素瘤细胞的黑素生成黑素瘤细胞的黑素生成2.5 2.5 调理黑素生成信号通路调理黑素生成信号通路土曲菌素可刺激土曲菌素可刺激ERKERK和下调和下调MITFMITF，可抑制，可抑制Mel-abMel-ab黑素细黑素细胞黑素合成胞黑素合成咪唑衍生物咪唑衍生物AVS-7AVS-7，可经过活化，可经过活化ERKERK和下调和下调MITFMITF、酪氨、酪氨酸酶减少色素生成酸酶减少色素生成Haginin AHaginin A抑制酪氨酸酶并

18、活化抑制酪氨酸酶并活化ERKERK，下调，下调MITFMITF、酪氨、酪氨酸酶和酸酶和TRP-1TRP-1，降低棕色豚鼠和斑马鱼模型系统的色素，降低棕色豚鼠和斑马鱼模型系统的色素冷静冷静2.5 2.5 调理黑素生成信号通路调理黑素生成信号通路 1. 1.研讨方法研讨方法 2.2.研讨方向研讨方向 3.3.美白剂的运用美白剂的运用3 3、美白剂的运用、美白剂的运用n氢醌氢醌(HQ)作为有效美白制剂曾广泛运用，但最近已作为有效美白制剂曾广泛运用，但最近已被禁用，由于存在严重的平安问题：能够导致突变，被禁用，由于存在严重的平安问题：能够导致突变，添加非洲国家褐黄病的发生率。添加非洲国家褐黄病的发生率

19、。 n曲酸、熊果苷和壬二酸常用曲酸、熊果苷和壬二酸常用n熊果苷是氢醌的糖基化方式，存在于熊果提取物中，熊果苷是氢醌的糖基化方式，存在于熊果提取物中，也可由氢醌经也可由氢醌经(葡萄葡萄)糖苷酶作用来合成。糖苷酶作用来合成。n脱氧熊果苷是是去除熊果苷全部葡萄糖侧链中的羟基脱氧熊果苷是是去除熊果苷全部葡萄糖侧链中的羟基组制得，毒性明显低于熊果苷。组制得，毒性明显低于熊果苷。 3 3、美白剂的运用、美白剂的运用熊果提取物熊果提取物-熊果苷的自然来源能够加强熊果苷的自然来源能够加强MeladermMeladerm和和LucedermLucederm制剂中制剂中-熊果苷的作用。熊果苷的作用。 桑椹和甘草活

20、性成分具有酪氨酸酶抑制造用桑椹和甘草活性成分具有酪氨酸酶抑制造用(TI)(TI)和色素减和色素减少少(PI)(PI)的作用。的作用。 3 3、美白剂的运用、美白剂的运用n柠檬提取物作为一种有效的皮肤脱色成分运用于柠檬提取物作为一种有效的皮肤脱色成分运用于Skin Skin Bright, LucedermBright, Lucederm和和MeladermMeladerm等国外产品。但高浓度等国外产品。但高浓度容易引起皮肤刺激。容易引起皮肤刺激。n槐属槐属SophoraSophora的一些活性成分作为酪氨酸酶和色素生的一些活性成分作为酪氨酸酶和色素生成有效的抑制剂用于成有效的抑制剂用于LiBi

21、olLiBiol的的SynerlightSynerlight产品中。产品中。 3 3、美白剂的运用、美白剂的运用n猕猴桃中的黄酮类如槲皮素用于抑制黑素生成猕猴桃中的黄酮类如槲皮素用于抑制黑素生成n n烟酰胺除具有抑制酪氨酸酶作用外，还干扰黑素小体烟酰胺除具有抑制酪氨酸酶作用外，还干扰黑素小体向角质构成细胞的转移，用于向角质构成细胞的转移，用于MeladermMeladerm和和LucedermLucederm产产品中品中 3 3、美白剂的运用、美白剂的运用nRevitolRevitol公司的公司的Skin BrightenerSkin Brightener产品含有二乙酰波产品含有二乙酰波尔定碱

22、尔定碱diacetyl boldinediacetyl boldine可影响酪氨酸酶表达可影响酪氨酸酶表达程度。程度。 nBayerBayer公司的公司的MandresyMandresybutterfly treebutterfly tree含有两含有两种化合物四羟黄酮和毛蕊花糖苷，不仅抑制酪氨酸种化合物四羟黄酮和毛蕊花糖苷，不仅抑制酪氨酸酶和色素生成，而且经过减少树突的构成影响角质酶和色素生成，而且经过减少树突的构成影响角质构成细胞和黑素细胞之间的相互作用。构成细胞和黑素细胞之间的相互作用。 3 3、美白剂的运用、美白剂的运用nMeladermMeladerm和和TossekiTosseki

23、美白乳含有多种明显抑制酪氨酸美白乳含有多种明显抑制酪氨酸酶的提取物的混合物桑椹、甘草、槐属和蔷薇红酶的提取物的混合物桑椹、甘草、槐属和蔷薇红酰胺，还含有其他抗氧化剂或抗炎剂。酰胺，还含有其他抗氧化剂或抗炎剂。 nMeladermMeladerm制剂中的一种成分是制剂中的一种成分是TegoCosmoTegoCosmo，含有一种，含有一种胍化合物，影响酪氨酸酶活性。另一种成分是胍化合物，影响酪氨酸酶活性。另一种成分是Giga Giga whitewhite，含有阿尔卑斯山不同植物的提取物，能够具，含有阿尔卑斯山不同植物的提取物，能够具有酪氨酸酶抑制造用。有酪氨酸酶抑制造用。 3 3、美白剂的运用、美白剂的运用nLipotecLipotec公司在其美白产品中运用二甲基甲氧基苯并公司在其美白产品