手机上细菌的分离与鉴定

1、手机上细菌的分离与鉴定单位：燕山大学建筑与环境化学工程系09级生物制药2班秦皇岛市河北大街438号，邮编：066004摘要： 随着信息技术的发展，手机交流已成为人们沟通的主要方式，但手机与我们的皮肤接触频繁，如果手机上存在细菌，这就成为一种病原体传播的途径，对人们的皮肤等健康问题构成不同程度的伤害。为了证明手机上存在有对我们使用者健康有危害的细菌，经由细菌提取、培养、观察、分离、纯化、计数、鉴定（糖发酵试验、硫化氢实验、大分子水解实验和IMViC实验）以及保存等一系列步骤，从手机表面分离得到两种细菌并对其进行了鉴定分析，得出了结论：手机上确实存在大量的细菌，它们对人类的健康构成了一定的危害，所

2、以我们应该特别注重平时的卫生习惯，如勤洗手。Abstract：With the development of information technology, mobile communication has become the main way people communicate, but handset frequent skin contact with us, if the phone is there bacteria, which become a kind of pathogen transmission, such as on people's skin and po

3、se health problems varying degrees of damage. In order to prove the existence of mobile phone users of our health hazards of bacteria by bacterial extraction, training, observation, the separation, purification, counting, appraisal ( sugar fermentation tests ，hydrogen sulphide experiment, macromolec

4、ules,and IMViC experiment) and the preservation of and a series of steps, from cell phones and two types of bacteria isolated from the surface was carried out identification , a conclusion: the existence of the phone number of bacteria, they constitute a certain human health hazards, we should pay s

5、pecial attention usual health habits, such as washing hands frequently.关键词：手机；健康；病原体传播；细菌提取；鉴定分析Keywords：cellphone；health； bacterial extrac；pathogen transmission； identification and analysis1.引言 现在手机已成为我们生活中不可缺少的一部分，但是人们却忽略了它们给我们带来的危害。我们的手机表面有大量的细菌，我们很少去关注，且很少对其进行一定的清洁工作。手机表面上存在大量的细菌，通过与手的接触，加上不良好的卫

6、生习惯，很可能导致病从口入。专家还指出，蠕动的致命细菌接触到面部等部位，可能引致暗疮、肺炎、脑膜炎，甚至超级病毒金黄色葡萄球菌。我们此次试验的目的就是通过对手机表面细菌的研究，确定其所含菌的数量和种属，确定它们的存在及危害，从而引起人们的关注。建议人们对手机进行定期的卫生工作，如使用手机时可用除菌纸巾定期擦拭，定期消毒，以减少我们受手机感染的机会，勤洗手是最基本的卫生习惯。 2.材料方法2.1.材料：2.1.1 实验器材：手机2.1.2 实验仪器：普通光学显微镜、接种环、酒精灯、培养皿、载玻片、镊子、烧杯、试管、移液管、德汉氏小管、恒温培养箱、目镜测微尺、镜台测微尺等2.1.3 培养基种类牛肉

7、膏蛋白胨培养基（牛肉膏，蛋白胨，氯化钠，琼脂，蒸馏水）油脂培养基（蛋白胨，牛肉膏，氯化钠，香油，1.6%中性红水溶液，琼脂，蒸馏水）淀粉培养基（蛋白胨，氯化钠，牛肉膏，可溶性淀粉，蒸馏水，琼脂）蛋白胨水培养基（蛋白胨，氯化钠，蒸馏水）明胶培养基（牛肉膏蛋白胨液，明胶）糖发酵培养基（蛋白胨水培养基，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，20%糖溶液（葡萄糖，乳糖，蔗糖）柠檬酸盐培养基（磷酸二氢铵，磷酸氢二钾，氯化钠，硫酸镁，柠檬酸钠，琼脂，蒸馏水，1%溴香草酚蓝乙醇液）醋酸铅培养基（牛肉膏蛋白胨琼脂，硫代硫酸钠，10%醋酸铅水溶液）石蕊牛奶培养基（牛奶粉，石蕊，水）尿素琼脂培养基（尿素，琼脂，氯化钠，磷酸二

8、氢钾，蛋白胨，酚红，蒸馏水）2.2.方法2.2.1.细菌的提取分离 （1）细菌的提取：用蘸有生理盐水的消毒棉签在手机表面一平方厘米的范围内涂抹，然后将该棉签浸入到盛有一毫升生理盐水的试管中，配成原倍数的菌悬液，然后再配成稀释十倍的菌悬液。（2）细菌的培养：用灭菌后的移液管移取菌悬液，将1-2滴滴入培养皿中，用涂布棒将菌分布均匀，每种菌分别做两个平板，放在37恒温培养箱中培养24小时。（3）细菌的计数：取出培养好的平板，观察菌落的多少，记下菌落数的多少（4）细菌的纯化：挑取菌落上的细菌，用三段划线法对其进行纯化。放入37培养箱中培养，直至所得菌落为单个菌落。2.2.2. 细菌的观察 （1）细菌的

9、形态大小观察：无菌操作取菌，制成菌悬液。滴一滴到载玻片上，盖上盖玻片，在显微镜下观察其形态。校正目镜测微尺计算出在不同放大倍数下，目镜测微尺每格所代表的长度，然后观察细菌的大小。 （2）革兰氏染色：制片初染（结晶紫染色12min,倾去染液）媒染（碘液覆盖1min,倾去碘液）脱色（95%乙醇脱色2030s）复染（复红染色2min,水洗）镜检2.2.3.糖发酵试验：（1）用记号笔在各试管外壁上分别标明发酵培养基的名称和所接种的细菌菌名。（2）取葡萄糖发酵培养基试管3支，分别接入两种菌，第三只不接种，作为对照。另取乳糖发酵培养基试管3支，同样接入两种菌，第三只不接种，作为对照。蔗糖发酵同上。（3）将

10、接过种和作为对照的6支试管均置37中培养24-48h。（4）观察各试管颜色变化及德汉式小管中有无气泡。2.2.4.大分子水解实验： 淀粉水解实验（1）将固体淀粉培养基溶化后冷却至50左右，无菌操作制成平板。（2）用记号笔在平板底部划成2部分。（3）将两种菌分别在不同的部分划线接种，在平板的反面分别写上两种菌的标号。（4）将平板倒置在37温箱中培养24h。（5）取出平板，观察菌苔颜色。 石蕊牛奶实验：（1）取两只石蕊牛奶培养基试管，用记号笔标明各管欲接种的菌名。（2）分别接种两种菌。（3）将接种后的试管置35中培养24-48h。（4）观察培养基颜色变化。 .明胶水解实验：（1）取两只明胶培养基试

11、管，用记号笔标明各试管欲接种的菌名。（2）用接种针分别穿刺接种两种菌。（3）将接种后的试管置20中培养2-5d。（4）观察明胶液化情况。 油脂水解实验：（1）将熔化的固体油脂培养基冷却至50左右时，充分摇荡，使油脂均匀分布，无菌操作倒入平板，待凝。（2）用记号笔在平板底部划成两部分，分别在两部分标上军的标号。（3）用无菌操作将两种菌分别划十字线接种于平板的相应部分的中心。（4）将平板倒置，37温箱中培养24h。（5）取出平板，观察菌苔颜色。 尿素试验：（1）取两只尿素培养基斜面试管，用记号笔标明各管欲接种的菌名。（2）分别接种两种菌。（3）将接种后的试管置35中培养24-48h。（4）观察培养

12、基颜色变化。2.2.5.IMViC实验 吲哚试验：将两种菌分别接入2支蛋白胨水培养基中，置37培养48h。于培养48h后的蛋白胨水培养基内加入3-4滴乙醚，摇动数次，静置1min，待乙醚上升后，沿试管壁徐徐加入2滴吲哚试剂。在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反应。 甲基红实验：将两种菌分别接入2支葡萄糖蛋白胨水培养基中，置37培养48h。培养48h后，将1支葡萄糖蛋白胨水培养基培养物内加入甲基红试剂2滴，培养基变为红色者为阳性，变为黄色者为阴性。 伏-普实验：将甲基红实验中的另一支葡萄糖蛋白胨水培养物内加入5-10滴40%KOH，然后加入等量的5%-萘酚溶液，用力震荡，再放入37温箱中保温

13、15-30min.，以加快反应速度，若培养物呈红色者，为伏-普反应阳性。 柠檬酸盐实验：将两种菌分别接入2支柠檬酸盐斜面培养基中，置37培养48h。培养48h后观察柠檬酸盐斜面培养基上有无细菌生长和是否变色，蓝色为阳性，绿色为阴性。 2.2.6.硫化氢实验：用接种针将两种菌分别穿刺接入2支醋酸铅培养基中，置37培养基48h。观察黑色硫酸铅是否产生。3.结果3.1.通过对细菌的分离纯化及培养，我们得到两种菌的菌落。稀释十倍的菌悬液通过平板计数法记录菌落数为42个。又对其进行细菌的大小、形态观察及革兰氏染色，观察结参表一表一 细菌的观察结果菌名形态大小颜色革兰氏染色号边缘整齐，湿润，表面光滑，圆形

14、0.8m淡黄色红色号边缘整齐，湿润，表面光滑，金黄色0.6m金黄色蓝紫色稀释十倍的菌悬液培养后所得菌落如图一，简单染色如图二 图一：稀释十倍的菌悬液菌落 图二：简单染色3.2 糖酵解实验绝大多数细菌能利用糖类作为碳源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大差异，有些细菌能分解某种糖产生有机酸和气体，有些细菌只产酸不产气。发酵培养基含有蛋白胨、指示剂、倒置的德汉氏小管和不同的糖类。当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可有紫色变为黄色。气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。结果如下表二表二 糖酵解实验结果糖类发酵号号对照葡萄糖发酵产酸产气产酸不产气不产酸不产气蔗糖发酵产酸产气产酸不产气不产酸不产气

15、乳糖发酵产酸产气产酸不产气不产酸不产气3.3 大分子水解实验微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质分解后，才能吸收利用。 淀粉水解实验：淀粉酶水解淀粉为小分子糊精、双糖和单糖，淀粉遇碘会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘测定时不再产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。号菌周围无现象，号菌周围有透明光圈。现象如图三图三：淀粉水解实验现象 油脂水解实验：脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸，脂肪水解后产生脂肪酸，可以改变培养基的pH值，使pH降低，加入培养基的中性红指示剂会使培养基从淡红色转变为深红色，说明细胞外存在脂肪酶。现象：号菌苔周围出现红色斑点，为阳性；号菌

16、苔周围也出现红色斑点，为阳性。 明胶水解实验：明胶是由胶原蛋白水解产生的蛋白质，在25以下可维持凝胶状态，以固体形式存在，而在25以上明胶会液化。有些微生物可产生一种称作明胶酶的胞外酶，水解这种蛋白质，而使明胶液化，甚至在4仍能保持液化状态。现象：两种菌都使明胶液化，均为阳性。 石蕊牛奶实验：有些微生物能水解牛奶中的蛋白质酪素，酪素的水解可用石蕊牛奶来检测。石蕊牛奶培养基由脱脂牛奶和石蕊配制而成，是浑浊的蓝色，酪素水解成氨基酸和肽后，培养基会变得透明。两培养基都为白色，均为阳性。 尿素实验：尿素是有大多数哺乳动物消化蛋白质后分泌在尿液中的废物。尿素酶能分解尿素释放出氨。尿素琼脂含有尿素、葡萄糖

17、和酚红，酚红在pH6.8时为黄色，而在培养过程中，产生尿素酶的细菌将分解尿素产生氨，使培养基的pH升高，在pH升至8.4时，指示剂就转变为深粉红色。号菌培养基由黄色变为红色，为阳性；号菌没变，为阴性。表三 大分子水解实验结果细菌淀粉水解实验油脂水解实验明胶水解实验石蕊牛奶实验尿素实验号阴性阳性阳性阳性阳性号阳性阴性阳性阳性阴性3.4 IMViC和硫化氢实验 吲哚实验：有些细菌产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。现象：号菌培养基与乙醚之间有红色，为阳性；号菌培养基与乙醚之间无红色，为阴性。 甲基红实验：细菌代谢糖产生酸时，培养基

18、就会变酸，使加入培养基中的甲基红指示剂由橙黄色转变成红色。现象：两种菌的培养基均由橙黄色变为黄色，为阳性。 伏普实验：某些菌可以利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物，如丙酮酸。丙酮酸进行缩合、脱羧生成乙酰甲基乙醇，此化合物能在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物。现象：号菌无变化，为阴性；号菌变为红色，为阴性。 柠檬酸盐实验：有些细菌利用柠檬酸盐作为碳源，有些则不能。细菌在分解柠檬酸盐及培养基中的磷酸铵后，产生碱性化合物，使培养基的pH升高，当加入1%溴麝香草酚蓝指示剂时，培养基就会由绿色转变为深蓝色。现象：两种菌的培养基均由绿色转变为深蓝色，为阳性。 硫化氢实验：有些细菌能分解