洁净区环境监测操作规程

1、洁净区环境监测操作规程1 目的用于规范洁净区温湿度、压差、噪音、照度、沉降菌、浮游菌监测的操作。2 适用范围适用于洁净区温湿度、压差、噪音、照度、沉降菌、浮游菌观察的测定。3 职责3.1 质量保证部 qa 负责噪音、照度的检测。3.2 生产车间人员负责温湿度、压差的观察。3.3 生产部空调操作人员负责温湿度、压差的调控，并及时反馈信息。3.4 设备工程部计量人员负责监控仪器、仪表的定期校验。3.5 质量控制部人员负责洁净区的沉降菌的配制、计数、报告的完成。3.6 质量保证部现场监控qa负责洁净区的沉降菌的监测。3.7 生产车间配合洁净区沉降菌监测的完成。3.8 qc 人员负责浮游菌的监测。4

2、内容4.1 洁净区洁净等级划分4.1.1 a 级：指高风险操作区，如：灌装、放置胶塞桶、敞口安瓿瓶、敞口西林瓶的区域及无菌装配或连接操作的区域。通常用层流操作台（罩）来维持该区的环境状态。4.1.2 b 级：指无菌配制和灌装等高风险操作a级区所处的背景区域。4.1.3 c 级和 d级：指生产无菌药品过程中重要程度较次的洁净操作区。4.2 温湿度4.2.1 标准规定：洁净区的温度和相对湿度应与药品生产工艺要求相适应。无特殊要求时，洁净区温度为 18 26，相对湿度控制在45% 65%。有特殊要求车间根据工艺控制。4.2.2 温度观察：检查温湿度计是否完整，视线正对温湿度计水平读取显示的数据，需要

3、记录的应立即填入表格中。4.2.3 湿度观察：视线正对湿度表，准确读数。需记录的应立即填入表格中。4.2.4 需要加水的湿度计，在观察前应检查在蓄水腔内是否有水，无水则需加入适量水，再观察湿度。4.2.5 洁净区的温湿度每天至少记录两次，上午一次，下午一次。4.2.6 设备计量人员每年至少组织校验一次监控系统的仪器设备。4.3 静压差4.3.1 湿度观察：标准规定：洁净区与非洁净区之间、不同等级洁净区之间的压差应不低于10帕斯卡，相同洁净度等级不同功能的操作间之间应保持2-3 帕的压差梯度，以防止污染和交叉污染。4.3.2 产尘房间与相邻房间呈相对负压。4.3.3 洁净区的静压差以微压差计显示

4、，每日至少记录两次，上午一次，下午一次。（包括洁净区与室外，不同洁净级别间及所有有压差指示的房间）。4.3.4 测试时所有的空调系统和层流系统应处于连续的正常运行状态。4.3.5 洁净室所有的门应关闭，测试时不允许有人穿越房间。4.3.6 当发现监测结果超出标准规定的范围时，应立即检查原因，必要时对空调系统进行调整。4.4 噪音4.4.1 标准规定：洁净区噪音不得高于70 分贝。4.4.2 洁净区的噪音检查每年不得少于一次，在经过设备大修、厂房改造、工艺布局调整等变更的时候应在变更结束后重新检测噪音。4.4.3 检测方法检测点布置，当面积50m2 时，仅测房间中心一个点；当房间面积较大时，每增

5、加50m2 增加一个点，测点距在1.2m 。4.5 照度4.5.1 标准规定：洁净区主要操作间照度不得少于300勒克斯，一般照明的照度均匀度不应小于 0.7。4.5.2 洁净区的照度检查每年不得少于一次，在经过设备大修、厂房改造、工艺布局调整等变更的时候应在变更结束后重新检测照度。4.5.3 检测要求：室内照度测度必须在室温已趋稳定，光源光输出趋于稳定后进行（对荧光灯必须有 100h ）。4.5.4 检测方法测点平面离地面0.85m ，按间距 1-2m 布点，测点距墙面1m。其要求基本与洁净度的测定位置要求相同。记录实测照度值并计算总的平均照度。照度测量一般仅测定除局部照明之外的一般照明。4.

6、6 沉降菌4.6.1 方法概述：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿， 经若干时间， 在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。4.6.2 使用的仪器和设备4.6.2.1 高压消毒锅：使用时应严格按照操作规程进行。4.6.2.2 恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。4.6.2.3 培养皿一般采用 90mm 15mm 硼硅酸玻璃培养皿。使用前将培养皿置于121 湿热灭菌 20min 。4.6.2.4 培养基：普通营养琼脂培养基。将培养基加热熔化， 冷却至约 45在无菌操作条

7、件下将培养基注入培养皿，每皿约 15ml 。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入3035恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿应在28的环境中存放。4.6.3 测试步骤4.6.3.1 采样方法：将已制备好的培养皿放置在预先确定取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露 0.5h，再将培养皿盖上盖后倒置。4.6.3.2 培养在3035培养，时间为5天。每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定 3只培养皿作对照培养。4.6.3.3 菌落计数：用肉眼直接计数，然后用510倍放大镜检查，是否有遗漏。若培养皿上有2个或 2个以上菌落重叠，可分

8、辨时仍以2个或 2个以上的菌落计数。4.6.4 注意事项4.6.4.1 测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。4.6.4.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。4.6.4.3 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。4.6.4.4 由于细菌种类繁多，差别甚大， 计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，必要时用显微镜鉴别。4.6.4.5 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。4.6.5 测试规则4.6.5.1 测试状态沉降菌测试前， 被测试洁净区的温湿度须达到规定的要求，静压差必须控制在规定值内。沉降菌测试前，被测试洁

9、净区已经过消毒。测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。4.6.5.2 测试人员测试人员必须穿戴符合环境级别的工作服。静态测试时，室内测试人员不得多于2个人。4.6.5.3 测试时间对单向流， 如a级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。对非单向流，如b级、 c级、 d级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于 30分钟开始。4.6.5.4 沉降菌采样点采样点数目及其布置：最少采样点数目：沉降菌的最少采样点数可按表1确定。在满足最少测点数的同时，不宜满足最少培养皿数，见表2。采样点的布置：工作区测试点位置

10、离地0.8 1.5m 左右（略高于工作面）。可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点，采样点的布置应力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。4.6.5.5 记录：测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差、测试状态及测试数据。表1 最少采样点数目面积（）洁净度级别a、b 级c 级d 级 10 2-3 2 2 10 -20 4 2 2 20 -40 8 2 2 40 -100 16 4 2 100 -200 40 10 3 注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积，对于非单向流洁净室，指的是房间面积表2 最少培养皿数洁净度级别所需 90mm 培养皿数（以沉降0.5h

11、计）a 级14 b、c 级2 d 级2 4.6.6 结果计算4.6.6.1 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。4.6.6.2 平均菌落数的计算见下式：式中： m为平均菌落数；m1为1 号培养皿菌落数；m2为2 号培养皿菌落数；mn 为n 号培养皿菌落数；n 为培养皿总数。4.6.7 结果评定：用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。4.6.7.1 洁净区内的平均菌落数必须符合所选定的评定标准。见表3。4.6.7.2 若某洁净区的菌落数超过评定标准，则必须对此区域先行消毒，然后重新测试两次，测试结果必须合格。4.6.7.3 重新测试仍不合格，按“ 洁净室环境监控管理规程” 进行超标调查。表3 级

12、别状态a 级b 级c 级d 级标准（静态） 1个/皿1 个/皿3 个/皿10 个/皿标准（动态） 1个/皿5 个/皿50 个/皿100 个/皿4.7 浮游菌4.7.1 取样前准备工作：4.7.1.1 依据检测区域的取样点数，按照培养基配制、灭菌标准操作程序制备适量的营养琼脂培养基。4.7.1.2 在超净工作台内，以无菌操作法将配制好的营养琼脂培养基以每皿约15ml 的装量分装，待培养基凝固后移出洁净区。4.7.1.3 将制备的营养琼脂平皿倒置于隔水式恒温水浴培养箱内于3035培养 48小时。取出逐个检查，确认无菌落数后即可使用。4.7.1.4 采样：将上述制备好的营养琼脂平皿交与qa 人员取样

13、。4.7.2 仪器、设备和培养基：4.7.2.1 所用的仪器、设备和培养基：浮游菌采样器培养皿（ 90mm 15mm）培养基（营养琼脂培养基）恒温培养箱4.7.2.2 仪器、设备、培养基的要求：浮游菌采样器：浮游菌采样器必须要有流量计和定时器。应严格按仪器说明书的要求进行操作。采样器必须按仪器的检定周期，定期对仪器作检定，以保证测试数据的可靠性，检验项目有：定时器，转盘转速，流量计。每次测试前应先接通电源，启动真空抽气泵，然后调节流量计和定时器。空气采样量根据需要选定，已知采样器的流量（l/min ）,设定采样时间（min）两者相乘即得采样量（l） 。采样口必须用便于消毒及化学性能稳定的材料制

14、造，采样管严禁渗漏，内壁应光滑， 采样管的长度应根据测定点的高度定，尽量减少弯曲。4.7.3 测试方法：4.7.3.1 测试用仪器、培养皿表面必须严格消毒。采样器进入被测房间前先用消毒剂灭菌。用消毒剂擦净培养皿的外表面。采样前， 先用消毒剂消毒采样器的顶盘、转盘以及罩子的内外面，采样结束再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。采样口及采样管使用前必须高温灭菌，如用消毒剂对采样管的外壁、内壁进行消毒，应将管中的残留液倒掉并晾干。采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。4.7.3.2 采样程序：仪器经消毒后先不放入培养皿，开动真空泵抽气，使仪器的残余消毒剂

15、蒸发，时间不少于 5min ，并调好流量、转盘转速。关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子后调节采样品缝隙高度。置采样器于采样点后，开启采样器、转动定时器，根据采样量设定采样时间。4.7.4 测试规则：4.7.4.1 测试状态：浮游菌测试前微生物限度检查室已经消毒过。测试状态为静态测试，并在报告中注明测试状态。4.7.4.2 测试人员：测试人员必须穿戴符和被测环境级别的工作服。静态测试时，室内人员不得多于2人。4.7.4.3 测试时间：对单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min 后开始。对非单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min 后开始。4.7.4.4 最少采样点数目及其布

16、置，最小采样量，见下表: 面积（ m2）洁净度级别a b c 验证监测验证监测验证监测10 23 1 2 1 2 - 10 20 4 2 2 1 2 - 20 40 8 3 2 1 2 - 40 100 16 4 4 1 2 - 100 200 40 - 10 - 3 - 200 400 80 - 20 - 6 - 400 160 - 40 - 13 - 工作区测点位置离地0.8m 1.5m 左右， 送风口测点位置离开送风面30cm 左右； 可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。每个采样点一般采样一次对于单向流或送风口，采样器采样管口朝向应正对气流方向；对于非单向流， 采样管口向上。布置采样点时，至少应离开尘粒较集中的回风口1m以上。采样时，测试人员应站在采样口的下风侧。4.7.5 培养：取样结束后将平皿复倒置隔水式恒温水浴培养箱内于3035培养 48 小时。并以