益气活血中药延缓血管老化的作用与机制研究ppt课件

1、益气活血中药延缓血管老化的益气活血中药延缓血管老化的作用与机制研讨作用与机制研讨中国中医科学院中国中医科学院 雷雷 燕燕 陈可冀陈可冀 等等973工程分课题之一工程分课题之一研讨背景研讨背景 血管老化血管老化vascular agingvascular aging分为随增龄所致的生理性血分为随增龄所致的生理性血管老化和各种疾病引起的病理性血管老化，均表现血管在管老化和各种疾病引起的病理性血管老化，均表现血管在形状和功能上发生各种衰老变化，如生硬度添加、顺应性形状和功能上发生各种衰老变化，如生硬度添加、顺应性降低和动脉管壁增厚、血管内皮功能低下等降低和动脉管壁增厚、血管内皮功能低下等 血管老化是

2、人体衰老的关键始发要素，也是老龄人群心血血管老化是人体衰老的关键始发要素，也是老龄人群心血管疾病风险添加的主要缘由管疾病风险添加的主要缘由 衰老的过程其实是一个动脉进展性硬化的过程，动脉硬化衰老的过程其实是一个动脉进展性硬化的过程，动脉硬化是衰老的根本缘由，对衰老起决议要素的是血管而非年龄是衰老的根本缘由，对衰老起决议要素的是血管而非年龄研讨背景 目前我国老龄人口比例以每年目前我国老龄人口比例以每年3%3%的速度递增的速度递增, ,老龄人群具有老龄人群具有心脑血管病发病率高的特点，高血压病、冠心病、心功能心脑血管病发病率高的特点，高血压病、冠心病、心功能不全、脑卒中等发生率随增龄急剧上升，均存

3、在着明显的不全、脑卒中等发生率随增龄急剧上升，均存在着明显的心血管老化的表现，即心血管系统构造和功能发生特征性心血管老化的表现，即心血管系统构造和功能发生特征性改动改动 随增龄出现的血管老化问题已成为研讨心血管病危险要素随增龄出现的血管老化问题已成为研讨心血管病危险要素及防治的新靶点，开展心血管衰老的中医药干涉研讨，对及防治的新靶点，开展心血管衰老的中医药干涉研讨，对延缓血管老化，防治心脑血管疾病具有重要意义延缓血管老化，防治心脑血管疾病具有重要意义 血管老化属于血管病变的一种，可由增龄、高脂饮食、运动血管老化属于血管病变的一种，可由增龄、高脂饮食、运动减少、高血压、糖尿病、肥胖等缘由引起，老

4、化的血管病理减少、高血压、糖尿病、肥胖等缘由引起，老化的血管病理学表现为血管内膜增厚、血管硬化和动脉血压改动学表现为血管内膜增厚、血管硬化和动脉血压改动 随着对血管病变认识的深化随着对血管病变认识的深化, 知血管壁病变而不是管腔病变知血管壁病变而不是管腔病变的发生开展才是各种心血管事件发生的根底；在细胞和分子的发生开展才是各种心血管事件发生的根底；在细胞和分子程度，血管老化表如今血管内皮细胞、平滑肌细胞和胞外基程度，血管老化表如今血管内皮细胞、平滑肌细胞和胞外基质程度的改动质程度的改动 血管老化改动了各种心血管疾病的病理生理机制，从而改动血管老化改动了各种心血管疾病的病理生理机制，从而改动了疾

5、病发生的阈值、严重程度和预后了疾病发生的阈值、严重程度和预后老龄及血管老化概述老龄及血管老化概述老龄及血管老化概述老龄及血管老化概述血管老化与血管病变血管老化与血管病变血管老化de主要表现p 脉搏波速度脉搏波速度(PwV) 是评价血管硬度的较好目的是评价血管硬度的较好目的p 脉压增大是反映血管硬化的一项重要目的脉压增大是反映血管硬化的一项重要目的p 颈总动脉内径反映血管壁弹性与伸展性随年龄而下降颈总动脉内径反映血管壁弹性与伸展性随年龄而下降,是衰老的标志是衰老的标志p 踝臂指数踝臂指数(ABI)作为评价血管功能的目的，其降低反映作为评价血管功能的目的，其降低反映ASp 晚期糖基化终产物晚期糖基

6、化终产物(AGE)随增龄在体内积累，是老年病的病理根底之一随增龄在体内积累，是老年病的病理根底之一p 活性氧活性氧(ROS)程度异常增高在介导血管衰老中居于重要的位置程度异常增高在介导血管衰老中居于重要的位置p 肾素肾素-血管紧张素系统血管紧张素系统(RAS) 调理血管细胞的凋亡、调理血管细胞的凋亡、VSMC 迁移、炎性反迁移、炎性反响及响及ECM重建等，重建等，Ang是是RAS的功能多肽的功能多肽p 基质金属蛋白酶基质金属蛋白酶MMP-2)与其抑制剂与其抑制剂(TIMP-2) 比值的调理可以控制血管比值的调理可以控制血管重构的发生、开展重构的发生、开展中医学对血管衰老的认识中医学对血管衰老的

7、认识u以为虚损致衰。气肾虚夹瘀阻络是血管衰老的根本病以为虚损致衰。气肾虚夹瘀阻络是血管衰老的根本病机；延缓衰老应补虚祛瘀法并用机；延缓衰老应补虚祛瘀法并用u心血管疾病的根底病变和共同归路是血管老化，也是多种心血管疾病的根底病变和共同归路是血管老化，也是多种血管病变在血管病变在“入络阶段异病同治的病理根底入络阶段异病同治的病理根底u益气活血药人参、三七是常见的具有抗衰老作用的天然药益气活血药人参、三七是常见的具有抗衰老作用的天然药物，均富含三萜类达玛烷型皂甙，国内外药理研讨已证明物，均富含三萜类达玛烷型皂甙，国内外药理研讨已证明此类有效成分有抗衰老作用，可到达益气活血，祛瘀生新，此类有效成分有抗

8、衰老作用，可到达益气活血，祛瘀生新，通脉活络的作用通脉活络的作用研讨目的研讨目的u以自然衰老小鼠为模型，察看衰老小鼠血管老化所导致以自然衰老小鼠为模型，察看衰老小鼠血管老化所导致血管壁构造和功能的改动，阐明血管衰老的能够机制血管壁构造和功能的改动，阐明血管衰老的能够机制u经过复制内皮细胞经过复制内皮细胞( EC) 模型，提示血管细胞衰老机制模型，提示血管细胞衰老机制u察看益气活血中药能否经过产生察看益气活血中药能否经过产生ROS的的NADPH氧化酶氧化酶亚单位亚单位p47phox的途径延缓血管老化的途径延缓血管老化u提示益气活血中药人参三七川芎提取物延缓血管老化的提示益气活血中药人参三七川芎提

9、取物延缓血管老化的作用和机制作用和机制研讨方法研讨方法 模型：安康雄性自然衰老小鼠，模型：安康雄性自然衰老小鼠，14月龄，月龄，70只只 复制衰老血管内皮细胞复制衰老血管内皮细胞EC模型模型 分组：衰老模型组、人参三七川芎高、中、低剂量组、分组：衰老模型组、人参三七川芎高、中、低剂量组、 维生素维生素E组组VitE组、另设青年对照组组、另设青年对照组 给药：按照小鼠和人体重剂量折算系数关系，中药大、给药：按照小鼠和人体重剂量折算系数关系，中药大、 中、小剂量相当于临床用量的中、小剂量相当于临床用量的2倍、倍、1.5倍、倍、1倍，倍， 维生素维生素E50.0 mg/kgd，给药，给药3个月个月实

10、验药物中药制备：人参、三七、川芎 按比例参与3倍70乙醇提取3次，将醇提取液进展乙醇回收，浓缩至无醇味，制成中药浸膏，含3.164 g生药/g浸膏对照药： 维生素E 购自Sigma公司研讨内容构建自然衰老小鼠模型构建自然衰老小鼠模型察看行为学改动察看行为学改动胸自动脉胸自动脉Messon染色及羟染色及羟脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定检测血浆检测血浆Ang含量含量血管组织抗超氧阴离子血管组织抗超氧阴离子糖基化终末产物糖基化终末产物AGEsMMP-2/ TIMP-2比值比值人参、三七人参、三七川芎川芎 干涉干涉复制衰老复制衰老VEC模型模型细胞形状学察看细胞形状学察看衰老标志物衰老标志物-gal检测

11、；检测；激光共聚焦察看激光共聚焦察看 ROS；MMP-9、AGEs含量和含量和TGF-1的表达的表达流式检测线粒体膜电位流式检测线粒体膜电位细胞周期细胞周期察看目的察看目的益气活血药延缓血管老化的实验研讨益气活血药延缓血管老化的实验研讨 EC部分部分 4代代 5代代 7代代 8代代 10代代 11代代 各代内皮细胞生长情况的比较各代内皮细胞生长情况的比较 益气活血药延缓血管老化益气活血药延缓血管老化-EC形状学察看形状学察看 中药高剂量组中药高剂量组 中药低剂量组中药低剂量组 光镜光镜 100 8代对照组代对照组 VitE组组 第第8代自然衰老细胞，中药高剂量和代自然衰老细胞，中药高剂量和Vi

12、tE 组细胞较衰老模型组光镜下察看，组细胞较衰老模型组光镜下察看，内皮细胞生长形状好，数量较多，增殖较旺盛内皮细胞生长形状好，数量较多，增殖较旺盛益气活血药延缓血管老化益气活血药延缓血管老化-内皮细胞内皮细胞B-gal染色染色 中药高剂量组中药高剂量组 中药低剂量组中药低剂量组 光镜光镜x400 8代对照组代对照组 VitE组组 8代模型衰老组表达代模型衰老组表达B-gal蓝染细胞较多，约蓝染细胞较多，约78%左右；左右；VitE组阳性细胞数约组阳性细胞数约25%左右；中药高剂量组约左右；中药高剂量组约42%左右，低剂量组约左右，低剂量组约38%左右左右细细 胞胞 周周 期期 8代衰老组代衰老

13、组 VitE组组 中药高剂量组中药高剂量组 中药低剂量组中药低剂量组 细细 胞胞 周周 期期 与与VitEVitE组比较组比较, 8, 8代衰老模型组细胞周期向代衰老模型组细胞周期向G0-G0-G1G1期明显停顿，期明显停顿，G2-MG2-M期细胞明显减少；与衰老模期细胞明显减少；与衰老模型组比较，中药高、低剂量组及型组比较，中药高、低剂量组及Vit EVit E组组G0- G1G0- G1期期细胞明显减少，处于细胞明显减少，处于G2-MG2-M期的细胞明显增多，差期的细胞明显增多，差别有统计学意义；阐明中药在一定程度上可以延别有统计学意义；阐明中药在一定程度上可以延缓细胞衰老，促进细胞增殖缓

14、细胞衰老，促进细胞增殖益气活血药延缓血管老化益气活血药延缓血管老化-细胞内细胞内ROS含量激光共含量激光共聚焦聚焦8代模型组代模型组 VitE组组 中药高剂量组中药高剂量组 中药低剂量组中药低剂量组 激光共聚焦激光共聚焦x100中药高、低中药高、低剂量和剂量和VitE组荧光强度组荧光强度较模型组明较模型组明显减弱；提显减弱；提示中药可经示中药可经过减少细胞过减少细胞内活性氧产内活性氧产生，延缓细生，延缓细胞衰老胞衰老细胞培育液抗超氧阴离子与细胞培育液抗超氧阴离子与NO含量含量 8 8代衰老模型组抗超氧阴离子和代衰老模型组抗超氧阴离子和NONO含量明显减少含量明显减少P0.05P0.05；中药高

15、、；中药高、低剂量组抗超氧阴离子和低剂量组抗超氧阴离子和NONO含量比衰老组明显添加，但较含量比衰老组明显添加，但较VitEVitE组含量降低，组含量降低，差别有统计学意义。提示差别有统计学意义。提示8 8代衰老代衰老ECEC抗氧化才干下降，而中药能在一定程度上抗氧化才干下降，而中药能在一定程度上改善内皮的功能，加强抗氧化才干，从而延缓细胞衰老改善内皮的功能，加强抗氧化才干，从而延缓细胞衰老细胞细胞p47phoxp47phox、AT1RAT1R、AT2RAT2R蛋白表达蛋白表达 与VitE组比较，8代衰老组p47phox，AT1R，AT2R表达明显上调；与8代衰老组比较，中药两组与Vit E组

16、p47phox表达明显下调，AT1R，AT2R表达明显下调；与Vit E组比较，中药两组p47phox，AT2R表达上调，AT1R表达仅有上调趋势，无明显差别益气活血药延缓血管老化的整体研讨益气活血药延缓血管老化的整体研讨1 普通情况普通情况 各组小鼠生活情况良好，体质量正常。青年组小各组小鼠生活情况良好，体质量正常。青年组小鼠体毛白且光泽，行动活泼，反响灵敏；其他各鼠体毛白且光泽，行动活泼，反响灵敏；其他各组小鼠体毛较青年组颜色稍暗，动作稍缓慢；组小鼠体毛较青年组颜色稍暗，动作稍缓慢；14月龄模型组小鼠，体毛蓬松，没有光泽，运月龄模型组小鼠，体毛蓬松，没有光泽，运动减少，动作相对较缓慢动减少

17、，动作相对较缓慢益气活血药延缓血管老化的整体研讨益气活血药延缓血管老化的整体研讨2 中药中剂量组 中药低剂量组 维生素E组 HE x100 青年对照组青年对照组 衰老模型组衰老模型组 中药高剂量组中药高剂量组各组小鼠自动脉形状学比较各组小鼠自动脉形状学比较 衰老模型组小鼠血管壁出现典型的衰老表现，给予中药后的小鼠血管衰老模型组小鼠血管壁出现典型的衰老表现，给予中药后的小鼠血管内膜中膜增厚不明显，内皮细胞零落减少，仅有部分平滑肌细胞向内膜迁内膜中膜增厚不明显，内皮细胞零落减少，仅有部分平滑肌细胞向内膜迁移，衰老改动不显著移，衰老改动不显著益气活血药延缓血管老化的整体研讨益气活血药延缓血管老化的整

18、体研讨3 各组小鼠自动脉各组小鼠自动脉Masson染色结果比较染色结果比较衰老模型组小鼠血管壁平滑肌和胶原含量明显增多，给予中药后胶原增生衰老模型组小鼠血管壁平滑肌和胶原含量明显增多，给予中药后胶原增生明显减少，高剂量组可使平滑肌细胞增生明显减少，衰老小鼠血管老化相明显减少，高剂量组可使平滑肌细胞增生明显减少，衰老小鼠血管老化相对减缓对减缓 青年对照组青年对照组 衰老模型组衰老模型组 中药高剂量组中药高剂量组 中药中剂量组中药中剂量组 中药低剂量组中药低剂量组 维生素维生素E组组 Masson染色染色x100 自动脉自动脉Masson 染色及染色及SMC、CF相对含量相对含量(面积面积)比较比

19、较 组别组别nSMC（平滑肌）（平滑肌）CF（胶原纤维胶原纤维 ）对照对照1424.30.2821.60.40模型模型1431.90.86*29.90.80*中药高剂量中药高剂量1429.71.4824.60.38中药中药中剂量中剂量1430.51.4625.60.47中药中药低剂量低剂量1430.72.4226.10.53维生素维生素E1428.81.1424.50.43益气活血药延缓血管老化的整体研讨益气活血药延缓血管老化的整体研讨4 4注：与对照组比较，*P0.05；与模型组比较，P0.05，下表同衰老模型组小鼠血管壁平滑肌和胶原含量明显增多，给予中药后胶原增生明显减少，高剂量组可使平滑

20、肌细胞增生明显减少，衰老小鼠血管老化相对减缓益气活血药延缓血管老化的整体研讨益气活血药延缓血管老化的整体研讨5组别组别n n血浆血浆AngAng含量含量(ng/L)(ng/L)血管组织抗超氧阴离子血管组织抗超氧阴离子(U/L)(U/L)对照对照1414236.45236.4531.1231.1297.0697.063.813.81模型模型1414166.58166.5828.9428.94* *59.3459.344.564.56* *中药高剂量中药高剂量1414207.98207.9844.0544.0580.6180.612.902.90中药中剂量中药中剂量1414176.40176.40

21、45.4945.4969.1669.163.413.41中药低剂量中药低剂量1414168.61168.6144.4444.4465.8965.894.034.03维生素维生素E E1414186.84186.8452.7652.7681.5281.524.314.31各组血管组织抗超氧阴离子、血浆各组血管组织抗超氧阴离子、血浆Ang含量比较含量比较注：与对照组比较，*P0.05；与模型组比较，P0.05，下表同中药灌胃后，小鼠血管组织中的抗活性氧生成才干比衰老模型组有一定程度的加强，阐明中药灌胃后，小鼠血管组织中的抗活性氧生成才干比衰老模型组有一定程度的加强，阐明益气活血药能够经过减少活性氧

22、的生成来延缓血管老化。衰老模型组益气活血药能够经过减少活性氧的生成来延缓血管老化。衰老模型组Ang含量最低，对照含量最低，对照组最高，阐明血浆中组最高，阐明血浆中Ang含量与血管老化的关系不亲密，应进一步检测血管组织中含量与血管老化的关系不亲密，应进一步检测血管组织中Ang含量，确定与血管老化的关系含量，确定与血管老化的关系各组血管组织中各组血管组织中AGEs含量及含量及MMP-2/TIMP-2比值比较比值比较组别组别n nAGEs(ng/mL)AGEs(ng/mL)MMPMMP2 (ng/mL)2 (ng/mL)TIMP-2 (ng/mL)TIMP-2 (ng/mL)MMP-2/TIMP-2

23、MMP-2/TIMP-2对照对照141459.5559.551.851.85180.93180.9310.4610.460.640.640.0830.083286.50286.5028.2428.24模型模型1414215.89215.891.171.17* *246.48246.485.355.35* *0.310.310.0070.007* *794.53794.5325.1225.12* *中药高剂量中药高剂量1414142.57142.571.281.28205.51205.5110.3610.360.500.500.0320.032413.14413.1430.2130.21中药中药

24、中剂量中剂量1414152.14152.141.521.52222.30222.306.936.930.390.390.0080.008565.28565.2820.4120.41中药中药低剂量低剂量1414170.54170.541.661.66224.79224.799.549.540.360.360.0070.007628.58628.5828.1728.17维生素维生素E E组组1414141.29141.291.591.59205.19205.194.144.140.510.510.0060.006401.95401.959.589.58注：与对照组比较，*P0.05；与模型组比较，

25、P0.05青年小鼠AGEs含量较少，而老年小鼠AGEs含量较多，给予中药灌胃后，老年鼠血管中AGEs含量有不同程度的降低，阐明益气活血药在一定程度上降低动脉生硬度，从而延缓血管的老化。而衰老模型组MMP-2 、MMP-2/ TIMP-2最高，TIMP-2含量最低，阐明衰老小鼠已出现年龄相关的血管重构，中药各组小鼠MMP-2 、MMP-2/ TIMP-2明显降低，阐明中药能够经过抑制MMP-2生成、加强TIMP-2的活性，减少血管壁EMC降解，从而延缓血管老化益气活血药延缓血管老化的整体研讨益气活血药延缓血管老化的整体研讨6 研讨结果及进展研讨结果及进展 人参三七川芎可以改善衰老小鼠自动脉形状学衰老变化，人参三七川芎可以改善衰老小鼠自动脉形状学衰老变化，降低血管组织中活性氧的生成，减少降低血管组织中活性氧的生成，减少AGEs生成，抑制生成，抑制MMP-2的活性，调理的活性，调理MMP-2/TIMP