马传染性贫血PPT课件

1、马传染性贫血病简介马传染性贫血，是由马传染性贫血病毒引起马属马传染性贫血，是由马传染性贫血病毒引起马属动物的一种慢性传染病，以病毒持续感染、反复动物的一种慢性传染病，以病毒持续感染、反复发热和贫血为特征，且可人畜互传，一旦发生很发热和贫血为特征，且可人畜互传，一旦发生很难消灭。难消灭。第1页/共23页流行病学 病马和带毒马是本病的传染源病马和带毒马是本病的传染源，其血液、肝、脾、淋巴结等均有病毒存在，其血液、肝、脾、淋巴结等均有病毒存在，发热期病马分泌物和排泄物也含有病毒。发热期病马分泌物和排泄物也含有病毒。 吸血昆虫（蚊、虻等）是主要的传播媒介吸血昆虫（蚊、虻等）是主要的传播媒介，也可经消化

2、道、呼吸道、交配、，也可经消化道、呼吸道、交配、胎盘传染，也可由被病毒污染的注射针头和诊疗器械等散播胎盘传染，也可由被病毒污染的注射针头和诊疗器械等散播 。 仅马属动物易感，仅马属动物易感，其中以马最易感，驴、骡次之，且无品种、年龄和性别其中以马最易感，驴、骡次之，且无品种、年龄和性别差异。差异。 本病主要呈地方流行或散发。本病主要呈地方流行或散发。一般无严格的季节性和地区性，但在吸血昆一般无严格的季节性和地区性，但在吸血昆虫较多的夏秋季节及森林、沼泽地带发病较多。在新疫区以急性型多见，虫较多的夏秋季节及森林、沼泽地带发病较多。在新疫区以急性型多见，病死率较高，老疫区则以慢性型、隐性型为多，病

3、死率较低。病死率较高，老疫区则以慢性型、隐性型为多，病死率较低。 第2页/共23页病原学 马传染性贫血病毒（马传染性贫血病毒（EIAV）为）为RNA病病毒毒，属于，属于反转录病毒科慢病毒属。病毒粒子呈圆形，有反转录病毒科慢病毒属。病毒粒子呈圆形，有囊膜，以出芽方式成熟和释放。囊膜，以出芽方式成熟和释放。 病毒有病毒有群特异性抗原群特异性抗原，用补体结合反应和琼脂，用补体结合反应和琼脂扩散反应可以检出，主要用于本病的诊断。另扩散反应可以检出，主要用于本病的诊断。另还有还有型特异性抗原型特异性抗原，是各型毒株间不同的抗原，是各型毒株间不同的抗原，存在于病毒粒子表面，可用病毒存在于病毒粒子表面，可用

4、病毒- -血清中和试验血清中和试验检出，主要用于病毒型的鉴别。本病至少有检出，主要用于病毒型的鉴别。本病至少有1414个型。个型。 病毒只在马属动物白细胞及驴胎骨髓、肺、脾、病毒只在马属动物白细胞及驴胎骨髓、肺、脾、皮肤、胞腺等细胞培养时才可复制。用马属动皮肤、胞腺等细胞培养时才可复制。用马属动物以外的其它动物人工感染和进行细胞培养均物以外的其它动物人工感染和进行细胞培养均未获成功。未获成功。 第3页/共23页 病毒对外界的抵抗力较强。在粪便中能生存两个半月，将粪便堆积发酵时，经病毒对外界的抵抗力较强。在粪便中能生存两个半月，将粪便堆积发酵时，经3030分钟即可死亡。分钟即可死亡。2%2%4%

5、4%氢氢氧化钠液和福尔马林液，均可在氧化钠液和福尔马林液，均可在5 51010分钟内将其杀死，分钟内将其杀死，3%3%来苏儿液可在来苏儿液可在2020分钟内杀死。日光照射分钟内杀死。日光照射1 14 4小小时死亡。在时死亡。在-20-20左右病毒可保存毒力达左右病毒可保存毒力达6 6个月到个月到2 2年。病毒对热的抵抗力较弱，煮沸立即死亡。年。病毒对热的抵抗力较弱，煮沸立即死亡。 第4页/共23页临床症状 临床特征以发热临床特征以发热(稽留热或间歇热稽留热或间歇热)为主，并有贫血、出血、黄疸、心机能紊乱、为主，并有贫血、出血、黄疸、心机能紊乱、浮肿和消瘦等症状。浮肿和消瘦等症状。 血相变化：红

6、细胞显著减少，血红蛋白降低，血沉加速。白细胞减少，丙种球血相变化：红细胞显著减少，血红蛋白降低，血沉加速。白细胞减少，丙种球蛋白增高，外周血液中出现吞铁细胞。在发热期，嗜酸粒细胞减少或消失，退蛋白增高，外周血液中出现吞铁细胞。在发热期，嗜酸粒细胞减少或消失，退热后，淋巴细胞增多。热后，淋巴细胞增多。 根据临诊表现，可分为急性、亚急性、慢性和隐性四种病型。根据临诊表现，可分为急性、亚急性、慢性和隐性四种病型。第5页/共23页病理变化 急性型呈现全身败血变化。浆膜、黏膜、淋巴结和实质脏器有急性型呈现全身败血变化。浆膜、黏膜、淋巴结和实质脏器有弥漫性出血点弥漫性出血点( (斑斑) )。脾急性肿大，暗

7、红或紫红色，红髓软化，。脾急性肿大，暗红或紫红色，红髓软化，白髓增生，切面呈颗粒状。肝肿大，黄褐色或紫红色，肝细胞白髓增生，切面呈颗粒状。肝肿大，黄褐色或紫红色，肝细胞索变性与中央静脉、窦状隙淤血交织，使肝切面形成豆蔻状或索变性与中央静脉、窦状隙淤血交织，使肝切面形成豆蔻状或槟榔状花纹，有槟榔状花纹，有“豆蔻肝豆蔻肝”或或“槟榔肝槟榔肝”之称。之称。 亚急性和慢性病主要是脾、肝、肾、心脏及淋巴结等的网状内亚急性和慢性病主要是脾、肝、肾、心脏及淋巴结等的网状内皮细胞的增生，肝脏内见有多量吞铁细胞。长骨的骨髓红区扩皮细胞的增生，肝脏内见有多量吞铁细胞。长骨的骨髓红区扩大，黄髓内有红髓增生灶，慢性严

8、重病例骨髓呈乳白色胶冻状。大，黄髓内有红髓增生灶，慢性严重病例骨髓呈乳白色胶冻状。第6页/共23页马传染性贫血驴白细胞活疫苗 用马传染性贫血病毒用马传染性贫血病毒(EIAV)(EIAV)通过驴白细胞人工驯化而制成的疫苗。为中国首创，可刺激马、驴产生明显体通过驴白细胞人工驯化而制成的疫苗。为中国首创，可刺激马、驴产生明显体液和细胞免疫应答，保护率分别达液和细胞免疫应答，保护率分别达85%85%以上以上( (马马) )和和100%(100%(驴驴) )。 对马、驴接种后免疫力的产生虽较缓慢对马、驴接种后免疫力的产生虽较缓慢, ,但免疫持续期较长，免疫保护率较高。这是目前国际上唯一的马传但免疫持续期

9、较长，免疫保护率较高。这是目前国际上唯一的马传染性贫血活毒疫苗染性贫血活毒疫苗, ,该成果达到国际先进水平。该成果达到国际先进水平。第7页/共23页第8页/共23页毒种选择毒种：毒种：马传贫驴白细胞弱毒。（毒力弱，免疫原性良好。）马传贫驴白细胞弱毒。（毒力弱，免疫原性良好。）应符合条件：应符合条件：毒种病毒液含毒量对培养的驴白细胞毒种病毒液含毒量对培养的驴白细胞10106 6TCIDTCID5050/ml/ml；病毒液对驴最小感染；病毒液对驴最小感染量与免疫量量与免疫量1010-5-5/ml/ml；病毒液对标准琼扩、补体结合反应的阳性血清必须有抗原性，与补体抗原效价应在；病毒液对标准琼扩、补体

10、结合反应的阳性血清必须有抗原性，与补体抗原效价应在3.03.0以上；接种健康马属动物不出现马传贫症状和不引起死亡，但具有血清学反应。以上；接种健康马属动物不出现马传贫症状和不引起死亡，但具有血清学反应。第9页/共23页制造要点 驴白细胞培养：动物选择，供提取驴白细胞的驴为驴白细胞培养：动物选择，供提取驴白细胞的驴为2 25 5岁无马传贫感染的健康者。岁无马传贫感染的健康者。 无菌采取血浆并分离出白细胞，加赛氏液（无菌采取血浆并分离出白细胞，加赛氏液（SeligmarlsSeligmarls）与牛血清混合的营养液培养）与牛血清混合的营养液培养48h48h。接毒按。接毒按3%3%量接量接毒后，继续

11、培养。收获病毒再培养毒后，继续培养。收获病毒再培养5 57d7d进行，收毒冻融二次。进行，收毒冻融二次。第10页/共23页质量标准 疫苗需无菌；疫苗需无菌； 补体结合试验效价不低于补体结合试验效价不低于2.02.0； 驴白细胞做毒力测定不低于驴白细胞做毒力测定不低于10105 5TCIDTCID5050/ml/ml； 原苗原苗5ml5ml皮下注射健康马，观察皮下注射健康马，观察3 3个月，每天测温两次，每个月，每天测温两次，每2Od2Od进行补体结合反应检验；须无马传贫症状；进行补体结合反应检验；须无马传贫症状；血清阳性率需达到血清阳性率需达到2/32/33/43/4，苗可判为合格。，苗可判为

12、合格。第11页/共23页保存与使用 液体苗液体苗0 044可保存可保存7d 7d ，-20-20以下可保存一年。冻干苗以下可保存一年。冻干苗0 044可保存可保存6 6个月，个月，-20-20以下可保存两年。以下可保存两年。 液体苗为微黄色澄清液体。冻干苗为微黄色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。按瓶液体苗为微黄色澄清液体。冻干苗为微黄色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。按瓶签注明头份，用签注明头份，用PBSPBS缓冲液稀释，马、驴、骡各皮下注射缓冲液稀释，马、驴、骡各皮下注射2 2毫升。注苗后，马需毫升。注苗后，马需3 3个月，驴、骡需个月，驴、骡需2 2个月

13、才能个月才能产生免疫力，免疫持续期为产生免疫力，免疫持续期为2 2年。年。第12页/共23页诊断制剂 1 1、马传贫琼脂扩散反应抗原、马传贫琼脂扩散反应抗原毒种：驴胎肺、真皮、胸腺二倍体细胞上培养毒种：驴胎肺、真皮、胸腺二倍体细胞上培养 传代适应，抗原性良好的马传贫病毒。传代适应，抗原性良好的马传贫病毒。 毒种条件：收毒后冻融三次，无菌收集。毒种条件：收毒后冻融三次，无菌收集。 按按1.5%1.5%沉淀物制出抗原，免疫扩散法测沉淀物制出抗原，免疫扩散法测 定效价，扩散环直径定效价，扩散环直径10mm10mm以上。以上。 第13页/共23页 制造要点：制造要点： 将将6 6月龄左右驴胎肺、皮肤、

14、胸腺等组织制成二倍体细胞，换入等量维持液，按月龄左右驴胎肺、皮肤、胸腺等组织制成二倍体细胞，换入等量维持液，按2%-5%2%-5%接种，培养接种，培养10-15d10-15d收毒。调收毒。调pHpH至至5.0,45.0,4透析透析15h15h，离心，弃上清，沉渣以，离心，弃上清，沉渣以pH8.6pH8.6硼酸缓冲液稀释，再加乙醚研磨，待乙醚挥硼酸缓冲液稀释，再加乙醚研磨，待乙醚挥发后重复一次处理后即为抗原。发后重复一次处理后即为抗原。第14页/共23页 抗原检验：抗原检验： 用含用含8 8个单位标准阳性血清，配置成含个单位标准阳性血清，配置成含1%1%标准阳性血清的标准阳性血清的1%1%琼脂平

15、板，经反应后出现沉淀环者即为合琼脂平板，经反应后出现沉淀环者即为合格。格。第15页/共23页 2 2、马传贫补体结合反应抗原、马传贫补体结合反应抗原 独到特点：应用驴白细胞或驴胎肺、骨髓传代细胞生产抗原；把小牛血清改为大牛血清；把乙醚处理病毒独到特点：应用驴白细胞或驴胎肺、骨髓传代细胞生产抗原；把小牛血清改为大牛血清；把乙醚处理病毒培养物改为吐温培养物改为吐温-80-80（非离子型表面活性剂）和乙醚等量联合处理，大大增加抗原生产量。（非离子型表面活性剂）和乙醚等量联合处理，大大增加抗原生产量。 3 3、ELISAELISA抗原抗原第16页/共23页马传贫疫苗研究意义 马传贫疫苗的研究成功，突破

16、了慢病毒不能免疫的理论，对慢病毒的免疫预防提供了战略性的理论依据，马传贫疫苗的研究成功，突破了慢病毒不能免疫的理论，对慢病毒的免疫预防提供了战略性的理论依据，蕴含着慢病毒免疫的巨大信息，为一系列人畜慢病毒免疫的研究开辟了新的路线，马传贫疫苗作用机理的蕴含着慢病毒免疫的巨大信息，为一系列人畜慢病毒免疫的研究开辟了新的路线，马传贫疫苗作用机理的阐明将为阐明将为AIDSAIDS疫苗的研究提供借鉴。疫苗的研究提供借鉴。第17页/共23页 原来，马传贫疫苗是采用传统的细胞学方法研制出来的，这种旨在使病毒在细胞传代培养的过程中减低毒原来，马传贫疫苗是采用传统的细胞学方法研制出来的，这种旨在使病毒在细胞传代

17、培养的过程中减低毒力的方法，不但所用的时间较长，而且由于受到技术手段的限制，研究者只能看到它最终的结果，却并不力的方法，不但所用的时间较长，而且由于受到技术手段的限制，研究者只能看到它最终的结果，却并不能了解其中的免疫机理，无从知晓一个原本可以使动物致死的病毒究竟何时变成有免疫保护作用的疫苗了。能了解其中的免疫机理，无从知晓一个原本可以使动物致死的病毒究竟何时变成有免疫保护作用的疫苗了。如今，运用现代分子生物学技术就能弥补传统细胞学技术知其然、不知其所以然的缺憾。如今，运用现代分子生物学技术就能弥补传统细胞学技术知其然、不知其所以然的缺憾。第18页/共23页 马传贫病毒与艾滋病病毒的主要遗传信

18、息的基因结构完全相同，马传贫病毒与艾滋病病毒的主要遗传信息的基因结构完全相同，所以，只要找到马传贫病毒基因中的有毒部分，就可以确定所以，只要找到马传贫病毒基因中的有毒部分，就可以确定HIVHIV中带毒基因的位置；如果将中带毒基因的位置；如果将HIVHIV的这部分基因减掉后其毒性也随的这部分基因减掉后其毒性也随之消失的话，艾滋病致人死地的谜底就将被揭开。因此，首当之消失的话，艾滋病致人死地的谜底就将被揭开。因此，首当其冲的是要找到马传贫病毒中这段关键的致病基因。此时，保其冲的是要找到马传贫病毒中这段关键的致病基因。此时，保存了存了2020年的马传贫疫苗几百代传代样本就派上了大用场年的马传贫疫苗几百代传代样本就派上了大