重医检验考博真题

1、临床检验诊断学1. 病例分析（全英文的病例）去年考的是梗阻性黄疸2. 名词解释（1）APTT（2）CTnT CTnI （3）FQ-PCR(4) 增强免疫比浊法（5）DNA芯片/基因芯片（6）TrFIA（7）AG（阴离子间隙）3. 简答题，分析题（1）脂蛋白与AS的关系？（2）影响酶促动力学的因素？（3）肾小管与集合管的功能检测？（4）实验室生物安全防护？（5）对一个已知基因序列片段的功能分析（其蛋白质水平上的功能分析），设计你的实验思路分析化学1. 名词解释（1）DNA芯片采用光导原位合成或微量点样等方法，将大量生物大分子比如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等等生物样品有序地高密度固化于支

2、持物（如玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体）的表面，制成点阵，然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交，通过特定的仪器比如激光共聚焦扫描对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析，从而判断样品中靶分子的数量。根据芯片上固定的探针不同，生物芯片包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片、组织芯片。如果芯片上固定的是肽或蛋白，则称为肽芯片或蛋白芯片；如果芯片上固定的分子是寡核苷酸探针或DNA，就是DNA芯片。DNA芯片技术包含四个基本要点：DNA方阵的构建、样品的制备、杂交,杂交图谱的检测及读出。DNA芯片技术的应用：基因表达分析，基因型和多态性分析，疾病的诊断与治疗，肿瘤检测研究及抗肿瘤药物筛选

3、，临床应用蛋白质芯片(protein array)是近年来蛋白质组学研究中兴起的一种新的方法，它类似于基因芯片，是将蛋白质点到固相物质上，然后与要检测的组织或细胞等进行“杂交”，再通过自动化仪器分析得出结果。这里所指的“杂交”是指蛋白与蛋白之间如(抗体与抗原)在空间构象上能特异性的相互识别。此方法与传统的研究方法相比具有如下优点: 蛋白质芯片是一种高通量的研究方法，能在一次实验中提供相当大的信息量，使我们能够全面、准确的研究蛋白表达谱，这是传统的蛋白研究方法无法做到的。蛋白质组芯片的灵敏度高，它可以检测出蛋白样品中微量蛋白的存在，检测水平已达ng 级。蛋白质芯片具有高度的准确性。 蛋白质芯片的

4、运用：蛋白质组芯片可用于蛋白质组学研究中的各个领域，具体来说大致可分为三个方面: 研究蛋白质与蛋白质之间的相互作用，筛选新的蛋白质。用于现在其它方法不能检测到的，如蛋白质-药物、蛋白质-脂质之间的相互作用。还可用于检测蛋白与小分子物质的作用，例如蛋白质与DNA ，RNA分子等。问题：蛋白质芯片的制作是决定其运用的关键因素之一， 蛋白质组芯片的制作比当前流行DNA 芯片制作要复杂，（2）变性高效液相色谱（DHPLC）（Denaturing High Performance Liquid Chromatography，DHPLC）又称为温度调控的杂合双链色谱（Temperature Modulat

5、ed HeteroduplexChromatography，TMHC），是一种检测DNA突变的HPLC技术。DHPLC检测DNA突变主要是在适当的部分变性温度和洗脱条件下，通过离子对反相高效液相色谱技术使不匹配的异源双链DNA与匹配的同源双链DNA得以分离和检测。已广泛用于基因突变检测、单核苷酸多态性分析（SNPs）和短片段串联重复序列分析（STRs）。在色谱分离过程中，带正电荷的TEAA离子与带负电荷的DNA缔合为离子对，TEAA/DNA离子对通过TEAA分子中的烷基链在固定相上产生保留。DNA片段越长，所带负电荷越多，与之结合的TEAA分子就越多。因此，DNA片段越长，与固定相的亲和力就越

6、强。所以，在不变性温度条件下，可分离长度不同的纯合双链DNA分子。（3）化学发光酶免疫分析法（ECLIA）化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。化学发光酶免疫分析( chemi luminescent enzyme immuno

7、assay,CLEIA ) , 应属酶免疫分析, 只是酶反应的底物是发光剂, 操作步骤与酶免分析完全相同 5 : 以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体) 进行免疫反应, 免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物, 在信号试剂作用下发光, 用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷酸酶(AL P) , 它们有各自的发光底物。增强发光酶免疫分析(enhanced lum ines2cence enzym e imm unoassay, EL E IA )在发光系统中加入增强发光剂, 如对2碘苯酚等, 以增强发光信号, 并在较长时间内保持稳定, 便于重复测量

8、, 从而提高分析灵敏度和准确性。在全自动分析仪上, 还可通过计算机严密控制, 进行自动操作, 如加试剂, 混合, 温育, 洗涤, 加发光试剂, 发光计数, 数据处理, 绘制标准曲线, 直至完成病人血清样品的分析并打印出结果。（4）生物传感器生物传感器是用生物活性材料（酶、蛋白质、DNA、抗体、抗原、生物膜等）与物理化学换能器有机结合的一门交叉学科，是物质分子水平的快速、微量分析方法。有着广泛的应用前景。各种生物传感器有以下共同的结构：包括一种或数种相关生物活性材料（生物膜）及能把生物活性表达的信号转换为电信号的物理或化学换能器（传感器），二者组合在一起，用现代微电子和自动化仪表技术进行生物信号

9、的再加工，构成各种可以使用的生物传感器分析装置、仪器和系统。原理：待测物质经扩散作用进入生物活性材料，经分子识别，发生生物学反应，产生的信息继而被相应的物理或化学换能器转变成可定量和可处理的电信号，再经二次仪表放大并输出，便可知道待测物浓度。特点：专一性强，分析速度快，准确度高，操作系统比较简单 ，容易实现自动分析，成本低（5）生物信息学（6）代谢组学一门对某生物或细胞所有低分子量（相对分子量小于1000）代谢产物进行定性和定量分析的一门新科学。与传统的代谢研究相比，代谢组学通过现代化学的仪器分析技术测机体整个代谢产物谱的变化，并通过多元统计分析方法研究整体的生物学功能状况。 根据研究对象的不

10、同，目前科学界把它分为四个层面：代谢物靶标的分析： 某个或几个特定组分的分析。代谢谱分析： 少数预设的一些代谢产物的定量分析；代谢组学分析： 限定条件下的特定生物样品中所有代谢组分的定性和定量。 指纹图谱分析： 不分离鉴定具体单一组分，而是对样品进行快速分类 ；目前代谢组学研究主要集中于疾病的诊断，营养学，药物作用机制，药物毒理学及植物学等方面； 代谢组学研究过程包括：前期的样品制备,中期的代谢产物分离、检测与鉴定以及后期的数据分析与模型建立三个部分。（7）LCM不同发育、生长期和不同生理、病理条件下不同的细胞类型的基因表达是不一致的，因此对蛋白质表达的研究应该精确到细胞甚至亚细胞水平。可以利

11、用免疫组织化学技术达到这个目的，但该技术的致命缺点是通量低。LCM（Laser Capture Microdissection，激光捕获显微切割）技术可以精确地从组织切片中取出研究者感兴趣的细胞类型，因此LCM技术实际上是一种原位技术。取出的细胞用于蛋白质样品的制备，结合抗体芯片或二维电泳-质谱的技术路线，可以对蛋白质的表达进行原位的高通量的研究。很多研究采用匀浆组织制备蛋白质样品的技术路线，其研究结论值得怀疑，因为组织匀浆后不同细胞类型的蛋白质混杂在一起，最后得到的研究数据根本无法解释蛋白质在每类细胞中的表达情况。虽然培养细胞可以得到单一类型细胞，但体外培养的细胞很难模拟体内细胞的环境，因此

12、这样研究得出的结论也很难用于解释在体实际情况。因此在研究中首先应该将不同细胞类型分离，分离出来的不同类型细胞可以用于基因表达研究，包括mRNA和蛋白质的表达。 LCM技术获得的细胞可以用于蛋白质样品的制备。可以根据需要制备总蛋白，或膜蛋白，或核蛋白等，也可以富集糖蛋白，或通过去除白蛋白来减少蛋白质类型的复杂程度。 LCM-二维电泳-质谱的技术路线是典型的一条蛋白质组学研究的技术路线，除此以外，LCM-抗体芯片也是一条重要的蛋白质组学研究的技术路线。即通过LCM技术获得感兴趣的细胞类型，制备细胞蛋白质样品，蛋白质经荧光染料标记后和抗体芯片杂交，从而可以比较两种样品蛋白质表达的异同。Clontec

13、h最近开发了一张抗体芯片，可以对378种膜蛋白和胞浆蛋白进行分析。该芯片同时配合了抗体芯片的全部操作过程的重要试剂，包括蛋白质制备试剂，蛋白质的荧光染料标记试剂，标记体系的纯化试剂，杂交试剂等。 我个人认为做2-D的都应该来关注一下这项技术，它大大提高了2-D结果的参考价值和可信度，也许会成为以后的一种趋势。2. 简答题（1）列举各色谱法的优势（蛋白质的分离方法，选择不同的色谱分析模式）（2）氨基酸的测定？生物分析化学(2003年)1. 生物芯片的概念及其应用。生物芯片（biochip）是指采用光导原位合成或微量点样等方法，将大量生物大分子比如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等等生物样品有

14、序地固化于支持物（如玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体）的表面，组成密集二维分子排列，然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交，通过特定的仪器比如激光共聚焦扫描或电荷偶联摄影像机（CCD）对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析，从而判断样品中靶分子的数量。由于常用玻片/硅片作为固相支持物，且在制备过程模拟计算机芯片的制备技术，所以称之为生物芯片技术。根据芯片上的固定的探针不同，生物芯片包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片、组织芯片，另外根据原理还有元件型微阵列芯片、通道型微阵列芯片、生物传感芯片等新型生物芯片。如果芯片上固定的是肽或蛋白，则称为肽芯片或蛋白芯片；如果芯片上固定的分子是寡核苷酸探针或DNA，就是DNA芯片。基因表达谱研究，交测序和基因组文库作图，检测基因突变和多态性，应用于定位克隆2. 毛细管电泳的概念。3. 色谱分析的概念其应用。（几种柱层析、亲和层析、离子交换层析）4. PCR的基本概念与基本操作过程。5. 蛋白质组分析的技术。6. 核酸的提取原则，基本操作步骤（DNA、RNA）。7. 描述色谱峰的基本参数。8. 正相与反相色谱的定义与特点。9. 色谱分析中氨基酸测定常用的模式。10. 色谱分析中蛋白质分离分析