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文档简介
1、第第14章章 平面色谱法平面色谱法14.1 概述14.2 平面色谱法的技术参数14.3 固定相、载体与薄层板14.4 样品制备与点样14.5 平面色谱法的展开14.6 展开后处理与斑点定位14.7 定性分析14.8 定量分析14.9 在药学领域的应用14.1 概述14.1 概述14.1.1 平面色谱法的一般过程薄层板制备点样展开斑点定位定性定量样品制备衍生化预平衡平面色谱法一般操作流程14.1 概述14.1.2 分离原理、分类及分离机理14.2 平面色谱法的技术参数14.2 平面色谱法的技术参数1. 比移值2. 相对比移值0ifLLR sif(s)f(i)rLLRRRiL0L比移值计算示意图s
2、L0LiL相对比移值计算示意图展开剂前沿原点14.2 平面色谱法的技术参数1. 平面色谱中K、k与Rf的关系kRRRVVKVcVck11 1msmmssffmsf1 /1111RRkVKVkR14.2 平面色谱法的技术参数2. 相平衡参数的对比移值和分离效果的影响 相平衡参数分配系数和容量因子决定着Rf的大小,进而决定着平面色谱的分离结果。而相平衡参数从根本上取决于组分、固定相和展开剂三者之间的性质,当组分和固定相选定后,比较灵活实用的策略是对展开剂进行优化选择。此外,展开过程中的温度、压力等外界因素也会影响热力学参数的大小,影响比移值。14.2 平面色谱法的技术参数 平面色谱法的分离效能称为
3、面效,薄层色谱法称为板效。面效参数也为理论塔板数N和理论塔板高度H,反映的是组分在平面色谱中分离效能的动力学特性,但其表达式与柱效有所不同。1. 平面色谱的理论塔板数2. 平面色谱的理论塔板高度NLHWLN02 1614.2 平面色谱法的技术参数1. 分离度2. 分离数21ff021122112222WWRRLWWLLWWdR112/102/10WWLSN1W2Wdd原点原点展开剂前沿展开剂前沿分离度计算示意图14.3 固定相、载体与薄层板14.4 样品制备与点样14.5 平面色谱法的展开1. 展开剂的选择 展开剂的作用是携带样品中的组分分子向一定方向移动,使不同组分因移行速度的差异而分离。展
4、开剂有单一溶剂或多元溶剂体系所构成。 要求:合适的纯度、稳定性、低粘度、适当的蒸气压、线性分配等温线、低毒性。 薄层色谱的展开剂选择原则与其它色谱法相类似。 纸色谱的展开剂由三类溶剂构成三元系统:第一类是对被分离物质溶解度较小的极性溶剂;第二类是对被分离物质溶解度较大的溶剂;第三类是用于调节的溶剂。14.5 平面色谱法的展开2. 展开方式:一维单向展开、单向多次展开、增量(减量)单向多次展开。3. 展开设备:俗称层析缸,常用的有上行展开室、下行展开室、水平展开室、全自动展开室等。4. 影响展开的因素:平面色谱是开放型色谱,影响因素较多,主要有固定相的厚度和均匀程度、环境相对湿度、溶剂蒸气、温度、展开方式、展开距离等。14.6 展开后处理与斑点定位14.7 平面色谱法定性分析1. 斑点比移值对照法2. 斑点显色特征法3. 斑点薄层扫描法(1) 斑点原位光谱扫描定性(2) 薄层色谱全扫描定性(3) 薄层三维扫描光谱图定性(4) 与其它方法联合定性。14.8 平面色谱法定量分析1. 薄层色谱扫描定量分析原理2. 薄层色谱扫描定量分析方法3. 薄层
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