S007红细胞ABO血型(正反定型)、RhD鉴定标准化操作规程

1、标准化操作规程 作业指导书 SOPREG007.01赣州市人民医院输血科 第 8 页 共 8 页文件名红细胞ABO血型（正反定型）、RhD鉴定标准化操作规程编制人审核人批准人批准日期修改日期签 字修改日期签 字复审日期签 字复审日期签 字红细胞ABO血型（正反定型）、RhD鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型与RhD血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据临床输血技术规范第十五条特制定本标准化操作规程。二、方法采用微柱凝胶凝集试验检测红细胞ABO血型（正反定型）与RhD血型。三、原理将人红细胞血型抗原与相应的抗体发生的凝集反应在微柱检测系统中进行。微柱检测

2、系统的上端为反应室，将葡萄聚糖凝胶作为凝集反应的介质装入检测卡微柱凝集检测管中，卡片上从左向右顺序第一支至第三支微管凝胶中均分别充以抗A、抗B、抗D单克隆抗体IgM试剂，检测人红细胞ABO、RhD抗原。第四支至第六支微管中只有凝胶，第四支微管作阴性对照管，第五支和第六支微管作为ABO血型反定型管。微柱凝集检测管中的凝胶的间隙起分子筛作用。凝集反应阳性的红细胞凝决留在微柱凝集检测管的上面或中间，反应阴性未凝集的红细胞将通过凝胶的间隙，沉积在微柱凝集检测管的底部。四、适用范围适用于输血前患者红细胞ABO血型（正反定型）确认与RhD血型复查。五、仪器设备普通离心机；血型血清学多用离心机；37免疫微柱

3、孵育器；六、试剂1、试剂名称：ABO、RhD血型试剂卡（单克隆抗体）；试剂生产厂家：长春博迅生物技术有限责任公司；批准文号：国药准字S20063037；包装规格：聚丙烯卡12检测人份/盒；贮藏条件；18-25避光保存；有效期：自检定合格之日起12个月；试剂单克隆抗体效价：抗A效价128；抗B效价128；抗D效价32；特异性试验合格。2、试剂名称：人ABO血型反定型用红细胞试剂盒；试剂生产厂家：上海血液生物医药有限公司；批准文号：国药准字S20060059；包装规格：A1、B、O试剂各1支， 10ml /支；贮藏条件；2-8保存，不能冰冻；有效期：自检定合格之日起2个月；试剂性能：外观、溶血率%

4、、特异性、抗原性均符合检定规程要求。七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。3、标本储存和运输：新鲜血28贮存时间不超过72小时。4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。八、操作步骤1、将被检者血样标本在3400r/min（1200g）离心5分钟；2、将微柱凝胶试剂卡进行标编号；3、待检者与标准红细胞稀释悬液的制备：采用塑料试管将被检者红细胞（10ul压积红细胞加入1.2ml生理盐水中）及标准红细胞（0.5ml标准红细胞试剂+3.0ml生理盐水）配制成0.50.8%红细胞生理盐水悬液。4

5、、将待检者红细胞稀释悬液分别加入第一至第四管中，每管50ul；5、将待检者血清分别加入第五支和第六支微管中，每管50ul；6、将A型和B型稀释标准红细胞悬液分别加入第五支和第六支微管中，每管50ul；7、即刻使用血型血清学多用离心机离心5分钟，2分钟900rpm，3分钟1500rpm，取出肉眼判定结果。8、结果判定：见表1。（1）阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面，为强阳性反应；复合物在胶中为弱阳性反应；愈靠近胶底部颗粒愈小，反应愈弱。（2）阴性结果：被检红细胞抗原无相应的抗体结合，

6、不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的底部。（3）对于红细胞RhD血型阴性的样本，应进一步作红细胞RhD阴性确认试验。表1 微柱凝胶凝集试验检测红细胞ABO、RhD血型结果鉴定血型抗A抗B抗D阴性对照A1细胞B细胞D阳性A+-+-+B-+-+-O-+-+AB+-D阴性A+-+B-+-+-O-+AB+-九、质量控制 1、对新进批号的试剂应作抗体效价验定。2、此检测项目应参加卫生部临床检验中心组织的室间质评，且成绩合格；3、每次做血型鉴定应做室内质量控制，且要求在控。4、严格执行查对制度，判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误等引起的差错。5、检测标本应在28保存留一周，以备复查。十、生物

7、参考区间 ABO血型：A型，B型，O型，AB型；RhD血型：阳性，阴性。十一、干扰因素1、冷凝集素：在恶性肿瘤或病原体感染后有时冷反应性自身抗体可异常增高造成溶血。2、自身抗体：红细胞被自身抗体强烈致敏后将干扰ABO定型，且自身抗体的存在会导致交叉配血不合。3、弱凝集：当患者红细胞上抗原异常可能会导致减弱的或缺少的凝集反应，如亚型红细胞抗原性较弱、新生儿、老年人及少数恶病质患者红细胞抗原形成不足或敏感性降低。4、细菌性凝集：常见有类B凝集，A型或O型病人因大肠杆菌O86感染，从而使红细胞上获得类B抗原，能与抗B抗体发生凝集，表现为B 或AB型。其不受温度影响，病情好转类B凝集即消失。另外红细胞

8、被细菌或细菌酶污染，红细胞上的T抗原被激活，与供血者中抗T抗体发生凝集。5、混合外观凝集现象：主要见于患者有近期输血史、骨髓移植、胎盘出血、白血病或其他原因如嵌合现象、A3亚型及Tn多凝集反应。 6、不规则抗体：可通过测定唾液中的血型物质来鉴定ABO血型。7、亚型： 亚型红细胞抗原性较弱易产生弱凝集；8、假凝集：常见于某些肝病、传染病、多发性骨髓瘤、霍金氏病、心肌梗塞、感染等病；9、血浆样本血型鉴定时应注意排除纤维蛋白原和补体的干扰；十二、注意事项1、检测标本必须正确有标识，其血液量、红细胞或血浆的质量符合实验要求和受血者当前的免疫学状态；2、输血前检查要求是输血前3天内的

9、血样（预防受血者在输血前的3个月之内可能有妊娠或输血等免疫史而可能产生不规则抗体）。3、标本血液离体后要求尽快送检，至检测完毕最长不能超过3d，每次检测后受血者和供血者的血标本应在28保存7天；4、每批次试剂均应进行效价测定，试剂使用前应仔细检查试剂的贮存条件是否符合要求、是否变质失效；5、注意离心力、温度红细胞浓度及抗原抗体的比例对试验结果的影响；6、患者使用的药物影响的处理：如果使用右旋糖酐、PVP等治疗，应注意将红细胞洗涤；如果受者使用肝素治疗，则应用硫酸鱼精蛋白对抗，使样本凝结；7、疑存在冷凝集素的病人标本的血型鉴定时应用37生理盐水洗涤3次再测定,并放37免疫微柱孵育器10分钟后观察

10、结果。8、疑存在自身抗体的病人标本的正定型血型鉴定时应用3745生理盐水洗涤红细胞三次或者用放散后的红细胞（放散方法需不破坏红细胞结构）；9、疑为亚型应通过亚型定型试剂来具体定型。鉴定血型时要注意正反定型的结合，加用抗H和抗A、B型标准血清、A2红细胞等检查唾液中的血型物质，必要时作吸收放散试验以确定。若血清中存在不规则抗体可在反定型用O细胞加以鉴定，有些亚型因为抗原的某些位点缺失，也会产生相对于缺失抗原位点的抗体，这些抗体的产生有助于亚型的判定。10、疑为红细胞被细菌或细菌酶污染产生的假凝集可置37免疫微柱孵育器10分钟后观察结果，此种凝集在4和37之间随着温度的升高凝集程度逐渐减弱，在37时最弱或消失。11、出现混合外观凝集的情况时一般要核对标本，必要时可重新抽取血样；12、红细胞出现弱凝集、假凝集应进行红细胞形态显微镜镜检，假凝集用生理盐水稀释或洗涤红细胞可使凝集消失。13、对于初筛为D阴性的供血者，要分别用不同批次的IgG抗D试剂间接抗人球法进行Rh阴性确认，供血者弱D型血作为D阳性血发放。14、受血者一般只做IgM抗D试验，若为阴性应输注D阴性血。15、注意血浆因抗凝不完全而出现小的纤维蛋白对凝集反应结果的判读