薄层色谱PPT课件

1、第一第一节节 薄层色谱法的基本原理薄层色谱法的基本原理一、 基本原理 （一）吸附色谱分离原理 利用吸附剂对不同组分吸附力的大小及展开剂解吸附作用的差异进行分离。 吸附牢的组分随展开剂的移动慢，吸附弱的组分随展开剂移动快，一段时间后，组分被分离。固定相：固体吸附剂流动相：液体展开剂第1页/共40页（二）比移值和相对比移值（1） 比移值uRf 是薄层色谱的定性参数，一定条件下Rf为定值，在01之间，可用范围在0.2-0.8之间。u组分的极性越大，Rf 越小，反之越大。第2页/共40页（2）相对比移值RsRf 小于1， 而Rs不一定小于1第3页/共40页二、 吸附薄层色谱中吸附剂与展开剂（一） 吸附

2、剂（固定相）的选择 常用的吸附剂：硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭和大孔吸附树脂。 吸附剂的选择要合适，与流动相、被分离化合物不起反应。（1 1）硅胶：极性吸附剂，应用范围广）硅胶：极性吸附剂，应用范围广 物理吸附为主，氢键吸附为辅物理吸附为主，氢键吸附为辅 微酸性，不直接用于碱性成分的分离微酸性，不直接用于碱性成分的分离 机械强度好，适用于薄层色谱机械强度好，适用于薄层色谱 吸附容量大，与羟基数目有关吸附容量大，与羟基数目有关常用硅胶的规格：硅胶常用硅胶的规格：硅胶H H，硅胶，硅胶G G，硅胶，硅胶GFGF254254等等 第4页/共40页（2）氧化铝： a 极性吸附剂，较硅胶强。 b 物理吸

3、附为主，氢键吸附为辅。 C. 微碱性，不直接用于酸类物质的分离。 p 碱性氧化铝：适用于碳氢化合物、生物碱及其它碱性化合 物的分离。p 中性氧化铝：应用最广，适用于醛、酮、醌及酯类的分离p 酸性氧化铝：适用于有机酸的分离。第5页/共40页 硅胶和氧化铝含水量越高，吸附活性越弱。 只要在110左右加热，这些“自由水” 就能被可逆性地除去。利用这一原理可以对吸附剂进行活化（去水）和脱活化（加水）处理，以控制吸附剂的活性。 硅胶、氧化铝的含水量与活性级别活性等级IIIIIIIVV 氧化铝加水量 /%0361015 硅胶加水量 /%0515 2538第6页/共40页硅胶、氧化铝薄层：被分离物质的极性越

4、大，越易被吸附。一般规律：（1）官能团极性越大，整个分子的极性越大，越易被吸附；（2）形成分子内氢键是，被吸附力减弱；（3）同系物中，分子量越大，极性越小，被吸附力越弱。第7页/共40页（二）展开剂（流动相）的选择（二）展开剂（流动相）的选择 硅胶、氧化铝薄层：展开剂的极性越大，其展开能力越强，化合物在色谱中移动的速度就越快，表现为Rf 增大。常用溶剂极性大小选择原则：被分离成分极性大展开剂极性大被分离成分极性小展开剂极性小第8页/共40页被分离组分极性展开剂极性吸附剂活性Rf洗脱顺序大大弱小后洗脱小小强大先洗脱硅胶薄层色谱规律总结硅胶薄层色谱规律总结第9页/共40页第二节 薄层色谱系统简介第

5、三节 操作方法及注意事项略：在操作方法中部分介绍1 1、薄层板的制备、薄层板的制备 2 2、点样、点样3 3、展开、展开 4 4、显色和定位、显色和定位5 5、薄层扫描仪对斑点扫描、薄层扫描仪对斑点扫描第10页/共40页1、薄层板的制备、薄层板的制备载板要求：具有一定的机械强度、化学惰性，耐一定温度、载板要求：具有一定的机械强度、化学惰性，耐一定温度、表面平整、价格便宜表面平整、价格便宜第11页/共40页薄层板分类和制法软板的制备软板的制备硬板的制备硬板的制备 倾注法倾注法 平铺法平铺法 机械涂布法机械涂布法第12页/共40页（1 1）软板的制备）软板的制备软板：直接将吸附剂铺在玻璃板上制成，

6、不加粘合剂软板：直接将吸附剂铺在玻璃板上制成，不加粘合剂3.3.橡皮膏橡皮膏 4.4.橡皮管橡皮管要求：厚度要求：厚度随分离要求而定，一般随分离要求而定，一般0.250.250.5mm0.5mm 玻璃棒推动速度不宜过快、也不应停顿玻璃棒推动速度不宜过快、也不应停顿影响厚度均一性影响厚度均一性优点：方法简便、随用随铺、展开速度快。优点：方法简便、随用随铺、展开速度快。缺点：吸附剂易脱落、只能用近水平展开，效果差。缺点：吸附剂易脱落、只能用近水平展开，效果差。第13页/共40页（2 2）硬板的制备）硬板的制备硬板：吸附剂加硬板：吸附剂加粘合剂粘合剂制成的板制成的板常用的粘合剂：常用的粘合剂：无机粘

7、结剂：煅石膏（）无机粘结剂：煅石膏（）机械强度差，易脱落，但不易腐蚀机械强度差，易脱落，但不易腐蚀u 硅胶硅胶G-G-，含，含13-15%13-15%煅石膏煅石膏u 制备硅胶制备硅胶G-G-，含，含30%30%煅石膏煅石膏u 氧化铝氧化铝GG含含9%9%煅煅石膏石膏粘结剂作用：加强固定相颗粒的附着力，增加薄层板润湿性，改善色谱分离。有机粘结剂：羧甲基纤维素钠有机粘结剂：羧甲基纤维素钠（CMC-NaCMC-Na）机械机械强度好，不易脱落，但易强度好，不易脱落，但易腐蚀，不适于浓硫酸显色腐蚀，不适于浓硫酸显色第14页/共40页 a a、倾注法：、倾注法：硅胶硅胶G G或氧化铝或氧化铝G G，直接加

8、水调成糊状，直接加水调成糊状硅胶或氧化铝，加羧甲基纤维素钠水溶液调成糊状硅胶或氧化铝，加羧甲基纤维素钠水溶液调成糊状倒在玻璃板上倒在玻璃板上均匀铺开、振荡、晾干、活化、置干燥器中备用。均匀铺开、振荡、晾干、活化、置干燥器中备用。第15页/共40页 b b、平铺法：、平铺法：1. 1. 吸附剂薄层吸附剂薄层 2. 2. 涂布器涂布器 3. 3. 玻璃夹板玻璃夹板4. 4. 玻璃板玻璃板 5. 5. 玻璃夹板玻璃夹板过程：制板过程：制板振荡振荡晾干晾干活化活化备用备用优点：一次铺多块薄层板，简单易行。优点：一次铺多块薄层板，简单易行。 c c、机械涂布法：、机械涂布法：优点：简单方便、薄优点：简单

9、方便、薄板厚度均匀、分离效板厚度均匀、分离效果好。果好。 手动涂布器手动涂布器 全自动涂布器全自动涂布器第16页/共40页常用的薄层板：常用的薄层板：软板：硅胶软板：硅胶H H板、氧化铝板、氧化铝H H板板硬板：常用的有硅胶硬板：常用的有硅胶G G板、氧化铝板、氧化铝G G板、硅胶板、硅胶CMC-NaCMC-Na板、氧板、氧化铝化铝CMC-NaCMC-Na板、板、硅胶硅胶GF GF 、硅胶、硅胶GFGF荧光指示剂第17页/共40页第18页/共40页2、点样、点样（1 1）样品溶液的制备：）样品溶液的制备： 怎样选择溶剂？怎样选择溶剂？ 水可以用吗？水可以用吗？点样基线：距底边点样基线：距底边2

10、.0cm2.0cm样点直径：样点直径：2-4mm2-4mm点间距离：点间距离：1.5-2.0cm1.5-2.0cm第19页/共40页（2 2）点样量：）点样量： 与薄层板的关系与薄层板的关系 太多太少的影响太多太少的影响第20页/共40页（3 3）点样方法：）点样方法： 划线、样品记号点、点样划线、样品记号点、点样 注：动作要轻，注：动作要轻， 毛细管或点样器不能混用，毛细管或点样器不能混用， 斑点大小适当，可多次点样。斑点大小适当，可多次点样。平头平头50ul50ul微量点样器微量点样器全自动点样仪全自动点样仪第21页/共40页3、展开、展开展开缸（色谱缸）展开缸（色谱缸）第22页/共40页

11、（1 1）展开方式：）展开方式：a a、近水平展开、近水平展开特点：速度快、适用于软板的展开。特点：速度快、适用于软板的展开。第23页/共40页b b、上行展开、上行展开 过程：预饱和（滤纸贴于展开槽内侧）、展开、标记过程：预饱和（滤纸贴于展开槽内侧）、展开、标记溶剂前沿溶剂前沿第24页/共40页c c、单向二次展开、单向二次展开d d、双向二次展开、双向二次展开3、展开、展开（1 1）展开方式：）展开方式：萜的各类含萜的各类含氧衍生物氧衍生物极性较小的展开剂极性较小的展开剂极性较大的展开剂极性较大的展开剂原点：含氧衍生物原点：含氧衍生物萜烯类萜烯类含氧衍生物含氧衍生物第25页/共40页（2

12、2）注意事项：）注意事项：a a、色谱槽需密闭良好、色谱槽需密闭良好b b、注意防止边缘效应、注意防止边缘效应第26页/共40页4、显色和定位、显色和定位一般规律：一般规律：日光下观察、紫外灯下观察、加显色剂日光下观察、紫外灯下观察、加显色剂加显色剂：多喷雾，软板使用浸渍显色法加显色剂：多喷雾，软板使用浸渍显色法紫外灯观察紫外灯观察喷显色剂观察喷显色剂观察第27页/共40页5、薄层扫描仪对色谱斑点进行扫描、薄层扫描仪对色谱斑点进行扫描 用一束长宽可以调节的一定波长、一定强度的光照射到薄层斑点上进行整个斑点的扫描，用仪器测量通过斑点或被斑点反射的光束强度的变化从而达到定量的目的。 第28页/共4

13、0页判断依据：判断依据：R Rf f值、值、R Rs s值值1、查找资料：影响Rf值的因素 吸附剂种类、活度、颗粒大小；展开剂纯度和极性；薄层厚度；点样量；展开方式、温湿度；展开槽中的预饱和状态等。2、对照品比较法：常用。四、结果计算和判断四、结果计算和判断（一）定性鉴别（一）定性鉴别第29页/共40页1、对照品比较法：、对照品比较法：杂质对照品制成一定浓度的溶液杂质对照品制成一定浓度的溶液样品制成一定浓度溶液样品制成一定浓度溶液按相同的点样量点样按相同的点样量点样展开后观察斑点颜色深浅和大小展开后观察斑点颜色深浅和大小（二）杂质检查（杂质限量检查）（二）杂质检查（杂质限量检查）如异烟肼中游离

14、肼的检查： 肼是一种诱变剂和致癌物质，中国药典对异烟肼原料和注射用异烟肼中游离肼的检查均采用薄层色谱法。 检查方法取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作为供试品溶液。另取硫酸肼加水制成每1ml中含0.20mg（相当于游离肼50g）的溶液，作为对照溶液。吸取供试液10l 与对照溶液2l，分别点于同一硅胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇丙酮（3:2）为展开剂，展开后，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15min后检视，在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。 第30页/共40页2、自身稀释对比法、自身稀释对比法（杂质结构不明或无杂质对照品（杂质结构不明

15、或无杂质对照品）样品溶液稀释制成一定浓度的溶液样品溶液稀释制成一定浓度的溶液样品制成一定浓度溶液样品制成一定浓度溶液按相同的点样量点样按相同的点样量点样展开后观察斑点颜色深浅和大小展开后观察斑点颜色深浅和大小（二）杂质检查（杂质限量检查）（二）杂质检查（杂质限量检查）如地西泮中有关物质的检查： 取本品的细粉适量（约相当于地西泮200mg），加丙酮5ml,振摇，使地西泮溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；精密量取适量，加丙酮稀释成每1ml中含地西泮0.20mg的溶液，作为对照溶液。点样展开后，供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。 第31页/共40页1、目视比较法：、目视比较法

16、：对照品制成不同浓度的系列溶液对照品制成不同浓度的系列溶液样品制成定量溶液样品制成定量溶液按相同的点样量点样按相同的点样量点样展开后观察斑点颜色深浅和大小展开后观察斑点颜色深浅和大小注：本法适用于近似含量的测定，误差注：本法适用于近似含量的测定，误差10%10%（三）含量测定三）含量测定第32页/共40页2、斑点洗脱法、斑点洗脱法对照品制成溶液对照品制成溶液 点于薄板两侧点于薄板两侧样品制成一定浓度溶液样品制成一定浓度溶液 线状点于薄板起始线中间部分线状点于薄板起始线中间部分展开展开对对照品显色，以此为依对对照品显色，以此为依据刮下含有样品的吸附剂据刮下含有样品的吸附剂将样品溶解，按照分光光度

17、法测定溶液浓度将样品溶解，按照分光光度法测定溶液浓度（三）含量测定（三）含量测定第33页/共40页3、薄层扫描法、薄层扫描法（三）含量测定（三）含量测定（1）外标法 用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。此法可分为及等。工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。在完全相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度，工作曲线法也可以用代替。通常截距应为零，若不等于零说明存在系统误差。工作曲线的截距为零时，可用外标一点法定量。 此法要求点样量准确相同。此法

18、要求点样量准确相同。 第34页/共40页 取本品水蜜丸取本品水蜜丸6g6g，研碎，或取小蜜丸或大蜜丸，研碎，或取小蜜丸或大蜜丸9g9g，切，切碎，加硅藻土碎，加硅藻土4g4g，研匀。加乙醚，研匀。加乙醚40ml40ml，低温回流，低温回流1 1小时，滤过，小时，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加丙酮滤液挥去乙醚，残渣加丙酮1ml1ml使溶解，作为供试品溶液。另使溶解，作为供试品溶液。另取取丹皮酚丹皮酚对照品，加丙酮制成每对照品，加丙酮制成每1ml1ml含含1mg1mg的溶液，作为对照的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法品溶液。照薄层色谱法( (附录附录 B) B)试验，吸取上述两种溶液试验，吸取上述两种溶液各各10l,10l,分别点于同一硅胶薄层板上，以环己烷醋酸乙分别点于同一硅胶薄层板上，以环己烷醋酸乙酯酯(3:1) (3:1) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性 5 5三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点。与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点。 （20052005年版年版中国药典中国药典一部一部