PRRSV变异株的分离鉴定及生物学特性的研究(精)

1、PRRSV 变异株的分离鉴定及生物学特性的研究英文题名 Isolation, Identification and Biological Characteristics of PorcineReproductive and Respiratory Syndrome Virus Anhui Strains 关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ; 变异株 ; 分离鉴定 ; 序列分析 ; 致病性 ; 英文关键词 PRRSV; Variant;Isolation and Identification; Sequence analysis; pathogenicity; 中文摘要 2006 年 6月以来,

2、安徽省部分地区及周边省市猪暴发了以发热、 厌食、 眼结膜炎等为主要 症状, 以高热、高发病率、高死亡率为主要特征的猪急性传染病 , 即所谓的“猪 高热病”。通过血清学和分子生物学检测表明 , 发病猪多为双重或三重以上感染 , 常见的混合感染病原为猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、圆环病毒 2 型、伪狂犬 病、链球菌等。病因调查结果显示 , 这次“猪高热病”流行是由猪繁殖与呼吸综 合征病毒（PRRSV 变异株引起高致病性蓝耳病。为追溯“猪高热病”猪群中 PRRSV 流行毒株的来源和变异原因,探索“猪高热病”预防与控制措施,本研究 对 20072008 年间分离的 PRRSV 流行毒株进行了鉴定、主要基因

3、序列测定、致 病性试验,分析了我省 PRRSV 流行株与国内外已发表的其它毒株间的遗传变异关 系。研究结果为探索我省“高热病”猪群中 PRRSV流行株的来源、分子流行病 学和变异情况等提供科学依据 , 为“猪高热病”的诊断和防制奠定理论基础。 1. 将采自舒城、定远、肥西、宿州、黄山等县市的不同猪场持续发热的 60 份发病 猪的肺脏、脾和淋巴结等组织病料用 RT-PCF 进行 PRRS 检测,筛选阳性样品经 处理后接种到 Marc-145 细胞, 能产生明显的细胞病变 , 电镜观 . 英文摘要 A severe pig disease designated as“high fever dise

4、ase , which spreadmore than 20 provinces in China in 2006, caused great economic losses. The infringedpigs experienced the common clinical symptoms such as reddening of the skin or apurple color in the ears, edema of the eyelids, conjunctivitis and extensive hemorrhagein pre-weaning piglets with hig

5、h incidence and mortality. In this study, the epidemicstrains of porcine reproductive and respiratory syndromevirus (PRRSV) were isolated and identified主要缩略语列表 8-12 文献综述 12-22174.2血清学诊断 17-195. PRRSV 疫苗研究进展19-215.1 灭活苗 19-205.2 弱毒疫苗205.3基因工程疫苗 20-216.结语与展望 21-22 1引言 22-23 2材料与方法 23-322.1 材料23-252.1.

6、1标准毒株和阳性血清 232.1.2 菌种和质粒 232.1.3 细胞 232.1.4 实验动物 232.1.5 病料 232.1.6 主要仪器 23-242.1.7主要试剂 242.1.8 溶液和培养基的配制 24-252.1.9 引物设计 252.2 方法 25-322.2.1细胞培养 252.2.2 病料的处理252.2.3病毒的分离 25-262.2.4 病毒的形态学观察 262.2.5 间接免疫荧光试验132. 病毒基因组结构 13-16中文摘要 4-6 ABSTRACT 6-71. PRRSV 的生物学特性 12-3. 病毒基因组的遗传与变异16-174. PRRSV 的诊断方法

7、17-194.1 病毒分离26 2.2.6 血凝试验 26 2.2.7 RT-PCR 鉴定26228 病毒总 RNA 的提取 26-272 29Nsp2 部分序列和 0RF5 的扩增与测定 27-302.2.10 病毒的增殖 302.2.11 病毒的半数细胞感染量测定 (TCID_(50) 30312.2.12 攻毒试验 312.2.13 血清中PRRSV 抗体的检测 312.2.14 病料中 PRRSV 勺检测312.2.15 石蜡切片的制作 312.2.16 鉴别诊断 31-32 3. 结果 32-443.1 病毒分离 323.2 分离株形态电镜观察 323.3 间接荧光试验 32-333

8、.4 血凝试验结果333.5 RT-PCR 鉴定结果 333.6 分离株 NSP2 高变区和 0RF5的 RT-PCR 扩增结果 33-343.7 重组质粒的连接 343.8 重组质粒的鉴定 34-353.9 序列分析结果 35-383.10 分离病毒的TCID50 测定结果 383.11 临床症状 38-393.12 剖检病变39-403.13 病理组织检查 40-423.14 抗体检测结果 42433.15 RT -PCR 鉴定结果 433.16 鉴别诊断结果 43-44 4.讨论与分析 44-464.1 对猪繁殖与呼吸综合征病毒安徽株的分离鉴定的讨论与分析 444.2 对 PRRSV 安

9、徽分离株的 NSP2 高变区和 0RF5 序列测定的讨论与分析 44-454.3 对猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株的致病性研究的讨论与分析45-46 结论 46-47 参考文献 47-51附录 51-57 致谢 57-582.2.2 病料的处理 252.2.3病毒的分离 25-262.2.4 病毒的形态学观察262.2.5间接免疫荧光试验 262.2.6血凝试验 262.2.7 RT-PCR 鉴定 262.2.8病毒总 RNA 的提取 26-272.2.9 Nsp2 部分序列和 0RF5 的扩增与测定 27-302.2.10 病毒的增殖 302.2.11病毒的半数细胞感染量测定 (TCID_(5

10、0) 30-312.2.12攻毒试验 312.2.13 血清中 PRRSV 抗体的检测312.2.14L 病料中 PRRSV 的检测 312.2.15石蜡切片的制作312.2.16 鉴别诊断 31-32 3. 结果 32-443.1病毒分离 323.2 分离株形态电镜观察323.3间接荧光试验 32-333.4 血凝试验结果 333.5 RT-PCR鉴定3.6 分离株 NSP2 高变区和 0RF5 的 RT-PCR 扩增结果 33-3.7 重组质粒的连接 343.9 序列分析结果 35-383.11 临床症状 38-393.13 病理组织检查 40-423.15 RT -PCR 鉴定结果 43

11、4.1 对猪繁殖与呼吸综合征病毒安徽株的分离鉴定4.2 对 PRRSV 安徽分离株的 NSP2 高变区和 0RF5 序4.3 对猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株的致病性研究的讨论与分析 45-46 结论 46-47 参考文献 47-51 附录 51-57 致 谢 57-582.2.2 病料的处理 252.2.3 病毒的分离 25-262.2.4 病毒的形态学观察结果 333435果 3840433.8 重组质粒的鉴定 343.10 分离病毒的 TCID50 测定结3.12 剖检病变 393.14 抗体检测结果 423.16 鉴别诊断结果 43-44 4.讨论与分析 44-46的讨论与分析 44 列

12、测定的讨论与分析 44-45262.2.5 间接免疫荧光试验 262.2.6 血凝试验 26 2.2.7 RT-PCR 鉴定 26 2.2.8 病毒 总 RNA 的提取 26-272.2.9 Nsp2 部分序列和 0RF5 的扩增与测定 27-302.2.10 病毒的增殖 302.2.11病毒的半数细胞感染量测定 (TCID_(50) 30-312.2.12 攻毒试验 312.2.13 血清中 PRRSV 抗体的检测312.2.14 病料中 PRRSV 的检测 312.2.15石蜡切片的制作 312.2.16 鉴别诊断 31-32 3. 结果 32443.1 病毒分离 323.2 分离株形态电镜观察 323.3间接荧光试验 32-333.4 血凝试验结果 333.5 RT-PCR 鉴定结果 333.6 分离株 NSP2 咼变区和 0RF5 的 RT-PCR 扩增结果 33-的讨论与分析 444.2 对 PRRSV 安徽分离株的 NSP2 高变区和 0RF5 序列测定的讨论与分析 44-454.3 对猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株的致病性研究的讨论与分析 45-46 结论 46-47 参考文献 47-51 附录 51-57 致 谢 57-58343.7