动物细胞工程ppt课件分享

1、动物细胞工程ppt(课件分享)作者：作者：dr.fengdr.feng动物细胞工程ppt(课件分享)2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)2动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体制备单克隆抗体制备细胞核移植细胞核移植动物细动物细胞工程胞工程技术技术动物细胞工程的基动物细胞工程的基础础2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)32020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)4动物细胞培养2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)5（一）、概念（一）、概念 是指从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，是指从动物机体内取出相关的组织，将它分

2、散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。（二）、原理（二）、原理细胞分裂增殖细胞分裂增殖2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)6（三）、过程（三）、过程幼龄动物幼龄动物剪碎组织剪碎组织原代细胞培养原代细胞培养取动物器官取动物器官和组织和组织细胞悬浮液细胞悬浮液传代细胞培养传代细胞培养胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理单个细胞单个细胞胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理单个细胞单个细胞2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)7细胞贴壁细胞贴壁:培养贴附性细胞时,细胞要能贴附于底物上才能生长繁殖.2020-12-24动物细胞工程pp

3、t(课件分享)8细胞接触抑制细胞接触抑制 细胞在贴壁生长过细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再和生长停止，数量不再增加。增加。2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)9有关概念有关概念 原代培养：原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。一般培养的从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。一般培养的第第1 1代细胞与传代细胞与传1010代以内的细胞称为原代细胞培养。代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶

4、中取出，配制成细胞悬浮液，分装传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)10归纳归纳过程过程取取 的组织、器官的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液 酶酶 贴满瓶壁的细胞贴满瓶壁的细胞单个细胞单个细胞加入加入 液液动物胚胎或幼龄动物动物胚胎或幼龄动物胰蛋白胰蛋白培养培养接触抑制接触抑制原代原代 培培养养( (分装前分装前) )1-10代细胞代细胞2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)11遗传物质遗传物质 改变改变原代细胞原代

5、细胞培养培养加加 液液4050代细胞代细胞(细胞株细胞株)未未遗传物质遗传物质 改变改变无限传代（细胞系）无限传代（细胞系）已已传代传代培养培养胰蛋白胰蛋白 酶酶 2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)12有关概念有关概念细胞株：细胞株：原代细胞一般传至原代细胞一般传至1010代左右细胞生长停滞，大部分细胞代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到衰老死亡，少数细胞存活到40504050代，这种传代细胞为细胞株。代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞系：细胞株传代至细胞株传代至5050代后又出现细胞生长停滞状态，只有部代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物

6、质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别：细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。特点，失去接触抑制，容易传代培养。2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)13思考题：思考题：1 1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？2 2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？、为什么培养前要将组织细

7、胞分散成单个细胞？因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖，且细胞不能与培养成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖，且细胞不能与培养液充分接触，不利于培养。液充分接触，不利于培养。2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)143、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？催化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋白质催化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋白质( (胶原蛋白等胶原蛋白等) )。4、细胞膜的主要成份是什么？、细

8、胞膜的主要成份是什么？蛋白质和磷脂蛋白质和磷脂5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？能能2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)156 6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？意什么问题呢？7 7、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？注意时间的控制注意时间的控制 不能，因为两者的最适不能，因为两者的最适phph不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适白酶的最适phph较接近较接近2020-

9、12-24动物细胞工程ppt(课件分享)161 1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境 保证细胞顺保证细胞顺利的生长增利的生长增殖殖 添加一定量的抗生素，定期更换培养液添加一定量的抗生素，定期更换培养液添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清等。清等。（四）、动物细胞培养的条件（四）、动物细胞培养的条件2 2、营养、营养2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)173 3、温度和、温度和phph 培养室中控制培养室中控制, ,使之达到使之达到36.5 36.5 0.5, 7.27.4 0.5, 7

10、.27.4培养箱中提供培养箱中提供o o2 2和和coco2 2（95%95%空气和空气和5% co5% co2 2 ）4 4、气体环境：、气体环境：2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)18植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目比较项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理细胞的细胞的 细胞细胞培养基特有成分培养基特有成分 、植物激素、植物激素葡萄糖、葡萄糖、 培养结果培养结果植物体植物体培养目的培养目的快速繁殖、培育无病毒植快速繁殖、培育无病毒植株株获得获得全能性全能性增殖增殖蔗糖蔗糖动物血清动物血清细胞株、细胞系细胞株、细胞

11、系细胞细胞, ,某些蛋白质某些蛋白质2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)19（五）、动物细胞培养技术的应用（五）、动物细胞培养技术的应用（3）细胞的生理、药理、病理研究）细胞的生理、药理、病理研究 （1） 培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植（2） 基因工程的受体细胞基因工程的受体细胞2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)20前景展望前景展望资料一：资料一：2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)21 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质。许多致畸、致癌物培养的动物细胞可以用于检测有毒物质。许多致畸、致癌物质加入培养液后，培养细胞会

12、发生染色体结构和数目的变异。根质加入培养液后，培养细胞会发生染色体结构和数目的变异。根据变异细胞占全部培养细胞的百分数，可以判断某种物质的毒性。据变异细胞占全部培养细胞的百分数，可以判断某种物质的毒性。现在动物细胞培养已经成为检测有毒物质的快速而灵敏的有效手现在动物细胞培养已经成为检测有毒物质的快速而灵敏的有效手段。段。 资料二：资料二：2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)22人工关节人工关节软骨再生软骨再生1.1.第一次手第一次手术术: : 从从病人病人关节软骨关节软骨中未中未 受力的部分，取出一片受力的部分，取出一片约为约为葡萄葡萄干干大小的大小的健康健康软软骨骨组织组织。2

13、.2.分分离软离软骨骨细胞并经细胞并经三星期的三星期的体体外外 培培养养，使，使细胞数细胞数增加增加约约10102020倍。倍。3.3.第二次手第二次手术术: : 清理清理软软骨受骨受损损的部分，的部分，从从下方骨下方骨头头部位取出一片部位取出一片约与伤约与伤口口大大小相同小相同的骨膜，的骨膜，缝缝在在伤伤口上方，再口上方，再将软将软骨骨细胞细胞注注射到骨膜下方。射到骨膜下方。资料三：资料三：结果结果: : 经过复健经过复健一年一年后后即可即可恢复恢复正常的生活。正常的生活。2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)23动物体细胞核移植技术和克隆动物2020-12-24动物细胞工程pp

14、t(课件分享)24（一）、动物细胞核移植的概念：（一）、动物细胞核移植的概念： 动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核, ,移入一个已经去掉移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中细胞核的卵母细胞中. .使其重组并发育成一个新的胚胎使其重组并发育成一个新的胚胎, ,这个新的这个新的胚胎最终发育为动物个体胚胎最终发育为动物个体. .克隆动物：用核移植的方法得到的动物。克隆动物：用核移植的方法得到的动物。2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)25动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的移入一个已经去掉

15、细胞核的卵母细胞中卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为这个新的胚胎最终发育为动物个体动物个体2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)26（二）、分类：（二）、分类：胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植：体细胞核移植体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复细胞分化程度低，恢复全能性容易全能性容易 细胞分化程度高，恢复细胞分化程度高，恢复全能性困难全能性困难克隆动物克隆动物:用核移植方法得到的动物用核移植方法得到的动物.克隆（克隆（clone）是指通过无性生殖而产生的遗传上均一的生物群，即具有）是指通过无性生殖而产生的遗传上均一的生物群，即具有完

16、全相同的遗传组成的一群细胞或者生物的个体。克隆在希腊语中是完全相同的遗传组成的一群细胞或者生物的个体。克隆在希腊语中是“小树小树枝叶枝叶”的意思，用以指无性增殖物。的意思，用以指无性增殖物。 2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)272020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)282020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)29去核卵去核卵细胞细胞供体供体细胞细胞电刺激使电刺激使两细胞融两细胞融合合重组细胞重组细胞重组胚胎重组胚胎新个体新个体代孕母牛代孕母牛c胚胎移植胚胎移植卵细卵细胞培胞培养养无性生殖无性生殖（三）、体细胞的核移植过程（三）、体细胞的核移植过程高产奶牛

17、高产奶牛a供体供体细胞细胞培养培养供卵奶牛供卵奶牛b2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)30（四）、体细胞核移植技术的应用前景（四）、体细胞核移植技术的应用前景 1、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程2、保护濒危物种、保护濒危物种3、生产医用蛋白质、生产医用蛋白质及组织器官的移植的供体及组织器官的移植的供体2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)31（五）、体细胞核移植技术存在的问题（五）、体细胞核移植技术存在的问题 1、克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚。、克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚。2、克隆技术效率低，畸形率高、死

18、亡率高、易出、克隆技术效率低，畸形率高、死亡率高、易出 现早衰等问题。现早衰等问题。3、生产克隆动物费用昂贵。、生产克隆动物费用昂贵。2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)32 2 2、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是 （ ） a a获得不死性的细胞获得不死性的细胞 b b1010代以内细胞代以内细胞 c c原代细胞原代细胞 d d传代细胞传代细胞1 1、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是 （ ） a.a.动物细胞融合动物细胞融合 b.b.单克隆抗体单克隆抗体 c.c.胚胎移植胚胎移植 d.d.动物细胞培养动

19、物细胞培养a ad d课堂反馈练习课堂反馈练习2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)333 3、在动物细胞培养的有关叙述中正确的是：（、在动物细胞培养的有关叙述中正确的是：（ ）a a、动物细胞培养的目的只是为了获得大量的细胞、动物细胞培养的目的只是为了获得大量的细胞 分泌蛋白分泌蛋白b b、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散c c、细胞的癌变发生在原代培养向传代培养的过渡、细胞的癌变发生在原代培养向传代培养的过渡 过程中过程中d d、培养至、培养至5050代后传代细胞遗传物质没有发生改变代后传代细胞遗传物质没有发生改变b b2020-12-

20、24动物细胞工程ppt(课件分享)344 4、一般说来，动物细胞体外培养需要满足以下条件（、一般说来，动物细胞体外培养需要满足以下条件（ ）无毒的环境无毒的环境 无菌的环境无菌的环境 培养基需要加入血清培养基需要加入血清 温度与动温度与动物体温相似物体温相似 需要需要o o2 2，不需要，不需要coco2 2 coco2 2能调节培养液能调节培养液phpha a、 b b、 c c、 d d、 d d2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)355 5、动物细胞培养的特点、动物细胞培养的特点 （ ）细胞贴壁细胞贴壁 有丝分裂有丝分裂 细胞分化细胞分化 接触抑制接触抑制 减数分裂减数分裂

21、 原原代培养一般传代培养一般传1 11010代代a a、 b b、c c、 d d、a a2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)366 6、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：（1 1）容器）容器a a中放置的是动物器官或组织。它一般取自中放置的是动物器官或组织。它一般取自_。（2 2）容器）容器a a中的动物器官或组织首先要进行的处理中的动物器官或组织首先要进行的处理是是 ，然后用，然后用 酶处理，这是为了使细胞分散酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是开来，这样做的目的是 。动物胚胎或幼龄动物动物胚胎或幼龄动

22、物剪碎剪碎胰蛋白胰蛋白使细胞与培养液充分接触，便于培养使细胞与培养液充分接触，便于培养2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)37（3 3）培养首先在）培养首先在b b瓶中进行，瓶中的培养基成分有瓶中进行，瓶中的培养基成分有 _等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第衰老死亡，这是培养到第 代，到这时的培养称为代，到这时的培养称为_ _ 。（4 4）为了把）为了把b b瓶中的细胞分装到瓶中的细胞分装到c c瓶中，用瓶中，用 处理，然后配置成处理，然后配置成 ，再分装。，再分装。 动物血清动物血清10原代培养原代培养胰蛋白酶胰蛋

23、白酶细胞悬浮液细胞悬浮液2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)382020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)392020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)40动物细胞融动物细胞融合合2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)41细胞细胞a细胞细胞b杂种细胞杂种细胞灭活的病毒灭活的病毒物理法物理法化学法化学法2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)42用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程细胞核细胞核病毒颗粒病毒颗粒细胞核细胞核2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)43细胞融合与融合诱导细胞融合物质细胞融合与融合

24、诱导细胞融合物质诱导剂：病毒、聚乙二醇诱导剂：病毒、聚乙二醇诱导细胞融合的病毒必须灭活。诱导细胞融合的病毒必须灭活。思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？2020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)442020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)452020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)462020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)472020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)482020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)492020-12-24动物细胞工程ppt(课件分享)50二、单克隆抗体二、单克隆抗体什么是抗体？什么是抗体？ 抗体是机体受抗原