诺氟沙星胶囊微生物限度检查法验证报告1

1、山西太原药业有限公司诺氟沙星胶囊微生物限度检查法验证报告文件编码：ty-gsb-yz (02) -013-04二零一六年一月验证立项申请表立项部门质量部qc申请日期年 月曰立项题口诺氟沙星胶囊微生物限度检查法方法学验证验证原因为确保检验结果的准确性，可靠性及检查方法的完整性，对产品检验 方法进行方法学验证是极为重要的措施，因此，我们对本品的无菌检 查法进行了方法学验证。验证要求及目的：按照2015年版中国药典四部通则微牛物限度检查法规定内容进行验证。为 确保检验结果的准确性和可靠性，定期对检验方法进行方法学验证是极为重要的措 施。立项负责人签名：年 月口质量保证部意见签名：年 月曰验证小组负责

2、人意见签名：年 月口编制验证方案的人员：验证完成要求及日期：严格按照验证方案的内容进行试验并进行数据处理。要求在年 月 日前完成。验证小组负责人签名：年 月日备注：目录1验证目的12范围13责任14内容15验证方法15.1供试品15.1.1菌种名称及来源25.1.2培养基与试剂名称、批号及来源25.1.3仪器与设备252菌液的制备35.3菌液计数45.4计数培养基的适用性检查45.5供试液制备556需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法验证5.7控制菌检查方法验证 6试验结论7偏差97.1偏差报告98验证评价及建议99验证报告：1010验证证书101验证目的根据中国药典2015年版四部通则微生物限度检查

3、法要求，为保证检 验质量，确保检验结果的准确性和可靠性，对诺氟沙星的微生物限度检查法 进行方法学验证。本验证方法适用于供试品的微生物限度检查法方法验证。3责任部门姓名职责质量部蔚晓娟负责验证项目的申请、验证方案的编写和验证的实施质量部李海晋负责验证项目的实施质量部张慧慧负责验证项目的实施质量部高彦红验证小组负责人质量部王雅玲负责验证方案的审核、项目立项的批准、验证的组织实 施和验证报告的批准质量部刘伯梅负责验证报告的批准和偏差的调查4内容验证方法需进行3个不同批次的产品验证并且结果都符合规定时，该方 法才可以用于日后日常检验。5验证方法根据中国药典2015版四部通则微生物限度检查法规格： 10

4、ml5.1供试品诺氟沙星胶囊批号 1601011601021601035.1.1种名称及来源枯草芽孑包杆菌(cmcc(b)63501)、 大肠埃希菌cmcc (b) 44102)、 黑曲霉(cmcc (f) 98003) 金黄色葡萄球菌(cmcc (b) 26003) 白色念珠菌(cmcc (f) 98001) 铜绿假单胞菌cmcc (b) 10104)以上菌种均由中国药品生物制品检定所提供。5.1.2培养基与试剂名称、批号及来源胰酪大豆腺琼脂培养基151109胰酪大豆腺液体培养基151112 沙氏葡萄糖琼脂培养基151117ph7.0氯化钠蛋白陈缓冲液150313以上培养基均由 北京三药科技

5、开发公司 提供。5丄3仪器与设备上海博讯实业有限公司医疗设备厂上海博讯实业有限公司医疗设备厂spx-250b-z生化培养箱:mjx-250b-z霉菌培养箱:5.2菌液的制备(1) 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孑包杆菌、大肠埃希菌 的新鲜培养物至牒酪大豆腺液体培养基中或牒酪大豆腺琼脂培养基上，30 35°c培养1824小时，上述培养物用ph7.0氯化钠蛋片豚缓冲液或0.9%无 菌氯化钠溶液制成每lml含菌数小于1 oocfu的菌悬液。(2) 接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡 萄糖琼脂培养基上，2025°c培养4872小时，上述培养物用ph

6、7.0氯化 钠蛋白腺缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数小于1 oocfu的菌 悬液。(3) 接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20 25°c培养57天，加35ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的ph7.0氯化 钠蛋白月东缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将泡子洗脱。然后采用适宜的方 法吸出抱子悬液至无菌试管内，用含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的ph7.0 氯化钠蛋白腺缓冲液或0.9%的无菌氯化钠溶液制成每1ml含抱子数小于 1 oocfu的孑包子悬液。菌悬液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用，若保存在28°c, 可在24

7、小时内使用。黑曲霉泡子悬液可保存在28°c,在验证过的贮存期 内使用。5.3菌液计数取金黄色葡萄球菌、枯草芽孑包杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌各小于1 oocfu分别注入无菌平皿屮，每株试验菌平行制备2个平皿，立即倾注不高 于45°c的朕酪大豆腺琼脂培养基1520ml, 3035°c培养不超过3天。取 白色念珠菌、黑曲霉各小于1 oocfu分别注入无菌平皿屮，每株试验菌平行制 备2个平皿，立即倾注不高于45°c的沙氏葡萄糖琼脂培养基约1520ml, 2025°c,培养不超过5天，培养计数见表5.1表5.1活菌计数菌种名称金黄色葡萄球菌大肠埃希菌

8、铜绿假单胞菌枯草芽泡杆菌白色念珠 菌黑曲霉菌稀释级w6w6w610'610-510'618893837673622748489826474平均值818&586796&568菌液加入量1ml1ml1ml1ml1ml1ml54计数培养基的适用性检查取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孑包杆菌、各501 oocfu分别注入无菌平皿屮，每株试验菌平行制备2个平皿，立即倾注不高于45°c的胰 酪大豆月东琼脂培养基1520ml, 3035°c培养3天。取h色念珠菌、黑曲霉 各501 oocfu分别注入无菌平皿屮，每株试验菌平行制备2个平皿，立即倾 注不

9、高于45°c的沙氏葡萄糖琼脂培养基约1520ml, 2025°c,培养5天。被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应 在0.52范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体 培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。结果记录见表5.2表5.2计数培养基的菌落数(1ml)种名称培名称金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌枯草芽抱杆菌菌种名称培养名称、白色念珠菌黑曲霉胰酪大 豆腺琼 脂培养 基平皿1858290沙氏葡 萄糖琼 脂培养 基平皿18183平皿2878487平皿27880平均值86838&5平均值79.581.5对照培养基平皿192

10、9095对照培养基平皿19491平皿2938991平皿29094平均值92.589.593平均值9292.5菌回收率0.930.930.95菌回收率0.860.88根据表5.2结果判定培养基的适用性检查是否符合规定。5.5供试液制备本品为抑菌型药物，需氧菌、霉菌和酵母菌采用薄膜过滤法，取供试品 10g(10ml),加ph7.0无菌氯化钠蛋白月东缓冲液，或ph7.2磷酸盐缓冲液, 或胰酪大豆月东液体培养基溶解或稀释制成1:10供试液。若需要，调节供试 液ph值至68。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。56需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法验证5.6.1试验组：取供试品上清液1ml加0.

11、1%无菌氯化钠蛋白腺水溶液至100ml,全量通 过一次性薄膜过滤器，用7.0的无菌氯化钠-蛋白月东缓冲液冲洗滤膜2次 （100ml/次），最后一次冲洗液加大肠埃希菌液lml,将滤膜贴至相应琼脂培 养基平板上，培养。5.6.2菌液组取上述各菌液lml用相应的培养基倒平板，每种菌液平行两皿。5.6.3供试品对照组取供试液lml,加入0.1%无菌氯化钠蛋口腺水溶液100ml,全量通过一 次性薄膜过滤器，用ph7.0氯化钠蛋口腺缓冲液冲洗滤膜两次，过滤两份， 滤膜过滤面向上分别置于朕酪大豆腺琼脂培养基平板和沙氏葡萄糖琼脂培养 基平板上，作为需氧菌菌和霉菌计数样品对照。5.6.4稀释剂对照组取无菌氯化钠

12、-蛋白月东缓冲液100ml,过滤，用pii7.0氯化钠-蛋白月东缓 冲液冲洗两次，每次loonil,最后一次加入试液菌液，分别置于相应培养基 平板上培养。5.6. 5培养温度胰酪大豆月东琼脂培养基培养温度3035°c,培养时间35天，沙氏葡萄 糖琼脂培养基，培养温度20-25°c，培养时间57天。5.6.6验证结果（回收率）计数方法适用性试验中，采用薄膜过滤法时，试验组菌落数减去供试品对照 组菌落数的值与菌液组菌落数的比值应在0.52范围内。结果记录见表5.35.6.7结论根据上述各试验菌的回收率结果，最终判定检查方法是否适合供试品的 需氧菌、霉菌及酵母菌计数方法。5,7控

13、制i检验方法验证5.7.1控制菌检查用培养基的适用性检查菌液制备：同5. 2项下制得菌液的方法。控制菌检查中所用培养基的适用性检查结果记录见表5.4表5. 4培养基名称促生长能力抑制能力指示能力麦康凯琼脂培养基分别接种不大于 loocfu大肠埃希菌 液于麦康凯琼脂培 养基和对照培养基 中置3035°c培养 1872小吋，观察 结果。用涂布法接种不大于loocfu 大肠埃希菌于麦康凯琼脂培 养基和对照培养基平板上置 3035°c培养1872小时, 观察结果。检验结果麦康凯 液体培 养基分别接种不大于 loocfu大肠埃希菌 于麦康凯液体培养 基和对照培养基中 置4244

14、76;c培养 2448小吋，观察 结果。分别接种不少于 loocfu金黄色葡萄 球菌于麦康凯液体 培养基和对照培养 基中置4244°c培 养2448小时,观 察结果。根据实验结果判定以上培养基的适用性检查是否符合规定，是否可用于测定 本品的控制菌检查。5.7.2控制菌检查方法验证5.7.2.1试验组取供试液lml,加入0.1%无菌蛋口腺水溶液100ml,全量通过一次性薄膜过 滤器，用ph7.0氯化钠蛋口腺缓冲液冲洗滤膜两次，最后一次加入大肠埃希菌 菌液1ml,取出滤膜接入100ml膜酪大豆腺液体培养基中。5.7.2.2阴性对照组取稀释液lml,加入0.1%无菌蛋口腺水溶液100ml,

15、全量通过一次性薄膜过 滤器，用ph7.0氯化钠蛋口腺缓冲液冲洗滤膜两次，取出滤膜接入100m朕酪 大豆月东液体培养基屮。5.7.2.3阳性对照组取大肠埃希菌菌液lml,加入0.1%无菌蛋口腺水溶液100ml,全量通过一次 性薄膜过滤器，用ph7.0氯化钠蛋口腺缓冲液冲洗滤膜两次，取出滤膜接入100m 膜酪大豆月东液体培养基中。5723培养取上述培养物lml,接种至100ml麦康凯液体培养基中，4244°c培养24 48小时，取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，3035°c 培养1872小时，若麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长，应进行分离纯化及 适宜的鉴定试验

16、，确证是否为大肠埃希菌；若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落 生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判供试品未检出大肠埃希菌。结果见 表5.5表5.5大肠埃希菌检查结果试验组阴性对照组阳性对照组大肠埃希菌+根据表5的实验结果，判定试验方法是否可用于本品的控制菌检查。6试验结论按照中国药典2015版要求我们对 诺氟沙星胶囊 的微生物限度检 查法进行了方法学验证。结果各项指标规定，证明本方案适合本品的微生物限度检查。7偏差验证过程中如果出现偏差，应立即通知验证小组并对偏差进行详细记录，分 析偏差产生的根木原因并提出解决方法。所有偏差得到有效处理后，验证方可进 入下一步骤。7.1偏差报告偏差报告偏差号偏

17、差描述及建议的纠正措施验证人员签名h期纠正措施的审核和批准qa主任签名日期结果跟踪qa主任签名h期纠正措施产生积极的效果？是否确认质量管理部jj h验证小组年月 日8验证评价及建议验证评价：在整个验证工作中严格按照验证方案进行了验证，中间未对验证方案 进行修改，通过对诺氟沙星胶囊三个不同批次的微牛物限度检查法验证数据及结 果的评价分析，按照薄膜过滤法对木品进行需氧菌、霉菌和酵母菌计数是可行的, 按照验证的方法检查大肠埃希菌也是可行的。这次在整个验证过程中，较详细地 填写了各种记录。建议：以后在木品检验过程中，须加强偏差的发现和分析，以便及时釆取纠正和 预防措施。评价人：日期： 年 月 日9验证

18、报告:在验证领导小组的组织下，对诺氟沙星胶囊微生物限度检查法进行了验证， 于 年 月 日开始按照验证方案实施了验证并于 刀 日结束了验证工 作。按验证方案的验证标准，对诺氟沙星胶囊的三批（批号：160101、160102、 160103）分别进行了需氧菌、霉菌和酵母菌计数验证以及大肠埃希菌检查法的验证，通过对验证数据及结果的评价分析，按照薄膜过滤法对诺氟沙星胶囊 进行需氧菌、霉菌和酵母菌计数以及大肠埃希菌检查是可行的。在整个验证过程 中，较详细地填写了各种记录。报告人：日期： 年 月 日10验证证书验证证书编号:ty-jsb-yz (06) -013-04验证报告名称诺氟沙星胶囊微生物限度检查法验证验证项目按照验证方案所设计的标准，对产品的需氧菌、霉菌和酵母菌 计数以及大肠埃希菌检查方法分别验证。验证要求及目的按验证方案的验证标准，对诺氟沙星胶囊三批（批号:16010k 160102、160103、）分别进行了需氧