现代生物工程技术（吉林大学）现代生物工程技术课程补充

1、疫苗检验方法与设定标准检验目的检验项目安全性腰别试验、火活效果验 汕、山件逆转试验、特 异性褂性检测产品如减朮活疫苗的神经滋力， 活疫苗中的死病事颗粒，灭 活疫苗抗原降解/聚合片常毒性、无菌检査、 纯度、细繭内应索、钱 留物（裂解剂、灭活剂、 宿主蛋a细胞dna, bsa、抗生索等）工艺外部污染、灭活剂/裂解剂、 抗生索、防腐剂、稳定剂冇效性效力试验/稳定性（抗原含址、病徘滴度、 活菌数）»制品的确认（鉴别试纽重级蛋j呦构筲）含的测定（效力试繼、橋滩滴 度、活抗脈蛍等）一致性外观、装昴、ph、渗 透压检测结果的分析：适宜的指标上k 限値，全过程控制1 起始丿京材料： 咋种，细胞, 佐

2、剂，其它 添加物质2. 生产过程：收获，纯化/ 捉取，裂解 等重變工艺 过程3. 关徒节点：原液制备、 半成品配制、 成品检定的意义在于保证制品的安全性、有效性和-致性，验证全过程的质童可控3疫苗的类型与效力试验考虑要点：减毒活疫苗：opv、mmr、je、vzv等 计算活病毒数量（cfu, pfu, ccid50）,其效力可以预期 临床使用效果明确灭活病毒疫苗（包括裂解、纯化）狂犬疫苗、流感疫苗体内 方法：（保护性抗原不明确：如狂犬病疫苗糖蛋白/核蛋白）体 外方法：（保护性抗原明确：如流感疫苗h/n蛋白）蛋白或多糖疫苗（提取、重组类）：hbv、hpv、流脑多糖 抗 原含量检测：直接/相对值抗原

3、性/免疫原性：定性明确，结 构稳定体内试验（或市体内向体外方法过渡）减毒活疫苗效力试验：减毒活疫苗有效性以计算活病毒数量确定 常用方法：（cfu, pfu, ccid50）减毒活疫苗的效力（临床有效 性）是可以预期的细菌性活疫苗：活菌数cfu总菌数计数，再以平皿涂布计数 菌落确定菌落可进一步定性。病毒性减毒活疫苗：活病毒计数ccid50 pfu ld50 1 通过活体细胞或动物间接反应病毒数量2、细胞、动物、培养或饲养 体系影响因素多3、应考虑疫苗中的死病毒占比，特别是灭活 疫苗 呈现免疫增强现象的疾病。灭活疫苗效力试验在制品的研发阶段一采用体内和体外两种方法:建立体内和体外方法的相关性确认体

4、外方法监测疫苗稳定性的适用性建立疫苗抗原性和稳定性的数据建立体内和体外方法的相关性上市后的效力试验 1、常规放行检测f釆用体外方法 2、常规稳定性监测：若可行（前期验证）采用体外方法经常进行体内方法试验，以保持实验人员技术熟练验证工艺的重大变更一采用体内和体外两种方法体内效力试验一建立的原则适宜的动物模型：动物基因型、体液/细胞免疫偏离、与人 体疾病及免疫效果的适应性、ld50/ed50等；选择合适的免疫程序：优选单剂次免疫，多剂次免疫应有 足够的理由；疫苗的剂量：免疫应答应当落在剂量/效应范围内；剂量/效应曲线：应当通过多次试验确认；证明检测方法的敏感性：应能够灵敏发现制品的降解及效力 下降的信号疫苗效价标准如何设定体内和体外效力试验方法的比较体内体外法的意义比较模式图与临床效果 的相关性体内攻击 模型法体内效力试验的局限性不同动物种属（品系）免疫应答不同：釆用攻击模型难以达 到预期保护效果；使用的动物模型难以模拟人体的免疫或病理反应。商业化疫苗的质量保证： gmp：经过验证的生产工艺