动物细胞融合和单克隆抗体课件

1、 资料：资料：19701970年年LD.FryeLD.Frye和和H.EdidinH.Edidin的人的人鼠鼠细胞融合实验：分别用绿色和红色荧光染料标记细胞融合实验：分别用绿色和红色荧光染料标记两种细胞的蛋白质两种细胞的蛋白质细胞膜上的蛋白质分子能够运动细胞膜上的蛋白质分子能够运动 荧光标记荧光标记 蛋白质蛋白质诱导诱导融合融合4040分钟后分钟后37370 0C C如何实现人如何实现人- -鼠细胞融合鼠细胞融合? ? 动物融合后有何用途动物融合后有何用途? ?本资料由书利华教育网（即数理化网）为您整理2动物细胞融合和单克隆抗体动物细胞融合和单克隆抗体本资料由书利华教育网（即数理化网）为您整理

2、3温故知新温故知新问题思考Q1Q2获得白菜获得白菜-甘蓝利甘蓝利用了什么技术？用了什么技术？植物体细胞杂交植物体细胞杂交此技术的过程？此技术的过程？本资料由书利华教育网（即数理化网）为您整理4？再分化再分化？植物细胞杂交植物细胞杂交技术利用什么技术利用什么原理？原理？用什么方法可用什么方法可以诱导植物细以诱导植物细胞融合？胞融合？一、原理：细胞膜具有流动性细胞的全能性二、诱导方式：物理法、化学法植物细胞杂交植物细胞杂交技术最终获得技术最终获得什么？什么？三、用途：获得杂种植株温故知新温故知新一、动物细胞融合一、动物细胞融合1 1、概念：、概念： 是指是指 个或个或 动物细胞动物细胞 形形成成

3、细胞的过程，又称细胞的过程，又称 。两两多个多个结合结合一个一个细胞杂交细胞杂交动物体细胞杂交过程如何？与植物体细胞杂交相比有何不同？请阅读课本P52，填写下表本资料由书利华教育网（即数理化网）为您整理6比较比较获得杂交细胞获得杂种植株物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振动、电激） 化学（聚乙二醇）使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目结果诱导方法本资料由书利华教育网（即数理化网）为您整理7动物细胞融合技术意义动物细胞融合技术意义动物细胞融合的意义动

4、物细胞融合的意义1 1、细胞融合技术突破了有性杂交的局、细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。限，使远缘杂交成为可能。2 2、利用杂交瘤技术，制备、利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体单克隆抗体。生物种类生物种类细胞来源细胞来源成功年代成功年代酵母菌酵母菌鸡鸡 原生质体原生质体血红细胞血红细胞19751975年年人人胡萝卜胡萝卜腹水癌细胞腹水癌细胞原生质体原生质体19761976年年人人小鼠小鼠纤维肉瘤细胞纤维肉瘤细胞畸胎瘤细胞畸胎瘤细胞19781978年年Q1Q1、传统的抗体生产方法及缺陷是什么？、传统的抗体生产方法及缺陷是什么？ 传统的抗体生产方法是向动物体内反复注射传统的抗体生

5、产方法是向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需要的抗体。这种生产抗体的方法产量和分离所需要的抗体。这种生产抗体的方法产量和纯度都很低，而且制备的抗体特异性差。纯度都很低，而且制备的抗体特异性差。Q2Q2、B B淋巴细胞有什么特点？淋巴细胞有什么特点？ B B淋巴细胞能产生抗体，但每一个淋巴细胞能产生抗体，但每一个B B淋巴细胞淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。只分泌一种特异性抗体。二、单克隆抗体制备技术二、单克隆抗体制备技术本资料由书利华教育网（即数理化网）为您整理9思考思考 怎样大量获得化学性质单一、特异性强的抗体呢？ B

6、B淋巴细胞淋巴细胞 只分泌一种特异性抗体只分泌一种特异性抗体小鼠小鼠骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 能无限增殖能无限增殖杂交细胞杂交细胞设计思路：一个（体外不能无限增殖）体外不能无限增殖）本资料由书利华教育网（即数理化网）为您整理11单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备问题思考Q1Q2细胞两两融合后细胞两两融合后，有哪些类型？，有哪些类型？B-B;B-瘤瘤;瘤瘤-瘤瘤哪种是需要的类哪种是需要的类型，要筛选吗？型，要筛选吗？本资料由书利华教育网（即数理化网）为您整理12单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备问题思考Question经过选择培养基经过选择培养基筛选的杂交瘤细筛选的杂交瘤细胞群进行克隆是胞群进行克隆是否

7、就得到产生纯否就得到产生纯度高的抗体？度高的抗体？还需怎么办？还需怎么办？本资料由书利华教育网（即数理化网）为您整理13单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备有限稀释法稀释多次稀释稀释 对能产生特异性抗体的单个杂交瘤细胞进行克隆，即单细胞克隆。 由它产生的抗体，即单克隆抗体。将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。本资料由书利华教育网（即数理化网）为您整理14单克隆抗体单克隆抗体提取提取用特定的用特定的选择性培养基选择性培养基1.单抗制备过程中应用了那些技术？动物细胞融合动物细胞培养2.此过程中至少进行了几次筛选？目的相同吗？3.单克隆抗体的优点？特异性强，灵敏度高，可大量制备。本资料由书利华教育网（即

8、数理化网）为您整理16（1）作为诊断试剂）作为诊断试剂最广泛应用最广泛应用准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用本资料由书利华教育网（即数理化网）为您整理17单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用本资料由书利华教育网（即数理化网）为您整理181 1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B.B.没经过免疫的没经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细

9、胞C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞A2.2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ）A.A.诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B.B.所用的技术手段基本相同所用的技术手段基本相同 C. C. 操作步骤基本相同操作步骤基本相同 D. D. 都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞 D考考你考考你本资料由书利华教育网（即数理化网）为您整理193. 3. 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（ ）A.A.由小鼠能产生抗体的由小鼠能产生抗

10、体的B B淋巴细胞与肝细胞融合淋巴细胞与肝细胞融合 B.B.由小鼠一个由小鼠一个B B淋巴细胞诱导融合而成淋巴细胞诱导融合而成 C.C.由小鼠一个由小鼠一个B B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.D.由小鼠一个由小鼠一个B B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成 D4.4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（ ）A APEGPEG B B灭活的病毒灭活的病毒 C C电刺激电刺激 D D离心离心B考考你考考你本资料由书利华教育网（即数理化网）为您整理205. 5. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单

11、克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B B淋巴淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 （ ）淋巴细胞淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞 B B淋巴细胞自淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞杂交瘤细胞A.A. B. B.C.C. D.D. C C考考你考考你 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案风杆菌的实验方案2、该方案能达到预期效果吗

12、？为什么？、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中、图中B为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继作为诱导剂，该细胞继承承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,又能又能_。1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_3、A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_5、C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段，其培养两个阶段，其中中_代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体制备单克隆抗体B淋巴细胞淋巴细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限

13、增殖原代原代传代传代50B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC练一练练一练A 、 B细胞为动物细胞细胞为动物细胞,请据图回答问题请据图回答问题:A细胞细胞B细胞细胞C细细胞胞D细细胞胞(1)若若A细胞为骨髓瘤细胞细胞为骨髓瘤细胞B细胞为淋巴细胞细胞为淋巴细胞,那么那么D细胞细胞称为称为 细胞细胞,D细胞具有两个亲本细胞的特征细胞具有两个亲本细胞的特征,一方一方面因具有骨髓瘤细胞的面因具有骨髓瘤细胞的 性质性质,通过通过 方式方式产生大量细胞产生大量细胞,我们称之为我们称之为 过程过程;另一方面能分泌另一方面能分泌大量的抗体大量的抗体,我们把该过程分泌的抗体称我们把该过程分泌的抗体称 .杂交瘤杂交瘤连续分裂连续分裂有丝分裂有丝分裂单克隆单克隆单克隆抗体单克隆抗体练一练练一练(2)D细胞中产生的抗体其化学本质是细胞中产生的抗体其化学本质是 ,合合成该物质的场所是成该物质的场所是 ,它是由它是由 控制控制合成的合成的,合成过程包括合成过程包括 和和 两个重要步骤两个重要步骤.球蛋白球蛋白核糖体核糖体基因基因转录转录翻译翻译(3)D细胞中产生的抗体具有细胞中产生的抗体具有 作用作用,与血清抗与血清抗体相比其优越之处在于体相比其优越之处在于 强强, 高高.免疫免疫特异