ABO血型鉴定作业指导书

1、沭阳县人民医院检验科临床检验室ABO血型鉴定(玻片法)作业指导书文件编号：Q-1版本：第一版页号/总页数：1/5 ABO血型鉴定(玻片法)作业指导书1 检验目的鉴定ABO血型，不仅对某种具体疾病的诊断与治疗如母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病，还能对输血、器官移植具有重要意义(受者与供者ABO血型必须完全符合后才能输血或移植)。2 检测原理红细胞血型抗原与相应抗体特异结合，可发生凝集反应。通过正、反定型试验来确定ABO血型。正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原和（或）B抗原；反定型是用已知A抗原和B抗原红细胞来测定血清中有无相应的抗A 和（或）抗B抗体。3 性能参数

2、红细胞血型鉴定是一个定性试验，目前还没有测定性能指标。4 标本4.1 抽取患者静脉血标本3mL置于紫色瓶盖的真空试管内（内含EDTA-K2抗凝剂）。4.2 采血后应立即送到临检科血型室。4.3 样品收到后立即分离血浆（以备反定使用），不能及时鉴定的血液标本应存28冰箱保存。4.4 严重溶血或脂血的标本不能测定。5 设备和试剂5.1 血型定型试剂：标准抗血清、标准血球（长春生物制品研究所）。5.2 血型定型试剂应存放在28冰箱保存。5.3 标准血球使用前必须颠倒彻底混匀，超过失效期的所有试剂不能使用。5.4 清洁的一次性塑料试管（配患者5%红细胞盐水悬液，分离患者血浆标本使用）。6 容器和添加剂

3、采集血样使用一次性含EDTA-K2抗凝剂的真空试管(紫色盖)。7 试剂鉴定步骤每一批试剂必须做效价、亲和力及特异性测定。7.1 标准血清效价滴定沭阳县人民医院检验科临床检验室ABO血型鉴定(玻片法)作业指导书文件编号：Q-1版本：第一版页号/总页数：2/57.1.1 取清洁干燥的一次性塑料试管，分别标明A、B，每排标明稀释倍数2、4.264，最后一管为对照管。7.1.2 每管各加生理盐水0.2mL。7.1.3 第一排第一管加标准抗B血清0.2mL，第二排第一管加标准抗A血清0.2mL。7.1.4 分别用吸管将第一管内的溶液吸放3次，使之混均，吸0.2mL至第二管并混均，依次连续稀释至第8管，混

4、均后弃去0.2mL，最后一管不加血清，作为盐水对照。7.1.5 分别加入相应的2%红细胞悬液0.2mL，既第一排加B型红细胞，第二排加A型红细胞。7.1.6 将试管架振摇使之混均，置室温一小时，用肉眼观察结果。对照管应无凝集现象。抗A效价应不低于1：128，抗B不低于1：64为合格。7.2 标准血清亲和力试验取清洁玻片1块，分别标明抗A、抗B，各取相应的标准血清0.5mL，放置标记处，在吸取10%相应红细胞盐水悬液0.1mL，置于血清旁，摇动玻片使血清与红细胞混合，同时开始记时，记录开始出现凝集的时间，3min时观察凝块的大小，抗血清的亲和力以在15s内开始凝集，3min时，凝块达1mm2以上

5、者为合格。7.3 标准血清特异性测定7.3.1 任意取10名O型人红细胞，1名A型和B型红细胞，分别配成5%红细胞盐水悬液。7.3.2 取清洁一次性的试管12支，各加受检标准抗血清1滴，第1第10分别加如O型红细胞悬液1滴，第11管加入A型红细胞悬液1滴第12管加入B红细胞悬液1滴，混匀，置室温1h，观察结果。7.3.3 如果受检血清同10个O型红细胞和同型红细胞都不凝，只与含相应抗原的红细胞凝集，则其特异性合格。7.4 标准血球特异性、亲和力测定 对于标准血球试剂，我们用以鉴定合格的标准血清做其特异性测定，亲和力试验，方法如下：7.4.1 取4支清洁的一次试管，各加以鉴定合格的标准血清抗A，

6、随机取4盒新到标准血球A血球分别加入4支试管内，混匀，室温1h，观察结果。沭阳县人民医院检验科临床检验室ABO血型鉴定(玻片法)作业指导书文件编号：Q-1版本：第一版页号/总页数：3/57.4.2 取4支清洁的一次试管，各加以鉴定合格的标准血清抗B，随机取4盒新到标准血球B血球分别加入4支试管内，混匀，室温1h，观察结果。7.4.3 如果出现特异性凝集，则其特异性合格。7.4.4 亲和力参照血清方法。8 操作步骤8.1 5%的红细胞盐水悬液的配制：取患者压积红细胞1滴，加0.8mL或（16滴）盐水将患者血配制成5%的红细胞悬液8.2 将患者标本血浆取出,放入到标记好的一次性塑料试管中,待反向定

7、型时用。8.3 取洁净玻片一张，用蜡笔或记号笔分别标明抗A、抗B。分别滴加抗A、抗B分型血清1滴于标明的方格内，再分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，将其混匀。8.4 另取洁净玻片一张，用上法划出分别标明A细胞、B细胞，用滴管各加受检者血浆1滴，再分别滴加标准A红细胞、B红细胞悬液1滴，将其混匀。8.5 不断轻轻转动玻片，在室温15分钟内肉眼观察有无凝集（溶血）反应。必要时镜检。8.6 结果判定表-用标准血清或标准红细胞鉴定ABO血型结果受检红细胞与标准血清受检血浆与标准红细胞反应血型抗A抗BAB+-+-+-+-+-+ABABO9 质量控制措施对外购标准血清及标准红细胞分别作特异性、效价及亲

8、和力鉴定。10 干扰因素冷凝集：该试验应在常温下进行以防冷凝；脂血；溶血。11 结果计算及测量不确定度红细胞血型鉴定无结果计算及测量不确定度。沭阳县人民医院检验科临床检验室ABO血型鉴定(玻片法)作业指导书文件编号：Q-1版本：第一版页号/总页数：4/512 生物参考区间红细胞血型人人都存在，无生物参考区间。13 患者检验结果可报告区间红细胞血型鉴定患者检验结果可报告区间为A型、B型、AB型和O型。14 警告/危急值红细胞血型鉴定无警告/危急值。15 实验室解释每个人都有ABO血型中的某种抗原及相应的天然抗体。血型检查的重要性不在于某种具体疾病的诊断与治疗，而在于：15.1 输血：血液是人类赖

9、以生存的重要成分。循环血量不足或血细胞的减少（大失血或贫血等），均会发生许多临床症状，甚至危及生命，此时输血是治疗与抢救生命的重要措施。输血前必须检查血型，选择血型相同的供血者，进行交叉配血完全相合才能输血。15.2 母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病，主要是依靠血型血清学检查来诊断。15.3 器官移植时，受者与供者也必须ABO血型相符才能移植。血型不符极易引起急性排异反应、导致移植失败。16 安全防护措施血型检验过程中，要穿好工作衣、带防护口罩、手套；严格按操作规程，检验结束后，要用0.2%过氧乙酸溶液擦拭实验台、显微镜手柄、载物台等。17 变异的潜在来源17.1 新生儿、年老体弱者ABO

10、血型抗体反应较弱，因而观察结果时，不可用力摇动，以免弱凝集散开而呈阴性结果。17.2 由于新鲜血清中有补体存在，抗体与相应抗原结合后，可发生溶血，故观察结果时发现有溶血现象或镜下红细胞有减少趋向，其意义与凝集相同，表现配血不合。17.3 红细胞或血清被细菌或病毒污染后，出现细菌性凝集。17.4 患者未产生ABO抗体或抗体抑制这种情况可见于；新生儿，46个月内的婴儿反向定型时可能不凝集或凝集很弱，且新生儿抗体多来自母亲，故反定向意义不大；随年龄的增长老年人抗体水平的下降：白血病、淋巴瘤以及使沭阳县人民医院检验科临床检验室ABO血型鉴定(玻片法)作业指导书文件编号：Q-1版本：第一版页号/总页数：5/5用免疫抑制药物患者；骨髓移植患者等。17.5 被检红细胞异常 弱A或弱B亚型；白血病时可使A或B抗原减弱，而误定为O型；霍奇金病也有类似白血病的情况；获得性B或获得性A表现等。17.6 被检者血浆成分异常 某些疾病如多发性骨髓瘤、霍奇金肉瘤时，可使血浆纤维蛋白原水平升高易形成串状物，外观类似凝集；应用血浆扩溶剂如低分子右旋糖酐、胰腺癌等，血浆