《陈新-生理科学实验教学资料》实验报告21

1、专业：预防医学0501 姓名:朱晶晶沖尢必象实验报告学号：3051861005日期：2007年11月6日 地点：生理学实验室课程名称：生理科学实验实验类型：研究型实验实骑项目名称：药动学实验同组学生姓名： 汪晓敏指导老师：谢强敏药动学实验(浙江大学医学院 预防医学系，浙江 杭州310058)朱晶晶汪晓敏【摘要】目的：掌握药代动力学的基本原理和研究方法，理解药物在体内发生变化的规律, 通过实验掌握吸收、分布、代谢和排泄四个药代动力学重要过程；了解药物在体内随时间变 化的速率过程；了解影响药代动力学过程的因素，包括影响吸收、影响分布、影响代谢和影 响排泄的因素。方法：在波长520nm下测定正常家兔

2、和异常家兔静脉注射psp后不同时间的 吸光度a,并用excel处理数据。给正常小鼠和肝损伤小鼠皮下注射相应剂量10%cch溶液 后用秒表记录小鼠翻正反射消失到恢复吋问。结果：在静脉注射psp的药动学参数计算实验 中，正常家兔和肾损家兔血浆的吸光度随着时间的增加而降低；正常家兔的k为(0. 065± 0. 021) min-1, t”2 为(1 0. 596±2. 911)min, vd 为(0. 090±0 023) ml/kg , cl 为(0. 006± 0. 001) ml/(kg. min),肾损家兔的 k 为(0. 052±0. 02

3、5) min-l,ti/2 为(13. 250±7. 955) min, vd 为(0. 077±0. 020) ml/kg , cl 为(0. 004土0.001) ml/(kg.min)o 而在肝功能对药物作用的 影响中，由于小鼠翻正反射没有消失，所以没有得到实验结果。结论：家兔肾损伤后，k变 小，t“2增尢x变小，cl下降，psp的排泄速率减慢。1. 材料和方法1. 1实验动物小鼠、家兔1.2药品和试剂6g/lpsp溶液,60g/l升汞溶液,200g/l氨基甲酸乙酯或10g/l sodium pentobarbital,稀释液(0. 9%nacl 29ml+lnna0

4、h lml), log/l 肝素钠，4g/l sodium thiopental溶液，10%四氯化碳1.3实验器材 天平，离心机，7200数字型分光光度计，兔板，外科手术器械2. 实验方法2.1静脉注射苯酚磺瞰的药动学参数计算2. 1. 1肾功能受损家兔制备实验前48小时给家兔皮下注射60g/l升汞溶液0. 2ml/kg至实验开始时该兔的肾功能己受相当损害，此即肾功能受损兔。2. 1.2取肾功能正常及肾功能受损的家兔各1只，称重后用麻醉°兔麻醉后分离颈动脉, 并游离约34cm长，结扎远心端，用动脉夹夹住近心端，在靠近结扎的部位用 眼科手术剪在动脉壁上剪一 “v”形小切口，插入动脉插管

5、，结扎固定。取血时 松开动脉夹即可。2. 1. 3从耳缘静脉注射10g/l肝钠素lml/kg,在另一侧耳缘静脉注射6g/kg psp溶液(0. 5ml/kg体重)。注射后第2、5、10、15、20、25分钟分别从颈动脉取血2ml(注意每次取血前应将导管内的陈血放去)，置于刻度试管内，离心10分钟(2000转/分)后取血浆0. 2ml,置于另一试管，加稀释液3山1摇匀待测定。2. 1.4 psp血浆浓度计算以7200分光光度计在波长520nm处测定psp含量。先用稀释液调零，然后测定稀释血浆的吸光度。将测到的吸光度乘以8.13(实验室已利 用不同浓度的psp标准液计算吸光度与psp浓度的线性关系

6、，得到吸光系数 d二8. 13),再乘稀释倍数16,即为psp的血浆浓度。2.1.5药动学参数计算。将时间t作为x, inct作为y,用直线回归分析法excel回归 分析，。求得截距(a=lnc0)及斜率(b=-k)，再计算co、k、tl/2、vd和cl。2. 2肝功能对药物作用的彫响2. 2.1肝损模型试验前24小时用10%四氯化碳0. 2ml/10g皮下注射，损伤小鼠肝功能。实验室已事先造模，并已用苦味酸标记。2.2.2取体重相近的正常及肝功能已损伤小鼠各一只，称体重。并试其翻正反射是否存 在。2. 2. 3 按 0. lml/10g(40mg/kg)剂量腹腔注射(i. p.) 4g/l

7、sodium thiopental 溶液。"3. 观察项目3. 1静脉注射苯酚磺猷的药动学参数计算3. 1. 1观测吸光度a,计算psp浓度。3.1.2药动学参数的计算3. 2肝功能对药物作用的影响3. 2. 1 i. p. 4g/l sodium thiopental溶液后即记录进入翻正反射消失的时间。3. 2. 2翻正反射消失到恢复的时间。3. 2.3将小白鼠处死，剖视肝脏观察形态改变，并注意肝脏形态改变与麻醉作用维持吋间的关系。4. 实验结果4. 1正常家兔和肾损家兔注射psp后不同时间的血浆浓度血浆浓度=& 13*16*吸光度，血浆浓度见表1,表2表1正常家兔静脉注射

8、psp后不同时间的血浆浓度取血时间t (min)2510152025吸光度，a0. 240. 180. 130. 090. 070. 05psp 浓度,ct (mg/ml)30. 7323. 7116.8111. 199. 696. 54lnct(y)3.433. 172.822.422. 271.88表2肾损家兔静脉注射psp后不同时间的血浆浓度取血时间t (min)2510152025吸光度，a0. 300. 220. 180. 120. 100. 09psp 浓度,ct (mg/ml)38. 8528. 6222. 9815. 9613. 0911. 714. 2正常家兔和肾损家兔的药动

9、学参数根据表1，表2中取血时间t和lnct,做线性方程。在正常兔中，其线性方程为y二 -0. 0654x + 3.5018；肾损兔线性方程为y二-0. 0523x + 3. 6627。由此可以知道，正常兔 的co为33. 175(mg/ml),肾损兔的co 38. 966 (mg/m 1)见图1。根据药动学参数计算方法，可 以算得正常家兔的 k 为(0. 065±0, 021) min-1, t“2 为(1 0. 596±2. 911)min, vd 为(0.090 ±0. 023) ml/kg , cl 为(0. 006±0. 001) ml/(kg.

10、min)，肾损家兔的 k 为(0. 052±0. 025) min-1, t”2 为(13. 250±7. 955) min, vd 为(0. 077±0. 020) ml/kg , cl 为(0. 004±0. 001) ml/ (kg. min) 0 见表 3。正常兔：y = -0. 0654x + 3.5018 肾损兔:y = -0. 0523x + 3. 6627图1 psp对数血浆浓度一时间曲线表3正常家兔与肾功能受损家兔的药动学参数参数正常家兔肾损家兔k(min ')0. 065 ±0. 0210. 052 ±0.

11、 025ti/2 (min)10. 596±2. 91113. 250±7. 955vd (ml/kg)0. 090 ±0. 0230. 077±0. 020clml/ (kg. min)0. 006 ±0. 0010. 004 ±0. 0014. 3 sodium thiopental溶液诱导正常小鼠与肝功能受损小鼠麻醉维持时间比较 由于sodium thiopental溶液浓度过高，导致小鼠翻正反射没有恢复。将小鼠处 死，可见正常小鼠肝脏表面细腻，暗红；肝损伤小鼠肝呈土黄色，出现水肿，且表面颗 粒粗大。5. 讨论5. 1分析实验所

12、得得吸光度，无论是正常家兔还是受损家兔，其血浆浓度随着时间的增 加而降低。说明随着时间的加长，药物在体内不断吸收、分布、代谢和排出。5. 2比较肾损家兔与正常家兔，可见，在同一吋刻肾损家兔血浆中psp浓度比正常家兔 要高，肾脏是重要的药物排泄器官，其排泄方式为肾小球滤过和肾小管分泌以及肾小管重吸收。当肾功能损伤时，肾脏排泄为主的消除途径的药物消除速率减慢。此外，肾功能损 伤易引起药物体内蓄积，产生过强或过久的药物作用，甚至发生毒性反应。而因肾功能不 全引起内源性酸性物质的蓄积，影响药物的肾小管排泌。5. 3 t“2是药物消除半衰期，指药物下降一半所需要的时间。其长短可以反应体内药物 消除速率。

13、从表3中可知，肾损家兔消除半衰期耍比正常家兔长，因此对于相同剂量的 psp,正常家兔对药物消除率明显髙于肾损家兔。说明肾脏损伤影响药物消除的速率。5. 4 cl为药物清除率，是机体消除器官在单位时间内清除药物的血浆容积。从表3分 析可知，正常家兔对药物清除率要明显高于肾损家兔。肾功能的损伤使得家兔总体药物清 除率下降。5. 5注射sodium thiopental溶液，小鼠翻正反射消失，但是在本次实验过程中，由于 小鼠较小，而且实验室使用的sodiumthiopental溶液浓度可能过高，导致小鼠在很长的 时间内处于睡眠状态，翻正反射没有恢复，因此没有得到最终的实验数据。5. 6理论上分析，注

14、射sodium thiopental溶液的小鼠翻正反射恢复的吋间会常一些。 因为肝脏作为最主要的药物代谢器官，肝脏功能对于药物作用有着重要的影响：肝脏的生 物转化是巴比妥类药物消除的主要方式之一。sodium thiopental常用于静脉麻醉的药物。 由于该药物的高脂溶性，与血浆蛋白结合率较髙。由肾小球滤过较少，易被肾小管再吸收。 其主要消除方式由肝药酶代谢。因此，肝脏损伤易使sodium thiopental的生物转化受阻, 从而使小鼠的睡眠吋间延长。5. 7肝功能损伤对药物主物转化也具有一定的影响：肝实质细胞受损的疾病可以导致某 些肝药酶减少，主要由肝灭活的药物作用会加强，而肝疾病时常有

15、血浆蛋白减少，更加加 重了这一影响。此外，由于某些药物作用必须经过肝药酶催化反应转变为活性状态才能发 挥作用，因此，肝药酶的减少将影响这些药物的生物转化。从而降低肝脏对药物的代谢。6. 参考文献1陆源 夏强生理科学实验教程浙江大学出版社杭州.2004. 8第1版p261-26621.杨宝峰.药理学.人民卫生出版社.2005.附页表1疋常家兔静脉注射psp后不同时间的血浆吸光度取血时间t (inin)251015202510. 200. 190. 160. 090. 090. 0620.210. 140. 090. 090. 060. 0530. 230. 150. 140. 100. 090. 0740.310. 250. 130. 070. 060. 03x±s0. 24 ±0. 050. 18±0. 050. 13±0. 030. 09±0. 010. 07 ±0. 020. 05±0. 0