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文档简介

1、实验一、蛋白质的等电点测定实验一、蛋白质的等电点测定和沉淀反响和沉淀反响一、目的1.了解蛋白质的两性解离性质2.学习测定蛋白质等电点的一种方法3.加深对蛋白质胶体溶液稳定要素的认识4.了解沉淀蛋白质的几种方法及其实意图义二、原理 蛋白质是两性电解质。在蛋白质溶液中存在以下平衡：等电点:当溶液的pH到达一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目 相等，在电场中，蛋白质既不向阴极挪动，也不向阳极挪动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。 四、操作步骤n一酪蛋白等电点的测定1取同样规格的试管4支，参与各试剂，然后混匀。此时 4个管的pH依次为5.9、5.5、4.7、3.5。n2各加酪蛋白的醋酸钠溶液

2、1mL， 加一管，摇匀一管。察看其混浊度。静置10分钟后，再察看其混浊度。最混浊的一管pH即为酪蛋白的等电点。 二蛋白质的沉淀及变性1、蛋白质的盐析 n蛋白质的盐析: 无机盐硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等的浓溶液能析出蛋白质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白那么在饱和硫酸铵溶液中才干析出。n盐溶:由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。n于试管中参与蛋白质溶液5mL ，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟那么析出球蛋白的沉淀。倒出少量混浊沉淀，加少量水，察看能否溶解，为什么？将管内容物过滤，向滤液中添加

3、硫酸铵粉末到不再溶解为止。此时析出沉淀为清蛋白。取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，察看沉淀的再溶解。2、重金属离子沉淀蛋白质 n 重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。取1支试管，参与蛋白质溶液2mL，再加3%硝酸银溶液12滴，振荡试管，有沉淀产生。放置片刻，倾去上清液，向沉淀中参与少量的水，沉淀能否溶解？为什么？3、某些有机酸沉淀蛋白质 n 取1支试管，参与蛋白质溶液2mL，再参与1ml5%三氯乙酸溶液，振荡试管，察看沉淀的生成。放置片刻倾出清液，向沉淀中参与少量水，察看沉淀能否溶解。4、有机溶剂沉淀蛋白质n 取1支试管，参与2mL蛋白质溶液，再参与2mL95%乙醇。察看沉淀的生成假设沉淀不明显，加点NaCl，混匀。5、乙醇引起的变性与沉淀 n取3支试管，编号。依下表顺序参与试剂1.向各管内加水4ml，在2，3管内各加一滴甲基红2.第二管中用0.1molL醋酸溶液中和。第三管用0.05mol/L碳酸钠溶液中和，察看各管的颜色变化和沉淀生成3.每管再加0.1mol/L盐酸溶液数滴，察看沉淀的再溶解五、本卷须知n等电点测定的实验要求各种试剂的浓度和参与量必需相当准确。六、实验报告n以表格方式总结实验结果，包括察

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