《荧光分析法 》ppt课件

1、第十一章第十一章 荧光分析法荧光分析法第一节第一节 根本原理根本原理第十一章第十一章 荧光分析法荧光分析法一、分子荧光一、分子荧光一分子荧光的产生一分子荧光的产生1 1分子的电子能级与激发过分子的电子能级与激发过程程 =hcES0S1*T1*电子能级的多重性电子能级的多重性 M2s1第十一章第十一章 荧光分析法荧光分析法吸收吸收振动驰豫振动驰豫荧光荧光内转换内转换外转换外转换磷光磷光体系间跨越体系间跨越第十一章第十一章 荧光分析法荧光分析法二激发光谱与发射光谱二激发光谱与发射光谱excitation spectrum 横坐标横坐标ex，纵坐标，纵坐标 发射光强度发射光强度fluorescenc

2、e spectrum 横坐标横坐标em，纵坐标，纵坐标 发射光强度发射光强度溶液荧光光溶液荧光光谱的特征谱的特征第十一章第十一章 荧光分析法荧光分析法二、荧光与分子构造二、荧光与分子构造荧光寿命荧光寿命(f)和荧光效率和荧光效率 (f) Ft = F0 e -t /fln F0Ft f =发射荧光的光子数发射荧光的光子数吸收激发光的光子数吸收激发光的光子数 第十一章第十一章 荧光分析法荧光分析法有机化合物分子构造与荧光的关系有机化合物分子构造与荧光的关系u长共轭构造u刚性和共平面性u取代基第十一章第十一章 荧光分析法荧光分析法荧光试剂荧光试剂u荧光胺uDansyl-Clu邻苯二甲醛(OPA)u

3、测定无机离子的荧光试剂第十一章第十一章 荧光分析法荧光分析法三、影响荧光强度的外部要素三、影响荧光强度的外部要素u 温度温度u 溶剂溶剂upH值值u荧光熄灭荧光熄灭u散射光散射光极性溶剂极性溶剂溶剂粘度溶剂粘度瑞利散射瑞利散射拉曼上式拉曼上式荧光熄灭剂荧光熄灭剂荧光自熄灭荧光自熄灭第十一章第十一章 荧光分析法荧光分析法选择适当的激发波长可消除拉曼光的干扰选择适当的激发波长可消除拉曼光的干扰第十一章第十一章 荧光分析法荧光分析法第二节第二节 荧光定量分析方法荧光定量分析方法第十一章第十一章 荧光分析法荧光分析法一、荧光强度与物质浓度的关系一、荧光强度与物质浓度的关系F=K(I0-I)I=I010

4、-ECLF= KI0(1-10-ECL) = KI0(1-e-2.3ECL)假设假设c很小，很小，Ecl 0.05 那么那么第十一章第十一章 荧光分析法荧光分析法F=2.3KI0ECl=KCuECl0.05 F Cu ECl 0.05 F 与与C不成正比不成正比u荧光分析法的灵敏度高于紫外荧光分析法的灵敏度高于紫外-可见分光光度法可见分光光度法FA= - lgT = - lgI /I0 荧光法荧光法紫外法紫外法第十一章第十一章 荧光分析法荧光分析法二、定量分析方法二、定量分析方法1.规范曲线法规范曲线法2.比例法对比法比例法对比法3.多组分分析多组分分析多组分分析多组分分析用空白溶液调零用空白

5、溶液调零用规范溶液调满刻度用规范溶液调满刻度第十一章第十一章 荧光分析法荧光分析法第三节第三节 仪器与其他荧光分析技术仪器与其他荧光分析技术第十一章第十一章 荧光分析法荧光分析法一、荧光分光光度计一、荧光分光光度计u滤光片荧光计滤光片荧光计u滤光片滤光片单色器单色器u荧光分光光度计荧光分光光度计第十一章第十一章 荧光分析法荧光分析法仪器的校正仪器的校正u灵敏度灵敏度u波长波长u激发光谱和荧光光谱激发光谱和荧光光谱以能被检出的最低信号来表示以能被检出的最低信号来表示在选定条件下用稳定荧光物质校正在选定条件下用稳定荧光物质校正用汞灯规范谱线校正用汞灯规范谱线校正双光束仪器时，误差可抵消双光束仪器时，误差可抵消第十一章第十一章 荧光分析法荧光分析法