谷氨酸转运体在高热惊厥大鼠脑内表达和意义

1、谷氨酸转运体在高热惊厥大鼠脑内表达和意义【摘要】目的探讨大鼠反复高热惊厥后脑内谷氨 酸及谷氨酸转运体的表达情况，进行定性及定量分析。方法 热水浴法建立fs模型。15日龄雄性wistar大鼠60只，随 机分为正常对照组（n=10）和高热处理组（ri=50）,其中高 热处理组按大鼠是否有惊厥又分为高热未惊厥组和高热惊 厥组。免疫组织化学法检测谷氨酸及谷氨酸转运体在大鼠脑 组织各区的表达。结果惊厥对照组大鼠皮层及海马ca3 区glu的表达较正常对照组明显增加。惊厥对照组大鼠皮 层及海马ca3区glt-1的表达均低于正常对照组。讨论高 热惊厥时脑细胞谷氨酸表达上升，而脑细胞膜和细胞间质中 的谷氨酸转运

2、体glt-1表达下降。【关键词】高热惊厥；谷氨酸；谷氨酸转运体高热惊厥（febrile convulsion, fc）是一种特殊类型 的癫痫综合征，是小儿时期最常见的惊厥性疾病，但反复发 作或长时间发作的fc可造成脑损伤，目前对本病的研究仍 集中于对其行为及脑电图变化的观察，而对其神经病理改变 的研究较少。本研究用热水浴惊厥模型诱导生后15dwester 大鼠发生热性惊厥，利用免疫组织化学方法对正常对照组、 高热及高热惊厥组大鼠脑内谷氨酸及谷氨酸转运体的表达 情况进行定性及定量分析，为热性惊厥时的神经病理学研究 提供新思路1材料与方法1. 1实验动物与分组15日龄雄性wistar大鼠60只，

3、体重30-45g,（购自内蒙古大学实验动物中心）。自由喂养 id后进行实验。将大鼠称重后编号，随机分为正常对照组 （37. 0°c水浴，n=10）和高热处理组（45.2°c水浴，n=50）, 其中高热处理组按大鼠是否有惊厥又分为高热未惊厥组和 高热惊厥组。从正常对照、高热未惊厥和高热惊厥组中，分 别随机取10只用于进行脑组织免疫组织化学染色观察。1. 2化学试剂 本实验中所采用的化学试剂及免疫组化 试剂盒分别购自北京化学试剂公司及福州迈新生物科技公 司。1.3热性惊厥动物模型的建立参照文献报道1建立 热性惊厥动物模型，高热惊厥组热水浴：水浴箱温度设定为 45.21。从大鼠生

4、后15d开始，隔日诱导惊厥1次，共10 次。正常对照组水浴温度为37°c,处置方法同高热惊厥组。 记录大鼠的惊厥潜伏期、惊厥时体温、惊厥持续时间及惊厥 级别评2（惊厥分级：0级0分：无惊厥；1级1分：面部 抽动；2级2分：点头；3级3分：前肢阵挛抽搐；4级4分: 全身强直；5级5分：全身强直阵挛）。1.4脑组织谷氨酸和谷氨酸转运体表达检测1. 4. 1脑标本取材和切片制备并进行免疫组化染色各 组在fc组末次惊厥24h予100g/l水合氯醛（3. 5ml/kg）腹 腔注射麻醉后，4%多聚甲醛pb左心室灌注固定，取脑，后 固定6-8ho脑标本入30%蔗糖磷酸缓冲液（ph=7.4）过夜自 头端向尾端连续冻切脑片，厚30um切片，连续取片，三张 为一套，分别进行尼氏染色组织定位和glu及glt-1免疫组 化染色。1.4.2图像结果处理每张切片分别在海马ca3区、颖 叶皮层（ctl）随机观察5个不连续视野（x400）,使用olympus 自动图像采集系统进行图像采集，脑片呈现棕黄色区域为阳 性反应，用ipp软件分析系统进行计数和平均光密度分析， 取其0d值。1.5统