生成丙酮酸和谷氨酸丙酮酸与24二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝

1、实验实验6丙氨酸转氨酶丙氨酸转氨酶(a1anine transaminase,alt)活性测定活性测定 alt: alanine transaminasegtp: glutamate pyruvate transaminase一、一、 目的要求目的要求了解血清了解血清altalt的测定原理及意义。的测定原理及意义。 二、二、 实验原理实验原理 基质液中丙氨酸和基质液中丙氨酸和酮戊二酸在一酮戊二酸在一定温度和时间内，经血清中定温度和时间内，经血清中altalt的作用，生的作用，生成丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸与成丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸与2,42,4二硝基二硝基苯肼作用，生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱苯肼作

2、用，生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显红棕色。根据显色的深浅反映性溶液中显红棕色。根据显色的深浅反映出血清中出血清中altalt活性的强弱。其反应式如下：活性的强弱。其反应式如下：ketoglutaratepyruvic acid glutamic acidpyruvic acid alaninealt红棕色红棕色三、操作步骤三、操作步骤取4只小试管按下表加入试剂：标准管标准管(d1)标准空白标准空白(d2) 测定管测定管 (d3)测定空白测定空白(d4)丙酮酸标准液丙酮酸标准液(100g/ml) 0.1000血清血清 000.10.1基质液基质液* 0.5 0.50.50ph7.4磷酸盐缓

3、磷酸盐缓冲液冲液 0 0.100置于置于37水浴或温箱中水浴或温箱中30min后取出后取出2.4-二硝基苯肼二硝基苯肼 0.5 0.5 0.50.5基质液基质液(ml) 0000.5 alt活性测定试剂加入方法活性测定试剂加入方法 control 210g pyruvateketoglutarateod1control 110g pyruvateod1-od2ketoglutarateod2d2x g pyruvateserumod3d1x g pyruvateod3-od4serumod4od1-od2od3-od410 g x g od1-od2od3-od410x (g) 四、结果与计算

4、四、结果与计算v本法所规定的本法所规定的alt活性单位的定义活性单位的定义是：是：v1ml血清在血清在37水浴中保温水浴中保温30min，与基，与基质液作用后产生质液作用后产生2.5g丙酮酸，称为一个丙酮酸，称为一个alt单位。单位。v计算时，须先算出计算时，须先算出0.1ml血清于血清于37下所下所产生丙酮酸的微克数产生丙酮酸的微克数,公式公式(1)。再根据其。再根据其单位定义换算为每毫升血清内单位定义换算为每毫升血清内alt活力活力单位单位,公式公式(2)。od1-od2od3-od410x (g) alt units per millilitre serum = pyruvic acid ( g ) 2.5 10.1本法本法alt正常值为正常值为240活力单位。活力单位。 五、应用意义五、应用意义valt广泛存在于组织细胞中，肝中特多。广泛存在于组织细胞中，肝中特多。当肝细胞损伤时，此酶即释放入血，血当肝细胞损伤时，此酶即释放入血，血中酶活性大大升高。临床上常用来测定中酶活性大大升高