促进消化功能评价方法(征求意见稿)及修订说明

1、附件9：国家食品药品监督管理局许可司： 根据2012年8月1日保健食品检验与评价技术规范修订研讨会议专家提出的意见，我们对“有助于促进消化功能检验方法”进行了再次修改，形成第二稿。现提交“有助于促进消化功能检验方法（征求意见稿）”（附件一）“保健食品评价试验项目、试验原则及结果判定”（附件二）；“人体试食原始记录格式、动物试验原始记录格式”（附件三）；“编制说明”（附件四）；“专家意见汇总表”（附件五）。北京市疾病预防控制中心2012年8月29日促进消化功能评价方法（征求意见稿）保健食品评价保健食品评价试验项目、试验原则及结果试验项目、试验原则及结果判定判定Items, Principles

2、and Result Assessment1 试验项目1.1 动物实验1.1.1 体重、体重增重、摄食量和食物利用率1.1.2 小肠运动实验1.1.3 消化酶测定1.2 人体试食试验1. 2.1 临床症状观察1. 2.2 胃/肠运动实验 2 试验原则2.1 动物实验和人体试食试验所列指标均为必做项目。2.2 在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。3 结果判定3.1 动物实验：动物体重、体重增重、摄食量、食物利用率，小肠运动实验和消化酶测定三方面中任二方面实验结果阳性，可判定该受试样品有助于促进消化功能动物实验结果阳性。3.2 人体试食试验：临床症状积分结果和胃/肠运动实

3、验结果阳性，可判定该受试样品有助于促进消化功能人体试食试验结果阳性。3.3动物实验和人体试食试验均为阳性结果，可判断受试样品具有有助于促进消化功能的作用。21促进消化功能检验方法Method for the Assessment of Facilitating Digestion Function1 动物实验1.1 实验原理胃肠道是营养物质的摄取、消化与吸收的器官，对食物的消化作用主要是依靠其运动、消化酶的分泌来完成的。如果某一保健食品能对这一环节或几环节有调节作用，那它就有可能有促进消化功能的作用。1.2 实验项目促进消化功能动物实验包括大鼠体重、体重增重、摄食量和食物利用率实验；小肠运动实

4、验；消化酶的测定等三部分。1.3 实验动物根据实验项目可选用单一性别成年小鼠或大鼠。小鼠18g22g，每组10只15只，大鼠120g150g，每组8只12只。1.4 剂量分组及受试样品给予时间实验设三个剂量组和一个阴性对照组，以人体推荐量的10倍（小鼠）或5倍（大鼠）为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组和模型对照组。受试样品给予时间30d（小肠运动实验受试样品给予时间7d15d），必要时可延长至45d。1.5 实验内容1.5.1 体重、体重增重、摄食量和食物利用率选用同一性别的大鼠。实验开始时动物体重的差异应不超过平均体重的10。分不同剂量实验组和阴性对照组，经口给予受试样品

5、，每周测2次体重和食物摄入量。实验结束时计算体重、体重增重、摄食量和食物利用率。1.5.2 小肠运动实验选用同一性别的小鼠，分不同剂量实验组、空白对照组和模型对照组，模型对照组用复方地芬诺酯或洛哌丁胺造模。可用墨汁或炭末加阿拉伯树胶作为指示剂。经口给予受试样品。实验结束前禁食不禁水20h，于测定当天各实验组和空白及模型对照组再给予一次受试样品或蒸馏水，30min后各实验组和模型对照组给予复方地芬诺酯5mg/kgbw 6mg/kgbw或洛哌丁胺5mg/kgbw 6mg/kgbw(依据复方地芬诺酯或洛哌丁胺的实用剂量取用，用研钵研碎呈粉末后按实验所需浓度配制，注意要待溶质完全溶解、充分摇匀后使用。

6、)，空白对照组给予蒸馏水，30min后各组再给予指示剂(精确称取阿拉伯树胶100g，加水800ml，煮沸至溶液透明，称取活性碳粉100g加至上述溶液中煮沸三次，待溶液凉后定容到1000ml，于冰箱中4保存，用前摇匀)，25min后断颈处死动物，计算墨汁推进率。按下式计算墨汁推进率：墨汁推进率（%） 墨汁推进长度（cm）/ 小肠总长度（cm） ×100%。 1.5.3 消化酶的测定选用同一性别的大鼠。分不同剂量实验组和阴性对照组，实验开始时动物体重的差异应不超过平均体重的10。经口给予受试样品。实验结束前各组动物禁食不禁水24h，采用乙醚麻醉大鼠幽门结扎法收集一定时间内排出的胃液，测定

7、单位时间内胃液量。取胃液1mL放入50mL的三角烧瓶中，加入0.05mol/L盐酸溶液15mL摇匀，放入新鲜制作的蛋白管两根。塞好瓶口，在37恒温箱中孵育24h，取出蛋白管，用尺测量蛋白管两端透明部分的长度（mm），以四端之值求其平均值。计算胃蛋白酶活性和胃蛋白酶排出量。胃蛋白酶活性单位（/mL）四端蛋白管透明部分长度均值2×16胃蛋白酶排出量（/h）胃蛋白酶活性×每h胃液量1.6 数据处理和结果判定 计量资料可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值F0.05，P0.05，用多个实验

8、组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。食物利用率和墨汁推进率资料需进行数据转换，XSin-1，式中P为食物利用率和墨汁推进率，用小数表示，然后再进行方差分析。1.6.1 体重、体重增重、摄食量和食物利用率实验组与阴性对照组比较，体重、体重增重、摄食量三项指标中任一指标增加，经统计处理差异有显著性，且食物利用率与阴性对照组比较不明显降低，可判定该实验结果阳性。1.6.2 小肠运动实验在模型成立的前提下，实验组与模型对照组比较，墨汁推进率

9、增加，经统计处理差异有显著性，可判定该实验结果阳性。1.6.3 消化酶的测定实验组与阴性对照组比较，胃液量、胃蛋白酶活性，胃蛋白酶排出量三项指标中任一指标增加，经统计处理差异有显著性，可判定该实验结果阳性。结果判定动物体重、体重增重、摄食量、食物利用率，小肠运动实验和消化酶测定三方面中任二方面实验结果阳性，可判定该受试样品有助于促进消化功能动物实验结果阳性。动物体重、体重增重、摄食量、食物利用率，小肠运动实验和消化酶测定三方面中任二方面实验结果阳性，可判定该受试样品动物实验结果阳性。 2. 人体试食试验2.1受试者纳入标准选择功能性消化不良，伴有长期胃肠不适，主诉食欲不振，早饱、气多，胃肠胀满

10、，呕吐，不明原因慢性腹泻或大便秘结等18至65岁的自愿受试者。2.2 受试者排除标准：2.2.1 急性腹泻者。2.2.2 严重器质性病变引起的消化不良者。2.2.3 体质虚弱无法接受试验者。2.2.4 合并有心血管、肝、肾和造血系统等严重全身性疾病患者。2.2.5 短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断者。2.2.6 未按要求服用受试样品，无法判断试食结果者。2.3 试验设计及分组要求采用自身和组间两种对照设计。按受试者的消化症状轻重随机分为试食组和对照组，尽可能考虑影响结果的主要因素如年龄、性别、病程等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性。每组受试者有效例数不少于50例。2.4

11、受试样品的剂量和使用方法试食组按推荐服用方法、服用量服用受试产品，对照组用安慰剂或空白对照，也可用具有同样作用的阳性物。受试样品给予时间30d，必要时可延长至45d。试验期间不改变原来的饮食习惯，正常饮食。2.5 观察指标2.5.1 安全性指标2.5.1.1 一般状况 包括精神、睡眠、饮食、大小便、血压等2.5.1.2 血、尿便常规检查2.5.1.3 肝、肾功能检查 2.5.1.4 胸透、心电图、腹部B超检查（在试验开始前检查一次）2.5.2 功效性指标：2.5.2.1 临床症状观察：准确记录受试者试验前后的临床症状，按下表给予量化评分，比较试验前后症状积分的变化。2.5.2.2 胃肠运动试验

12、：所有受试者在试验前、试验结束时均进行胃肠运动检查，推荐用钡条透视法（在进食的条件下检查）。2.6 数据处理和结果判定试验数据为计量资料，可用t检验进行分析。凡自身对照资料可以采用配对t检验，两组均数比较采用成组t检验，后者需进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态方差齐后，用转换的数据进行t检验；若转换数据仍不能满足正态方差齐要求，改用t检验或秩和检验；但变异系数太大（如CV>50）的资料应用秩和检验。表 临床症状积分症状 轻（1分）中（2分）重（3分）食欲食欲较差食欲差食欲很差腹痛持续时间短，不需服药经常发作，引发两胁不适频繁发作，引发两胁疼痛腹胀

13、腹胀有时发作腹胀较频繁，在较长时间内不缓解腹胀频繁嗳气 泛酸 烧心间有发作，偶有嗳气、泛酸、烧心饮食不适即泛酸、烧心引起两胁不适较频繁发作，泛酸、烧心可有两胁疼痛失眠 疲乏偶有发作饮食不适即发作较频繁发作2.6.1 临床症状结果判定2.6.1.1试食前后试食组自身比较及试食后试食组与空白对照组组间比较， 临床症状积分明显减少，经统计处理差异有显著性，可判定该指标阳性。（适用于选用空白对照组）2.6.1.2试食前后试食组自身比较临床症状积分明显减少，经统计处理差异有显著性，且试食后试食组与阳性对照组组间比较，临床症状积分无明显增加，可判定该指标阳性。（适用于选用阳性对照组） 2.6.2 胃肠运动

14、试验结果判定试食前后试食组自身比较及试食后试食组与对照组组间比较，胃肠运动试验指标明显改善，且钡条排出率大于等于30%为有效，经统计处理差异有显著性，可判断该指标阳性。2.6.3人体试食试验结果判定x. 临床症状积分结果和胃/肠运动实验结果阳性，可判定该受试样品有助于促进消化功能人体试食试验结果阳性。临床症状积分结果和胃肠运动实验结果均为阳性，可判定该受试样品人体试食试验结果阳性。附件：人体试食原始记录格式、动物试验原始记录人体试食原始记录格式、动物试验原始记录格式格式有助于促进消化功能保健食品人体试食观察表产品名称_ 编号_姓名_ 性别_ 年龄_ 职业_ 民族_住址或电话_既往史_家族史_胃

15、镜检查结果：_诱因： 情志不畅 饮食不节 劳累 受寒吸烟史： 年 支/日 饮酒史： 年 两/日发病时间_ 病程_年工作性质: 脑力 轻体力 重体力症状变化观察项目 试 食 前 年 月 日 试 食 中年 月 日试 食 后年 月 日食欲不振早饱餐后饱胀不适上腹痛反酸 烧心嗳气恶心便秘 便溏 小 结注：症状 重度3分；中度2分；轻度1分；无症状0分体格检查 项 目试食前试食后项 目试食前 试食后发育营养状况脊柱四肢五官及颈部胸部：心，肺腹部检查：压痛 （肝脾）心率（次/分）血压（mmHg）精 神小 便临床检测项 目结 果项 目结 果项 目结 果EKGB超胸 透化验检查 项 目试食前试食后项 目试食前

16、试食后HGB g/LCREumol/LRBC*1012/LBUNmmol/LWBC*109/LTC mmol/LALT u/LTG mmol/LAST u/LTP G/LGLUmmol/LALB G/L胃动力检查项 目试 食 前试 食 后胃肠运动试验钡条试验报告：试食前_试食后_诊 断： 疗效判断： 有效 无效并发症： 不良反应：观 察 者： 年 月 日 有助于促进消化功能保健食品动物试验原始记录格式1剂量设计：推荐量 /人·日( /kgBW)样品前处理及配制： 1.1 墨汁配制：准确称取阿拉伯树胶100g，加去离子水800ml,煮沸至溶液透明，称取活性炭50g加入上述溶液混匀，煮沸

17、3次，冷却至室温加去离子水定容至1000ml。于4冰箱中存放，用前摇匀。1.2 0.5mg/ml复方地芬诺酯悬液配制：取复方地芬诺片20片(2.5mg/片)，用乳钵研磨后，加去离子水至100ml，临用前配制。1.3 0.05mol/L盐酸：取12N浓盐酸1.25ml加去离子水至300ml。2 操作步骤:2.1 小肠运动实验： 动物检疫 年 月 日- 年 月 日，未见异常，可用于试验。于 年 月 日选健康小鼠 只，雌性，随机分为5组，每组 只。分别按推荐日摄入量( /kgBW)即 、 、 10、 倍即 、 、 /kgBW为三个剂量组。以 为溶剂，按 ml/10gBW经口灌胃。阴性对照组按 ml/

18、10gBW经口灌胃给予溶剂。模型对照组按 ml/10gBW经口灌胃给予溶剂。各组每天灌胃一次，连续 天。于 月 日，隔夜禁食16h，不限水。于 月 日进行检测小肠运动实验。小肠运动实验以复方地芬诺酯（5mg/kgBW）按10mL/kgBW对剂量组及模型对照组动物经口灌胃。阴性对照组给予等量去离子水经口灌胃。30min后，各剂量组动物按10mL/kgBW经口给予以含不同剂量受试物的墨汁，对照组动物给予墨汁，按10mL/kgBW经口灌胃。25min后处死，剖腹测量小肠全长及墨汁前沿与幽门的距离，按下式计算墨汁推进率。2.2测定：体重、体重增长、摄食量、食物利用率：动物检疫 年 月 日- 年 月 日

19、，未见异常，可用于试验。 月 日选健康 雄性 种大鼠 只，按体重随机分为 组，每组 只。动物单笼饲养。 分别按推荐日摄入量( /kgBW) 、5、 倍，即 /kgBW为三个剂量组。以 为溶剂，按 ml/100gBW经口灌胃。阴性对照组按 ml/100gBW经口灌胃给予溶剂。各组每天灌胃一次，连续 d。每w称体重 次,记录进食量。于 月 日，隔夜禁食24h，不限水。于 月 日各组动物测定胃液量和消化酶。2.3消化酶的测定：受试动物逐只用戊巴比妥钠(50mg/kgBW)麻醉，固定于解剖台，无菌条件下，于腹腔做一小切口，小心找到胃幽门结扎，常规缝合。动物继续禁食，不禁水。 h后，打开腹腔，结扎喷门，

20、取出全胃，用试管取出全部胃液，计算单位时间内胃液分泌量，取胃液1 ml放入带盖平皿中，加入0.05mol/L盐酸溶液15ml，摇匀，放入新鲜制作蛋白管2支，封盖，置37温箱孵育24h，取出蛋白管，测量透明部分长度(mm)，求四端均值。测定胃蛋白酶活性。蛋白管制作方法：采用麦特(Mett)的毛细管法，将内径1-2mm粗细均匀的毛细血管截成10cm ,洗净烤干。取适量蛋清充分打匀后，用纱布过滤，将上述毛细血管利用虹吸作用，灌满蛋清(管内应无气泡混入)。放置于85热蒸汽使蛋白凝固。待冷却后，取出石蜡将蛋白管两端封固，贮冰箱中备用。单位时间胃液量计算：单位时间胃液量(ml/h)=胃液总量/ h消化酶计

21、算：胃蛋白酶活性单位(m/ml)=四端蛋白管透明带长度均值2*16胃蛋白酶排出量(m/h)=胃蛋白酶活性*单位时间胃液量2.4统计：数据采用SPSS 11.0 for windows 软件进行方差分析。小肠运动实验测定数据经 转换，并经方差齐性检验再进行方差分析。若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。食物利用率及胃蛋白酶测定试验动物一般情况原始记录日期温度()()湿度(RH%)RH)中毒体征、死亡情况（以下空白）检测者： 复核者： 年 月 日 年 月 日食物利用率组别总增重总耗食量第四端 总利用率总利用率转换后胃蛋白酶组别第一端()第二端第三端第四端胃Pr酶活性4h胃液

22、量1h胃液量胃Pr酶排出量（以下空白）检测者： 复核者： 年 月 日 年 月 日胃液和胃蛋白酶含量测定记录 编号对照组低剂量组中剂量组高剂量组h胃液(ml)蛋白消化(mm)h胃液(ml)蛋白消化(mm)h胃液(ml)蛋白消化(mm)h胃液(ml)蛋白消化(mm)第1端第2端第3端第4端第1端第2端第3端第4端第1端第2端第3端第4端第1端第2端第3端第4端12345678910（以下空白）检测者： 复核者： 年 月 日 年 月 日 墨汁推进率记录 单位：cm编号 阴性对照组 植物油组 低剂量组 中剂量组 高剂量组 模型对照组 墨汁推进 小肠总长 墨汁推进 小肠总长 墨汁推进 小肠总长 墨汁推进

23、 小肠总长 墨汁推进 小肠总长 墨汁推进 小肠总长1 2345678910 （以下空白）检测者： 复核者： 年 月 日 年 月 日 体重增长记录 单位：g编号 初始重 第一周 第二周 第三周 1 2345678910（以下空白）检测者： 复核者： 年 月 日 年 月 日 促进消化功能评价方法修订说明一、承担单位北京市疾病预防控制中心为本项目的牵头单位。本单位是国家标准“食品安全性毒理学评价程序和方法”GB15193.X-2003修订版、化妆品卫生规范-2007年版等多项国家标准和技术规范的起草单位之一，是保健食品功能检验单位，在保健食品功能学方法应用、国家标准、规范的起草和方法的验证方面积累了

24、较丰富的经验。因此在保健食品功能检验方法的制定中有很好的基础和经验。二、主要工作过程本项目于2009年11月启动。由北京市疾病预防控制中心卫生毒理所牵头成立项目协作组，中国中医科学院西苑医院、卫生部北京医院和天津市疾病预防控制中心三家为本项目的协作单位。2010年1月到3月进行了广泛的意见征询及文献调研工作，于2010年3月召开了“关于促消化人体试食修订工作方案研讨”课题协作组第一次工作会议，对“有助于促消化人体试食检验方法修订”原则和具体指标作了充分的讨论，制定了工作计划和修订方案，协作单位进行了明确分工，形成了“有助于促消化功能检验方法”人体试食试验方案初稿。会后又分别征求了相关专家意见，

25、对初稿再次进行了修改。2010年5月召开了第二次研讨会，确定了试食样品，细化试验方案，对试食人群的筛选、提高试食人群依从性等具体质量控制方案进行了讨论，形成了“有助于促消化功能检验方法”人体试食试验方案和统一的原始记录表格。中国中医科学院西苑医院、卫生部北京医院和天津市疾病预防控制中心三家协作单位按照统一要求于2010年5月2011年6月进行“有助于促消化功能检验方法”人体试食试验方法验证，并进行数据统计，最终形成了有助于促消化功能检验方法（征求意见稿）。三、编制原则1合法性原则：修订工作符合国家相关法律法规并遵循相关管理部门的政策要求。2. 科学性原则：修订工作遵循科学性的原则，广泛征求相关

26、领域专家的意见并进行文献调研，各项技术指标应具有科学依据并经科学验证。3. 先进性原则：注意国内管理部门发布的新管理措施，兼顾了技术发展的前瞻性。4. 实用性原则：从保护公众身体健康的角度出发，充分考虑国情，兼顾我国保健食品功能检测机构的水平，对内容进行客观量化和具体明确化，尽量提高可操作性。5协调性原则：尽可能与本规范的其他部分一致，注意合理性与有效性、通俗性和规范性之间的关系。四、确定相关技术内容及新旧规范的对比本部分的主要内容涉及有助于促消化功能检验人体试食试验的基本原则、方法和要求，适用于检测保健食品的有助于促消化功能检验。新规范的本部分内容包括受试者纳入标准、受试者排除标准、试验设计

27、及分组要求、受试物的剂量和使用方法、观察指标、功效判定标准、数据处理和统计分析、结果判定。与原检验方法比较，在受试者纳入标准、受试者排除标准、观察指标及结果判定四方面进行了修改。对试食试验原始记录及报告所需要的基本信息也作了要求。与原检验方法相比，试验内容更详尽，更具有可操作性，语言编写及描述更科学。具体修改部分见下表。序号原方法现方法修订理由序号内容序号内容1名称“促进消化功能”有助于促进消化功能更科学21.3实验动物 小鼠1822克，每组1015只，大鼠120150克，每组812只。1.3实验动物 小鼠18g22g，每组10只15只，大鼠120g150g，每组8只12只。更科学31.4剂量

28、分组及受试样品给予时间 受试样品给予时间30天（小肠运动实验受试样品给予时间1530天），必要时可延长至45天。1.4剂量分组及受试样品给予时间 受试样品给予时间30d（小肠运动实验受试样品给予时间7d15d），必要时可延长至45d。更科学，与“通便功能”一致41.5.2“小时”、“分钟”1.5.2改为“h”、“min”更科学51.5.3“小时”1.5.3改为“h”更科学61.5.2 小肠运动实验原方法：1.5.2 小肠运动实验选用同一性别的小鼠，分不同剂量实验组、空白对照组和模型对照组，模型对照组用复方地芬诺酯造模。可用墨汁或炭末加阿拉伯树胶作为指示剂。经口给予受试样品。实验结束前禁食不禁水

29、16小时，于测定当天各实验组和空白及模型对照组再给予一次受试样品或蒸馏水，30分钟后各实验组和模型对照组给予复方地芬诺酯（0.0250.05），空白对照组给予蒸馏水，30分钟后各组再给予指示剂，25分钟后断颈处死动物，计算墨汁推进率。按下式计算墨汁推进率： 墨汁推进长度（cm） 墨汁推进率×100%小肠总长度（cm） 1.5.2 小肠运动实验 与“通便功能”做一致修改。改为1.5.2 小肠运动实验选用同一性别的小鼠，分不同剂量实验组、空白对照组和模型对照组，模型对照组用复方地芬诺酯或洛哌丁胺造模。可用墨汁或炭末加阿拉伯树胶作为指示剂。经口给予受试样品。实验结束前禁食不禁水20h，于测

30、定当天各实验组和空白及模型对照组再给予一次受试样品或蒸馏水，30min后各实验组和模型对照组给予复方地芬诺酯5mg/kgbw 6mg/kgbw或洛哌丁胺5mg/kgbw 6mg/kgbw(依据复方地芬诺酯或洛哌丁胺的实用剂量取用，用研钵研碎呈粉末后按实验所需浓度配制，注意要待溶质完全溶解、充分摇匀后使用。)，空白对照组给予蒸馏水，30min后各组再给予指示剂(精确称取阿拉伯树胶100g，加水800ml，煮沸至溶液透明，称取活性碳粉100g加至上述溶液中煮沸三次，待溶液凉后定容到1000ml，于冰箱中4保存，用前摇匀)，25min后断颈处死动物，计算墨汁推进率。按下式计算墨汁推进率：墨汁推进率（

31、%） 墨汁推进长度（cm）/ 小肠总长度（cm） ×100%。与“通便功能”一致，更合理72人体试食试验 根据不同受试样品适应人群的区别，促进消化功能人体试食试验建立两套试食试验方案，即针对适应人群主要为儿童的儿童方案和适应人群主要为成人的成人方案。删除本段描述新方法仅保留成人方案822.1 儿童方案取消。保护儿童、青少年等脆弱人群92.2.1受试者纳入标准 选择功能性消化不良，伴有长期胃肠不适，主诉食欲不振，早饱、气多，胃肠胀满，呕吐，不明原因慢性腹泻或大便秘结等自愿受试者。2.1受试者纳入标准 增加年龄范围。改为“选择功能性消化不良，伴有长期胃肠不适，主诉食欲不振，早饱、气多，胃肠胀满，等18至65岁的自愿受试者。”保护儿童、