岛津LC-20AT液相色谱操作步骤

1、.岛津LC-20AT高效液相色谱操作步骤1、流动相的处理u 共有5个流动相储液瓶。一般RP-HPLC中，A（无机相）、B（有机相）为分析流动相；C（水）、D（甲醇）用于柱子后处理清洗；50%甲醇-水用于清洗自动进样针u 流动相体积VA、B=100+总流速×比例系数×分析时间（mL）；Vc300mL； VD350mL；V50%甲醇300mLu 所有流动相须用0.22um孔径滤膜过滤（根据有机相和无机相选用相应滤膜），清洗储液瓶，不能在清洗过程中留下污迹，并超声30min，超声完成后禁止剧烈摇晃2、开机u 开启插座电源 电脑开机u 打开仪器电源（LC20AT最后打开，等待数秒后

2、“control”指示灯亮）u 打开软件（Labsolution 仪器 LC20A），若连接正常则软件显示 LC就绪3、自动排气u 将各流动相过滤头缓慢放入流动相中u 在简单设置界面设置总流速为0.2mL/min；在自动排气界面设置自动排气参数（、各流动相5min，自动进样器25min），不勾选“排气结束后运行控制器”u “下载” “执行自动排气”u 等待排气结束4、样品处理u 稀释后的样品（浓度约1mg/mL，不宜过高）用注射器经0.22um过滤器注入样品瓶u 样品应2/3样品瓶体积（1.5mL样品瓶）u 按序号依次将样品瓶放入自动进样器的样品架上u 切记：将样品架推到底！ 5、系统平衡及设

3、置分析条件u 自动排气完成后，设置柱温、检测波长等参数 (建议柱温高于环境10)，用梯度洗脱初始流动相平衡柱子（流动相比例与梯度洗脱初始比例一致）u “下载” “激活/取消激活仪器”，此时系统显示：等待柱温稳定u 缓慢增加总流速至样品分析所需流速，Vmax=1ml/min（每隔1分钟增大0.2mL/min，注意每次增大都点击“下载”）u 在时间程序界面设置梯度洗脱条件u 若要保存方法文件：文件 方法文件另存u 等待基线平稳（留意泵压力是否稳定），待系统显示：LC就绪，右击，进行基线测试斜率（一般3000即可）u 开始测样6.“单次分析开始”或“批处理”6.1单次分析开始u 依次输入样品名（样品

4、ID可有可无）、样品瓶、瓶架（1）、进样体积等u 注意数据文件所在文件夹，输入数据文件名 打开u 确定6.2批处理u “向导”u “新建”， 样品组号（1），选择“未知样品”，依次输入文件名及其他u 注意批处理文件所在文件夹，勾选“数据文件名自动递增”、 不勾选“自动创建文件名”u 完成 u 选中全部序列u 开始批处理7.柱子后处理：先用易溶解样品的流动相清洗（一般用高比例有机相洗15min），10%甲醇洗30min，再用90%甲醇洗30min；长期不使用保存于纯甲醇中方法一：u 在简单设置界面设置：流动相C-90%；流动相D-10% 下载u 切换柱温箱offu 30min后设置：流动相C-1

5、0%；流动相D-90% 下载 方法二（推荐）：u 设置洗柱程序u “下载”u “单次分析开始” 样品瓶输入“-1”文件名“洗柱”u 系统提示“禁用采集” 确定8.数据处理（打开Labsolution 再解析）8.1标准曲线u 数据处理 打开文件 “向导” u 勾选特征峰、外标法u 依次输入最大级别数（标曲的点数）、单位、化合物名、浓度等 完成u 应用到方法 方法另存为 u 主项目 批处理 打开批处理文件u 填写表格：首行（标准、初始化标准点），（标准样数与前面的最大级别数相对应，剩下的为未知）、（文件方法为先前保存的方法，向下填充）、（标准样品级别号分别1.2.3.4.5未知样品0） u 批处理再解析开始 批处理文件另存u 主项目 校准曲线（可找到已做成的标曲）8.2生成报告u 打开要生成报告的数据文件u 视图 手动积分栏，处理数据文件u 生成报告u 右击“属性”进行调整，预览、打印8.3检测限、定量限的确定、扣除背景（略）9.实验结束后，“切换泵ON/OFF ”确认泵泵压力降为零关软件 再关仪器10.电脑关机 关闭插座电源。Ø