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文档简介
1、学习必备欢迎下载选修三、背诵材料:1、基因工程是在 dna 分子水平上进行设计和施工的, 又叫做 dna 重组技术;变异类型基因重组2、基因工程的基本工具限制酶、 dna 连接酶、运载体(常见的是质粒)3、限制酶的功能:能够识别特定的脱氧核苷酸序列,并在特定位点将两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,因此具有专一性;切割时不能破坏目的基因、标记基因;4、酶dna 连接酶:连接两个双链dna 片段形成磷酸二酯键 ; 限制酶:催化磷酸二酯键水解,形成dna 片段;dna 聚合酶:单个脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键, 解旋酶:氢键断开rna 聚合酶:单个核糖核苷酸之间形成磷酸二酯键dna 酶:催化磷酸二酯键
2、水解,形成脱氧核苷酸5、基因工程的基本操作程序是:目的基因的猎取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定7、目的基因的来源:(1)从自然界中已有的物种中分别; (2)人工合成【常用方法有逆转录法(提取目的基因的 mrna_ 和化学合成法 _,】猎取目的基因的方法有: 从基因文库中猎取、 利用 pcr 技术扩增目的基因, 人工合成9、基因工程的核心是基因表达载体的构建(限制酶+dna 连接酶处理质粒和目的基因);基因表达载体的组成是:启动子目的基因终止子标记基因+复制原点;启动子:位于 dna 上,其上有 rna 聚合酶识别和结合的位点,驱动转录起始密码:位于 mrna 上
3、,开头翻译标记基因的作用:鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞挑选出来;常用的标记基因是抗生素抗性基因(培育基中加入抗生素进行挑选);目的基因与标记基因一般不是同一种基因;11、(1) )将目的基因导入植物细胞:采纳最多的方法是 农杆菌转化法( ti 质粒上的 t-dna 可转移至受体细胞的染色体) ,其次仍有 基因枪法和 花粉管通道法等;受体细胞如是体细胞,仍要利用植物组织培育技术;(2) 将目的基因导入动物细胞: 最常用的方法是 显微注射技术; 受体细胞一般是 受精卵(具有全能性) ,如为体细胞,就需采纳细胞核移植技术;(3) 将目的基因导入微生物细胞:钙离子处理,使细
4、胞成为感受态细胞;12、目的基因的检测与鉴定:第一要检测 转基因生物的染色体 dna上是否插入了目的基因,方法是采纳 dna 分子杂交技术;其次仍要检测 目的基因是否转录出了mrna ,方法是采纳分子杂交技术;(都用基因探针:用放射性同位素标记的目的基因的单链,原理都是碱基互补配对)最终检测 目的基因是否翻译成蛋白质,方法是抗原抗体杂交;都是观看有没有杂交带;有时仍需进行 个体生物学水平的鉴定, 即接种试验(即用病原体感染或让虫子吃);基因工程的优点:定向改造生物的遗传性状14、蛋白质工程通过基因修饰或基因合成, 对现有蛋白质进行改造, 或制造一种新的蛋白质, 以满意人类的生产和生活的需求;
5、基因工程在原就上只能生产自然界已存在的蛋白质,而蛋白质工程生产的蛋白质是自然界不存在的;学习必备欢迎下载程序:15、植物组织培育技术原理:植物细胞的全能性;植物体细胞杂交技术原理是: 细胞膜的流淌性和植物细胞的全能性, 意义: 克服了远缘杂交的不亲和的障碍;植物细胞全能性实现的条件:离体、肯定的养分物质、植物激素(生长素、细胞分裂素)、相宜的外界条件;16、植物组织培育技术 无菌操作 过程:脱分化再分化离体的植物器官、组织或细胞愈伤组织胚状体、丛芽等 植物体;20、动物细胞培育的流程:取动物组织块(动物胚胎或幼龄动物的器官或组织)剪碎用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞制成细胞悬液转入培育
6、瓶中到10代(原代培育)显现接触抑制的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞连续传代培育到50 代左右绝大多数细胞死亡, 少数成为无限增殖的细胞系(癌变特点) ;原理:细胞增殖21、动物细胞培育需要满意以下条件:无菌、无毒的环境:培育液应进行无菌处理;通常仍要在培育液中添加肯定量的抗生素,以防培育过程中的污染;此外,应定期更换培育液,防止代谢产物积存对细胞自身造成危害;养分:合成培育基成分:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等;通常需加入血清、血浆等自然成分;温度:相宜温度:哺乳动物多是36.5 0.5; ph: 7.2 7.4;气体环境: 95%空气 5%co2;o2 是细胞
7、代谢所必需的, co2 的主要作用是维护培育液的 ph;22、动物体细胞核移植技术中选用去核卵 母细胞做受体细胞的缘由:含有使细胞核表达全能性的物质原理:细胞核的全能性;25、动物细胞融合最大的应用制备单克隆抗体;单克隆抗体的制备中必需事先对小鼠注射特定抗原,使其产生浆细胞( b 淋巴细胞),然后与骨髓瘤细胞融合,得到 3 种融合的细胞;因此需要经过两次挑选,第一次用挑选性培育基,选出杂交瘤细胞,其次次需要进行克隆化培育和抗体检测,选出能分泌所需单一抗体的杂交瘤细胞;26、(1)杂交瘤细胞的特点:既能大量繁衍,又能产生专一的抗体;(2)单克隆抗体的优点:特异性强,灵敏度高,并能大量制备;27、
8、精卵结合第一发生的是顶体反应防止多精入卵的的两道屏障:透亮带反应,卵黄膜封闭作用判定受精的依据:透亮带和卵黄膜间隙有两个极体28、动物早期胚胎发育的基本过程是: 受精卵桑椹胚囊胚原肠胚(1) 卵裂期的特点是:细胞有丝分裂,细胞数量不断增加,但胚胎的总体积并不增加,或略有减小;(2) 桑椹胚前细胞具有全能性;(3) 囊胚的特点是:开头显现分化(内细胞团的细胞仍有全能性) ,集合在胚胎一端个体较大的细胞称为内细胞团,将来发育成胎儿的各种组织, 外围的细胞为滋养层细胞,中间的空腔称为囊胚腔;29、胚胎干细胞来源于早期胚胎或从原始性腺中分别出来,主要特性是: 在形状上表现为体积小,细胞核大,核仁明显;
9、在功能上,具有发育的全能性, 可分化为成年动物体内任何一种组织细胞;30、试管动物的培育过程:体外受精、早期胚胎培育、胚胎移植;(1) 体外受精过程是:卵母细胞的采集和培育精子的采集和获能 受精;(2) 采集的卵母细胞必需培育到减数其次次分裂中期,采集的精子必需进行获能处理;学习必备欢迎下载获得更多卵母细胞的方法:超数排卵处理,(注射促性腺激素)31、胚胎移植时要移植到同种的、 生理状态相同的其它雌性动物的体内, 其中胚胎移植是胚胎工程的最终一道“工序” ;胚胎移植的意义:充分发挥雌性优良个体的繁衍才能;32、胚胎移植的生理学基础:动物发情排卵后,同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的;
10、这就为供体的胚胎移入供应相同的生理环境;早期胚胎在肯定时间内处于游离状态;这就为胚胎收集供应了可能;受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应; 这为胚胎的存活供应了可能;供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系,但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响;33、胚胎移植的基本程序主要包括:对供、受体的挑选和处理; 【挑选:供体要求遗传性能和生产性能优秀的个体, 受体要求有健康的体质和正常的繁衍才能; 处理:第一用激素对供体和受体母牛进行同期发情处理; 然后用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理) 】;配种或人工授精(属于体内受精) ;对胚胎的收集(冲卵早期胚胎) 、检查、培育或储存;胚胎移植
11、;移植后检查受体是否妊娠;产下胚胎移植的新个体;胚胎移植时间:囊胚或桑椹胚如何对胚胎进行性别鉴定?取滋养层细胞做dna 分析34、胚胎分割一般挑选发育良好,形状正常的桑椹胚或囊胚;对囊胚阶段的胚胎分割时, 要将内细胞团均等分割, 否就会影响分割后胚胎的复原和进一步发育;意义:提高胚胎的利用率;属于无性繁衍;35、利用的技术:( 1)转基因植物:基因工程、植物组织培育;(2)转基因动物:基因工程、早期胚胎培育、胚胎移植;(3) 克隆动物:细胞核移植、早期胚胎培育、胚胎移植、动物细胞培育;(4) 转基因克隆动物:基因工程、细胞核移植、早期胚胎培育、胚胎移植、动物细胞培育;( 5)试管动物:体外受精、早期胚胎培育、胚胎移植;(6)制备单克隆抗体:动物细胞融合
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