4-2微生物检验中的采样与样品制备ppt课件

1、GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE 食品检验食品检验微生物实验室要求及样品制备GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGEn 微生物检查验中的采样与样品制备提出微生物检验提出微生物检验中的采样与样品制中的采样与样品制备工程义务想象，备工程义务想象，分发学习义务分发学习义务GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGEn 第二节 微生物检查验中的采样与样品制备范围本规范规定了

2、食品微生物学检验根本原那么和要求。本规范适用于食品微生物学检验。 GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGEn 第二节 微生物检查验中的采样与样品制备 第四章实验室根本要求 环境人员 设备 培育基和试剂GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE设备的要求温控设备(培育箱、冰箱、冰冻机、烤箱)、丈量器具(温度计、计时器、天平、酸度计、菌落计数器等)、定容设备(吸管、自动分液器、微量移液器等)、除菌和灭菌设备(超净任务台或生物平安柜、高压灭菌锅)、其他

3、设备(显微镜、离心机、均质器等)。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE无菌室根本要求无菌室根本要求n 1)无菌室、超净任务台应设在较干净的环境内，附近无污染源。n n n GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE无菌室根本要求无菌室根本要求 (2) 室内六面应光滑平整、无缝隙，不起灰、不落尘，耐腐蚀、易清洗。墙与地面、墙壁之间相接处应有一定弧度，不留死角。室内门窗构造应密合，并尽量减少活动窗口面积。 GXNZYGUANGXI AGRICUL

4、TURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE无菌室根本要求无菌室根本要求n (3) 无菌室外应设缓冲间，其构造同无菌室，做进入无菌室之前的更衣戴帽等预备任务。n GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE无菌室根本要求无菌室根本要求n (4) 无菌室内按22.5 Wm3设置紫外线杀菌灯。应定期检查杀菌效果，对失效者应及时改换。n n (5) 无菌室关键操作点及超净任务台操作区的净化级别应为100级，即平均菌落数1个，不小于0.5m粒子数3.5个L。n n (6) 室内温度宜控制在2024，

5、湿度4560。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE无菌室的运用与管理n (1) 无菌室应坚持清洁整齐，室内仅存放最必需的检验器具如酒精灯、酒精棉、火柴、镊子、接种针、接种环、玻璃铅笔等。n GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE无菌室的运用与管理n (2) 室内检验器具及桌凳等位置坚持固定，不随意挪动。 n n (3) 每23周用2石炭酸水溶液擦拭任务台、门、窗、桌、椅及地面，然后用甲醛加热或喷雾灭菌，最后紫外灯杀菌0.5 h。GXNZY

6、GUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGEn (4) 定期检查室内空气无菌情况，细菌数应控制在10个以下，发现不符合要求时，应立刻彻底消毒灭菌。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGEn 无菌室无菌程度的测定方法：n 取普通肉汤琼脂平板、改良马丁培育基平板各3个(平板直径均9cm)，置无菌室各任务位置上，开盖暴露30min，然后倒置进展培育，测细菌总数应置37温箱培育48h；测霉菌数那么应置27温箱培育5天。细菌、霉菌总数均不得超越10个为合格。GXNZY

7、GUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGEn (5) 无菌室杀菌前，应将一切物品置于操作之部位(待检物例外)，然后翻开紫外灯杀菌30min，时间一到，封锁紫外灯待用。n n (6) 进入无菌室前，必需于缓冲间改换消毒过的任务服、任务帽及任务鞋。n n (7)操作应严厉按照无菌操作规定进展，操作中少说话，不喧哗，以坚持环境的无菌形状。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE3器材及场所的灭菌消毒n 微生物检验用器材及场所必需进展灭菌或消毒处置，不同对象采用不

8、同的处置方法。n (1) 高压蒸汽灭菌 任务服、口罩、稀释液等，置高压杀菌锅内，普通采用121灭菌30min，当然不同的培育基有不同的要求，应分别处置。n n (2) 火焰灭菌 接种针、接种环等可直接火焰灭菌。n GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE器材及场所的灭菌消毒n (3) 高温枯燥灭菌 各种玻璃器皿、注射器、吸管等，置于枯燥箱中160灭菌，2 h。n n (4) 普通消毒 无菌室内的凳、任务台、试管架、天平、待检物容器或包装均无法进展灭菌，必需用其他方法进展消毒处置，采用2石炭酸或来苏尔水溶液擦拭消毒，任务

9、人员的手也用此法进展消毒。n n (5) 空气的消毒 开启紫外灯照射3060min即可。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE4预备任务操作要领 n (1) 先进展无菌室空间的消毒，开启紫外灯3060min。n n (2) 检验用的有关器材，搬入无菌室前必需分别灭菌消毒。n GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE4预备任务操作要领 n (3) 操作人员必需将手清洗消毒，穿戴好无菌任务衣、帽和鞋，才干进入无菌室。在一切能够产生潜在感染性物质喷

10、溅的操作过程中，操作人员应将面部、口和眼遮住或采取其他防护措施。n n (4) 进入无菌室后再一次消毒手部，然后才进展检验操作。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE5操作过程本卷须知n (1) 动作要轻，不能太快，以免搅动空气添加污染；玻璃器皿也应轻取轻放，以免破损污染环境。为了防止感染性物质从移液管中滴出而分散，在任务台面该当放置一块浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸，运用后将其按感染性废弃物处置。n n (2) 操作应在近火焰区进展。n GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AN

11、D TECHNICAL COLLEGE5操作过程本卷须知n (3) 接种环、接种针等金属器材运用前后均需灼烧，灼烧时先经过内焰，使残物烘干后再灼烧灭菌。为了防止被接种物洒落，微生物接种环的直径应为23 mm并完全封锁，柄长度应小于6 cm以减小抖动。运用封锁式微型电加热器消毒接种环，可以防止在明火上加热所引起的感染性物质爆溅。最好运用不需求再进展消毒的一次性接种环。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE5操作过程本卷须知n (4) 运用吸管时，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必需用洗耳球操作。不能向含有感染性物质的溶液中吹

12、人气体。n n (5) 察看平板时不要开盖，如欲蘸取菌落检查时，必需接近火焰区操作，平皿盖也不能大开，而是上下盖适当开缝。n GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE5操作过程本卷须知n (6) 进展可疑致病菌涂片染色时，应运用夹子夹持玻片，切勿用手直接拿玻片，以免呵斥污染，用过的玻片也应置于消毒液中浸泡消毒，然后再洗涤。n (7) 任务终了，拾掇好任务台上的样品及器材，最后用消毒液(含有1有效氯的溶液或3过氧化氢的溶液也可擦拭任务台。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND T

13、ECHNICAL COLLEGE(一一) 无菌操作要求无菌操作要求n 食品微生物检验室任务人员，必需有严厉的无菌观念，许多实验要求在无菌条件下进展，主要缘由一是防止实验操作中人为污染样品；二是保证任务人员平安，防止检出的致病菌由于操作不当呵斥个人污染。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE(一一) 无菌操作要求无菌操作要求n 1. 接种时必需穿任务服、戴任务帽。n n 2进展接种食品样品时，必需穿公用的任务服、帽及拖鞋，它们应放在无菌室缓冲间，任务前经紫外线消毒后运用。应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75酒精棉球将手

14、擦干净。n GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE(一一) 无菌操作要求无菌操作要求n 3进展接种所用的吸管、平皿及培育基等必需经消毒灭菌，翻开包装未运用完的器皿，不能放置后再运用，金属器具应高压灭菌或用95酒精点熄灭灼3次后运用。n n 4从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，运用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。n GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE(一一) 无菌操作要求无菌操作要求n 5 接种样品、转种细

15、菌必需在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及翻开试管塞都要经过火焰消毒。n 6 接种环和接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的衔接处。 n n 7 吸管汲取菌液或样品时，运用相应的橡皮头汲取，不得直接用口吸。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE(二二) 无菌室运用要求无菌室运用要求n 1无菌室通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意翻开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有小窗，以备进入无菌间后传送物品。n n 2无菌室内应坚持清洁，任务后用23煤酚皂溶

16、液消毒，擦拭任务台面，不得存放与实验无关的物品。 GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE(二二) 无菌室运用要求无菌室运用要求n 3无菌室运用前后应将门关紧，翻开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯间隔在1.0 m处，照射时间、不少于30 min，运用紫外灯，应留意不得直接在紫外线下操作以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球悄然擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。n n 4处置和接种食品标本时，进入无菌室操作，不得随意出入，如需求传送物品，可经过小窗传送。GXNZYGUANGXI AGRI

17、CULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGEn 5在无菌室内如需求安装空调时，那么应有过滤安装。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE(四四) 有毒有害菌污染物处置要求有毒有害菌污染物处置要求n 微生物检验所用实验器材、培育物等未经消毒处置，一概不得带出实验室。 n 1经培育的污染资料及废弃物应放在严密的容器或铁丝筐内，并集中存放在指定地点，一致进展高压灭菌。n 2经微生物污染的培育物，必需经12130 min高压灭菌。 GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOC

18、ATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE(四四) 有毒有害菌污染物处置要求有毒有害菌污染物处置要求n 3染菌后的吸管，运用后放入5煤酚皂溶液或石炭酸液中，最少浸泡24 h (消毒液体不得低于浸泡的高度)再经121 30min高压灭菌。n n 4涂片染色冲洗片的液体，普通可直接冲入下水道，烈性菌的冲洗液必需冲在烧杯中，经高压灭菌后方可倒入下水道，染色的玻片放入5煤酚皂溶液中浸泡24h后，煮沸洗涤。做凝集实验用的玻片或平皿，必需高压灭菌后洗涤。n GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE(四四) 有毒有害

19、菌污染物处置要求有毒有害菌污染物处置要求n 5打碎的培育物，立刻用5煤酚皂溶液或石炭酸液喷洒和浸泡被污染部位，浸泡30min后再擦拭干净。 n n 6污染的任务服或进展烈性实验所穿戴的任务服、帽、口罩等，应放入公用消毒袋内，经高压灭菌后方能洗涤。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE 样品的采集 采样原那么采样原那么 采样方案采样方案采样方法采样方法 采集样品的标志采集样品的标志 采集样品的储存和运输采集样品的储存和运输 n 微生物检查验中的采样与样品制备GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCAT

20、IONAL AND TECHNICAL COLLEGE采样原那么采样原那么 n 1 、根据检验目的、食品特点、批量、检验方法、微生物的危害程度等确定采样方案。n 2 、应采用随机原那么进展采样，确保所采集的样品具有代表性。n 3 、采样过程遵照无菌操作程序，防止一切能够的外来污染。n 4 、样品在保管和运输的过程中，应采取必要的措施防止样品中原有微生物的数量变化，坚持样品的原有形状。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE采样方案采样方案n 采样方案分为二级和三级采样方案。二级采样方案设有n、c和m值，三级采样方案设有

21、n、c、m和M值。n n：同一批次产品应采集的样品件数；n c：最大可允许超出m值的样品数；n m：微生物目的可接受程度的限量值；n M： 微生物目的的最高平安限量值。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE采样方案采样方案n 注1： 按照二级采样方案设定的目的，在n个样品中，允许有c个样品其相应微生物目的检验值大于m值。n 注2： 按照三级采样方案设定的目的，在n个样品中，允许全部样品中相应微生物目的检验值小于或等于m值；允许有c个样品其相应微生物目的检验值在m值和M值之间；不允许有样品相应微生物目的检验值大于M值。

22、GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE采样方案采样方案n 例如：n=5，c=2，m=100 CFU/g，M=1000CFU/g。含义是从一批产品中采集5个样品，假设5个样品的检验结果均小于或等于m值100 CFU/g，那么这种情况是允许的；假设2个样品的结果X位于m值和M值之间100 CFU/g 1000 CFU/g，那么这种情况也是不允许的。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE各类食品的采样方法n 采样应遵照无菌操作程序，采样工具和容器

23、应无菌、枯燥、防漏，外形及大小适宜。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE各类食品的采样方法n 即食类预包装食品n 取一样批次的最小零售原包装，检验前要坚持包装的完好，防止污染。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGEn 非即食类预包装食品n 原包装小于500 g的固态食品或小于500 mL的液态食品，取一样批次的最小零售原包装；大于500 mL的液态食品，应在采样前摇动或用无菌棒搅拌液体，使其到达均质后分别从一样批次的n个容器中采集5倍或以

24、上检验单位的样品；大于500 g的固态食品，运用无菌采样器从同一包装的几个不同部位分别采取适量样品，放入同一个无菌采样容器内, 采样总量应满足微生物目的检验的要求。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGEn 散装食品或现场制造食品n 根据不同食品的种类和形状及相应检验方法中规定的检验单位，用无菌采样器现场采集5倍或以上检验单位的样品，放入无菌采样容器内, 采样总量应满足微生物目的检验的要求。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGEn 采集样品的

25、标志n 应对采集的样品进展及时、准确的记录和标志，采样人应明晰填写采样单包括采样人、采样地点、时间、样品称号、来源、批号、数量、保管条件等信息。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGEn 微生物检查验中的采样与样品制备样品检验样品检验 样品处置样品处置检验方法的选择检验方法的选择 第四章GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE样品检验n 样品处置n 1、实验室接到送检样品后应仔细核对登记, 确保样品的相关信息完好并符合检验要求。n 2、实验室应

26、按要求尽快检验。假设不能及时检验，应采取必要的措施坚持样品的原有形状，防止样品中目的微生物因客观条件的干扰而发生变化。n 3、 冷冻食品应在45 以下不超越15 min，或25不超越18 h 解冻后进展检验。GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGEn 检验方法的选择n 1、 应选择现行有效的国家规范方法。n 2、 食品微生物检验方法规范中对同一检验工程有两个及两个以上定性检验方法时，应以常规培育方法为基准方法。n 3、 食品微生物检验方法规范中对同一检验工程有两个及两个以上定量检验方法时，应以平板计数法为基准方法。GX

27、NZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGEn 第二节 微生物检查验中的采样与样品制备 第四章生物平安与质量控制生物平安与质量控制 实验室生物平安要求实验室生物平安要求 质量控制质量控制 GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGEn 第二节 微生物检查验中的采样与样品制备 第四章记录与报告记录与报告记录记录 报告报告 GXNZYGUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGEn 记录n 检验过程中应即时、准确地记录察看到的景象、结果和数据等信