HPLC法测定北苍术中苍术素的含量

1、HPLCHPLC 法测定北苍术中苍术素的含量法测定北苍术中苍术素的含量摘要：摘要：苍术具有燥湿健脾，祛风湿的功效。主治湿阻中焦，风寒湿痹，脚膝肿痛，痿软无力，雀目夜盲。 采用高效液相色谱法测定了北苍术挥发油中苍术素含量。该实验采用岛津 LC-8A 高岛效色谱仪，以甲醇-水溶液为流动相进行梯度洗脱,其中甲醇的流速为 0.8mL/m in,水的流速为 0.2mL/m in。实验结果如下：北苍术挥发油中苍术素的含量为 6.28%。该方法操作简单,结果准确,重现性好,无需再作处理，无环境污染，可用于北苍术挥发油中苍术素含量的测定,具有很高的实用价值。关键词关键词: : 高效液相色谱法 含量测定 北苍术

2、 苍术素 挥发油目录引言.11.实验内容.21.1 仪器及试剂 .21.2 色谱条件的选择 .21.3 高效液相色谱法（HPLC）的原理 .21.4 北苍术中挥发油的提取 .21.5 标准曲线的绘制 .21.6 苍术素的含量测定 .32.结果.32.1 标准曲线 .32.2 高效液相色谱图 .42.3 苍术术的含量 .53.讨论.54.结论.5参考文献.6致 谢.7引言：引言：中药苍术为菊科植物茅苍术 Atractylodes lan-cea(Thunb. ) DC.或北苍术 Atractylodes chinen-sis(DC. ) Koidz.的干燥根茎,始载于神农本草经,具有燥湿健脾、祛

3、风湿、明目之功效,临床仍用于湿滞中焦证、风湿痹证及外感风寒挟湿之表证，为中医常用药材之一。与苍术燥湿健脾功效相关的药理作用为调整胃肠运动功能，抗溃疡（苍术有较强的抗溃疡作用。实验发现，北苍术对幽门结扎型溃疡、幽门结扎-阿司匹林溃疡、应激性溃疡有较强的抑制作用，能显著抑制溃疡、动物的胃液量、总酸度、总消化能力及胃黏膜损害。研究认为，苍术抗溃疡作用机理主要有两个方面： 抑制胃酸分泌：北苍术挥发油中的苍术醇能抑制甾体激素的释放，减轻甾体激素对胃酸分泌的刺激。 增强胃黏膜保护作用：北苍术可使胃黏膜组织血流量增加，从苍术中提取的氨基己糖具有促进胃黏膜修复作用。 ） ，保肝，抑菌等作用。而降血糖，抗缺氧，

4、中枢抑制，抗肿瘤，促进骨骼钙化及对心血管系统的影响等作用，则是其药理作用的现代研究进展。苍术的主要化学成分如下： 苍术根茎含挥发油，挥发油 中主含苍术素（atractylodin） 、-桉油醇（-eudesmol） 、茅术醇（hinesol） 、羟基苍术酮（hydroxy-atractylon）等。其余主含 -桉叶醇和苍术呋喃烃，还含 -芹子烯，左旋的 甜没药萜醇（ -bisabolol） ，茅术醇，榄香醇，苍术酮，芹子二烯酮等。又含聚乙炔化合物：苍术呋喃烃醇（atractyoldinol)，乙酰基苍术呋喃烃醇（ acetyl-tractylodinol） 。苍术素的结构式 ： 苍术素的性状为

5、 brown powder，分子式为 C13H10O，分子量为182.2179。 其药理作用为保肝，抗缺氧，降血糖，抗炎抗肿瘤，抗菌抗病毒，抗心律失常，对消化道的作用及对神经系统的作用等。 中国药典至今仅有其对照药材(苍术素)的鉴别,尚无其含量测定标准。苍术的主要有效成分为聚乙炔类成分,即主要为苍术素。本文以苍术素为指标,采用高效液相色谱法(HPLC)建立了北苍术中挥发油的有效成分苍术素的含量测定方法,为苍术的质量标准研究提供了依据与方法。1.1.实验内容实验内容1.1 仪器及试剂 仪器：DW-2 型调温电热器（规格 5000ml，功率 1000w） ，回流冷凝管（直型） ，挥发油提取器，50

6、00ml 圆底烧瓶，变压器，15ml 容量瓶，胶头滴管，2ml移液管，试剂瓶，超声波清洗器，一次性针管，微孔滤膜，电子天平，Shimadzu LC-8A 制备型高效液相色谱仪。 试剂： 北苍术，甲醇（CH3OH） ，乙酸乙酯(Et0Ach)，水，苍术素对照品。1.2 色谱条件的选择色谱条件的选择:选择了甲醇-水常见的流动相系统,结果表明在这个系统中色谱峰的峰形较好,基线平稳,故选择甲醇-水系统为流动相。当采用体积分数为50%的甲醇-水溶液等度洗脱时,苍术素出峰太慢，时间太长;当采用体积分数为80%的甲醇-水溶液等度洗脱时,苍术素出峰时间为 10min 左右，时间较合理，此时色谱峰的峰形较好,基

7、线平稳，因此最终优化的色谱条件如下：进样体积:20L;流动相:水(A)-甲醇(B)溶液,其中泵 A（水）的流速为 0.2ml/min、泵B（甲醇）的流速为 0.8ml/min。1.3 高效液相色谱法（HPLC）的原理 高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品

8、浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。1.4 北苍术中挥发油的提取 称取 500.8g 北苍术，将其放入 5000ml 圆底烧瓶内，并加水至圆底烧瓶1/2 处，然后将其放置于 DW-2 型调温电热器内，在圆底烧瓶口装上挥发油提取器，接着在提取器口上套上回流冷凝管，接上水，打开电源，开始加热。加热两个小时左右开始沸腾，等待提取器中挥发油的出现，并提取 1ml 左右的挥发油。1.5 标准曲线的绘制 首先称取苍术素纯品 5.0mg，放入 1 号 15ml 容量瓶中，接着取 10ml 乙酸乙酯放入 1 号瓶内，然后用超声波加速溶解 10min，取出待冷却后，加甲醇至刻度线，摇匀。接着

9、用移液管从 1 号容量瓶中移取 12.5ml 的溶液置于 2 号容量瓶中，再向 2 号中加甲醇至刻度线，依次类推，完成 3 号、4 号、5 号、6 号容量瓶溶液的配制，则六瓶溶液浓度依次递减。然后按浓度由小到大的顺序依次进样，即分别精密吸取0.0000172mol/L，0.0000343mol/L，0.0000687mol/L，0.000137mol/L，0.000275mol/L，0.000549mol/L 各20L，每个浓度进样两次，测两次峰面积，最后平均同一浓度下的两次峰面积，结果见表一。接着以平均后的峰面积为纵坐标，苍术素的浓度为横坐标，绘制标准曲线，见图（1） ，得方程方程y=639

10、7683284.6435x+78880.1304，相关系数 R2=0.9942，R=0.9971。1.6 苍术素的含量测定将溶于甲醇的挥发油（挥发油为 0.0497g）转移至 15ml 的容量瓶中，加甲醇至刻度线，可再加 2ml 乙酸乙酯助溶。摇匀，然后用移液管从中取出 1ml，移至小试剂瓶中，再加 1ml 甲醇稀释，摇匀，用微型滤膜过滤。接着取 20L该溶液，注入高效液相色谱仪中，在 10min 处开始出峰，见图（2） 。重复操作一次，最后平均两个峰面积。将该峰面积代入标准曲线方程，最后计算挥发油中苍术素的含量，即北苍术挥发油中苍术素的含量为 6.28%。2.2.结果结果2.1 标准曲线表

11、2-1 序号坐标123456浓度（mol/L）0.0005490.0002750.0001370.00006870.00003430.0000172平均峰面积(mAU)3607625.71722134.81113581.15579613.1245391.7122109.5苍术素标准曲线y = 6397683284.6435 x + 78880.1304R2 = 0.99420500000100000015000002000000250000030000003500000400000000.0001 0.0002 0.0003 0.0004 0.0005 0.0006浓度峰面积图（1）苍术素标准

12、曲线2.2 高效液相色谱图图（2）苍术素样品溶液高效液相色谱图图（3）苍术素标准品溶液高效液相色谱图2.3 苍术素的含量 北苍术挥发油中苍术素的平均峰面积为 2111301.2，将该数据代入方程y=6397683284.6435x+78880.1304，得其中苍术素浓度为 3.17710-4 mol/L，再经进一步计算，最终得北苍术挥发油中苍术素的含量为 6.28%。2.2.讨论讨论采用本文建立的苍术素含量的测定方法,即运用高效液相色谱法（HPLC)，此方法简单、可靠、易于操作、重现性好、无需再作处理、无环境污染，对于北苍术挥发油中苍术素含量的测定,具有很高的实用价值。实验结果：北苍术挥发油中

13、苍术素的含量为 6.28%。高效液相色谱以经典的液相色谱为基础，是以高压下的液体为流动相的色谱过程。通常所说的柱层析、薄层层析或纸层析就是经典的液相色谱。所用的固定相为大于 100um 的吸附剂（ 硅胶、氧化铝等）。这种传统的液相色谱所用的固定相粒度大，传质扩散慢，因而柱效低，分离能力差，只能进行简单混合物的分离。而高效液相所用的固定相粒度小（5um-10um）、传质快、柱效高。当然我们在操作高效液相色谱仪时，失误也是有的，例如进样是对的，却不出峰、或者出峰有偏差。但经过讨论和总结，明白了要确保高效液相色谱仪出峰，就要在注射样品溶液后快速、平稳地从 LOAD 状态转换到 INJECT 状态,以

14、保证进样量的准确。苍术素在消化道系统、抗炎、利胆及黄嘌呤氧化酶(XO)阻碍等方面均显示良好的活性,其活性与苍术药材本身的功效接近;另外,该类成分主要存在于苍术中,且含量较高。因此以苍术素为指标,建立其含量测定方法更为合理。3.3.结论结论本文建立的苍术素含量的测定方法,即运用高效液相色谱法（HPLC)，此方法简单、可靠、易于操作、重现性好、无需再作处理、无环境污染，对于北苍术挥发油中苍术素含量的测定,具有很高的实用价值。建议有关部门将本方法作为苍术质量标准中含量测定的检测方法。参参 考考 文文 献献1 陈炎明,侴桂新,王峥涛，等. 反相高效液相色谱法同时测定苍术中的两种聚乙炔类化合物J . 色

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