气相色谱法测定去氧孕烯中残留溶剂

1、扬州工业职业技术学院2010 2011 学年第 二 学期毕业论文课题名称： 气相色谱法测定去氧孕烯中残留溶剂 设计时间： 2010年11月-2011年4月 系 部： 化学工程系 班 级： 0802化学制药 姓 名： 葛浩月 指导教师： 吴开均 ，龚爱琴 目录中文摘要3Abstract3一前言 41、甾体药物介绍42、去氧孕烯简介5二、实验部分51、仪器与试剂52、实验方法6（1） 测定条件6（2）溶液配制6三、结果与讨论6（1）专属性试验7（2） 最低检测限试验7（3） 工作曲线测定7（4） 加样回收率实验8（5） 精密度试验11（6） 去氧孕烯残留测定12四小结13五、参考文献13致谢14气

2、相色谱法测定去氧孕烯中残留溶剂葛浩月0802化学制药摘 要 建立了气相色谱法测定去氧孕烯中残留溶剂的方法。色谱柱为DB-624毛细管柱，柱温为程序升温，以氮气为载气，用氢火焰离子化检测器（FID）检测。在实验条件下，甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、四氢呋喃回收率分别为98.5、97.9、973、982、977，精密度分别为17、20、15、31、17。在去氧孕烯原料中只检测出了乙醇、丙酮。本法可快速、准确测定去氧孕烯中残留溶剂含量。关键词 甾体化合物 去氧孕烯 气相色谱法 溶剂测定Gas chromatography was developed for the determination of re

3、sidual oxygen pregnant to propylene solventGeHaoyue0802 pharmaceutical chemistryAbstract: Establish gas chromatography was developed for the determination to oxygen in the residual solvents pregnancy alkene method. Chromatographic column for DB - 624 capillary column, column temperature for the prog

4、ram, with nitrogen gas heating up for the carrier, with FID detector (FID) test. In experimental conditions, methanol, ethanol, acetone, are hexane, THF 97.95% respectively for 98.5%, 97.9%, respectively, nine 97.3%, 98.2%, respectively, the precision of 1.7%, 2.0%, 1.5%, 3.1%, 1.7%. In to oxygen in

5、 pregnancy ene raw material detected only the ethanol, acetone. Article can be used to quickly and accurately determination to oxygen pregnant residual solvents propylene content.Key words: Steroidal compounds, desogestrel, gas chromatography,determination一、前言1、甾体药物介绍 甾体化合物具有一个四环的（A、B、C、D）母核，这个母核像“田

6、”字，并且在C10和C13处各有一个角甲基，在C17处有一侧链，这样在母核上的三个侧链像“巛”字，“甾”字十分形象的表示了这类化合物的基本碳架（图1）。  图1 甾体化合物结构甾体说的就是类固醇类物质，通常指这一类的激素：肾上腺皮质激素、雄激素、雌激素，具有一定的作用。与非甾体类药物对应的一般说的是肾上腺皮质激素，各种名字以“松”结尾的药物，具有一定的抗炎作用。非甾体类药物主要是双氯芬酸类还有布洛芬类还有CO2抑制剂类。 一般，激素类的抗炎作用强，但存在水钠潴留、变虚胖、感染危险、骨质疏松等副作用。非甾体类抗炎作用弱，副作用主要是胃肠道反应，还有心血管疾病的风险。所谓非甾体

7、抗炎药是指不包括皮质激素在内的一大类具有抗炎、解热、镇痛作用的药物，如老药中的阿司匹林、保泰松、扑热息痛、消炎痛，其次有双氯灭痛、氯灭酸、安乃近、氨基比弗等，新近相继推出有萘普生、布洛芬、吡罗昔康、塞米昔布等等数十个药物应用于临床。这类药物虽有抗炎、解毒、镇痛方面有明显不同，如阿司匹林解热作用较强，而镇痛作用若，保泰松有抗炎解热作用，仅有微弱镇痛作用，扑热息痛只有解热作用，而无抗炎作用。 到目前为止，非甾体抗炎药仍然在骨关节炎的治疗中占主导地位。而甾体类抗炎药主要是指皮质激素类药物,因其有共同的结构特点,即它们都为甾体.。甾体类药物虽然有极好的疗效,但长期使用可引起水盐代谢和糖,脂肪、蛋白质代

8、谢的严重紊乱。2、去氧孕烯简介甾体药物是医药工业中的一个重要门类, 由于其结构复杂, 最初的研究和生产大多以天然甾体为原料, 采用半合成方法经结构改造进行合成。随着甾体药物新品种的不断开发, 受到日益紧张的甾体资源的限制, 甾体全合成方法的研究显得十分重要。经过多年研究, 目前已成功地合成了一系列全合成甾体药物, 3-酮基去氧孕烯( 3-ketodesogestrel)就是其中之一，结构式如图2所示。 图2 3-酮基去氧孕烯结构式3-酮基去氧孕烯，化学名: 17-乙炔基-11-亚甲基-18-甲基雌甾-4-烯-17-醇-3-酮,为第三代孕激素, 具有较弱的雄激素作用和促蛋白同化活性, 以及较强的

9、抗雌激素活性, 且能部分升高高密度脂蛋白, 有利于血脂代谢。去氧孕烯为口服强效孕激素，没有雄激素和雌激素活性副作用可有不规则出血，开始发生率较高，半年后减少，尚可见恶心、头痛、闭经、乳胀、乏力、抑郁等。严重肝功能障碍、血栓形成或栓塞、乳腺癌、子宫癌患者及哺乳期忌用。 实验证明，去氧孕烯孕激素活性较炔诺酮强18倍、较甲炔诺酮强1倍。最大特点是无雄激素作用，还可升高高密度脂蛋白(HDL)。目前, 利用它制造多相片、单孕素片等, 它的单根皮下埋植剂及阴道环正在进行临床试验, 反应良好。由于3-酮基去氧孕烯的生产过程比较复杂，中间经过十几道工序，使用的溶媒比较多，主要有甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、四氢呋

10、喃等。这些溶剂在药物中如果残留太多，不但会影响药物的质量，也会对人体产生伤害，因此有必要测定其在药物中的残留量，而去氧孕烯中溶剂残留量的测定相关文献似乎还没有报道过。本文采用气相色谱法测定了去氧孕烯中溶剂残留量。二、实验部分1、仪器与试剂安捷伦-6890N气相色谱仪，7694E顶空进样器，N2000工作站。甲醇，乙醇，丙酮，正己烷，四氢呋喃，二甲亚砜，所有试剂皆为色谱纯。去氧孕烯原料：江苏联环药业股份有限公司，批号：20060201，20060202，20060203。2、实验方法（1） 测定条件色谱柱：毛细管柱 DB-624，规格为 30m×0.53mm×3.0µ

11、;m；载气：N2 流速为3.5mL/min；柱温：程序升温， 50 保持8min，以30/min升温至150， 保持5min；进样器温度：140； 分流比：10:1； 进样体积1mL；7694E顶空进样器，顶空瓶加热温度90，进样环100，传输管线110，顶空瓶加热时间20min，进样时间1min，瓶压15psi， 顶空瓶体积10mL；FID检测器，温度为250，氢气流速为40mL/min，空气流速为400mL/min， 尾吹20mL/min；（2）溶液配制精密吸取甲醇63.0µL（相当于50mg），乙醇63.0µL（相当于50mg），丙酮63.0µL（相当于50

12、mg），分别置于3个事先装有少量二甲亚砜（DMSO）的50mL容量瓶中，用DMSO稀释到刻度，配置成3个相应的二甲亚砜溶液，再分别吸取各溶液5mL到3个50mL的容量瓶中，用DMSO稀释到刻度，配置成浓度均为100.0µg/mL的甲醇（K1），乙醇（K2），丙酮（K3）溶液。精密吸取正己烷76.0µL（相当于50mg）到50mL容量瓶中，用DMSO稀释到刻度，再吸稀释液1mL到100mL容量瓶中，用DMSO稀释到刻度，配置成浓度为10.0µg/mL正己烷溶液(K4)精密取四氢呋喃56.0µL（相当于50mg）到50mL容量瓶中，用DMSO稀释到刻度，吸稀

13、释液5mL到50mL容量瓶中，用DMSO稀释到刻度，配置成浓度100.0µg/mL 四氢呋喃溶液（K6）。三、结果与讨论1、专属性试验取溶液配制项下5个溶液及溶剂DMSO适量，在信噪比3条件下顶空进样分析，结果见图3。出样顺序：甲醇（RT=2.07），乙醇（RT=2.625），丙酮（RT=3.015），正己烷（RT=4.125），四氢呋喃（RT=5.813），DMSO（RT=12.072）。取K1K5溶液按1：1混合进样。5个成分之间分离度均2.0，且理论塔板数均大于10000，对称性好。2、最低检测限试验取溶液配制项下的各溶液逐级稀释，在信噪比大于3的条件下测定，测定结果见表1。由

14、表1可知，甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、四氢呋喃的最低检测限分别为0. 5、0.8、1.0、0.05、0.4µg/mL。表1 最低检测限测定结果溶剂最低检测限（µg/mL）甲醇0.5乙醇0.8丙酮1.0正己烷0.05四氢呋喃0.43、工作曲线测定精密吸取甲醇380.0µL（相当于300mg）、乙醇380.0µL（相当于300mg）、丙酮380.0µL（相当于300mg）、正己烷44.0µL（相当于29mg）、四氢呋喃81.0µL（相当于72mg），置同一个事先装有少量二甲亚砜的200mL容量瓶中，用DMSO稀释至刻度，配成含甲醇

15、1500µg/mL、乙醇1500µg/mL、丙酮1500µg/mL、正己烷145µg/mL、四氢呋喃360µg/mL的标准贮备液。分别精密吸取标准贮备液：1.00mL、2.00mL、 5.00mL、10.00mL、15.00mL、20.00mL到6个100mL的容量瓶中，用DMSO稀释到刻度，配成1#6#的6个标准溶液。取上述六个标准溶液分别进样，测定结果见表2、3、4、5、6、7、8。表2 甲醇工作曲线测定结果浓度（µg/mL）峰面积回归方程相关系数15.07013Y=525.5x-26870.999630.01354175.035

16、232150.073856225.0116056300.0155935表3 乙醇工作曲线测定结果浓度（µg/mL）峰面积回归方程相关系数15.09111Y=629.8x-1273 0.999930.01832375.044234150.092865225.0140279300.0188345表4 丙酮工作曲线测定结果浓度（µg/mL）峰面积回归方程相关系数15.043091Y=3153.7x-43970.999730.09045675.0229767150.0470686225.0706841300.0939988表5 正己烷工作曲线测定结果浓度（µg/mL）峰面

17、积回归方程相关系数1.4574923Y=78172.3x-57242R=0.99992.901665127.2549395414.50107517821.75163075529.002222723表6 四氢呋喃工作曲线测定结果浓度（µg/mL）峰面积回归方程相关系数3.613363Y=4007.8x-16470.999977.22784518.06876136.014286054.021502372.0286946上述结果可以看出：甲醇、乙醇、丙酮在浓度15.0 300.0µg/mL之间，四氢呋喃在浓度3.6 72.0µg/mL之间，正己烷在浓度1.45 29.0

18、µg/mL之间，线性关系良好，相关系数均大于0.9995。4、加样回收率实验精密称取供试品4份，每份500mg，分别置4个10mL容量瓶中，其中一份精密加入DMSO溶液溶解，作为空白检测溶液。其余的每份分别加入工作曲线测定项下的2#、4#、6#标准溶液溶解。空白样进样2次，空白溶液中测出乙醇（A=19838）、丙酮（A=1497），未测出甲醇、正己烷、四氢呋喃。再测定其余二份溶液，每份平行测定3次，将测定结果代入各自相对应的线性方程计算回收率，结果见表7、8、9、10、11。表7 甲醇加样回收率结果次数加入浓度（µg/mL）峰面积测定浓度（µg/mL）回收率%平均

19、回收率%RSD%130.01302629.9099.798.52.14230.01284129.5598.5330.01346230.75102.44150.073089144.1296.15150.074450146.7597.86150.072523143.3495.47300.0153475297.1799.18300.0154913299.231009300.0151409293.2597.7表8 乙醇加样回收率结果次数加入浓度（µg/mL）峰面积测定浓度（µg/mL）回收率%平均回收率%RSD%130.037487-1983830.12100.197.92.062

20、30.036838-1983829.0296.7330.037549-1983830.14100.54150.0108362-19838142.5395.15150.0111381-19838147.3698.26150.0108451-19838142.7395.17300.0206108-19838297.7899.28300.0205433-19838296.898.19300.0202020-19838291.2597.6表9 丙酮加样回收率结果次数加入浓度（µg/mL）峰面积测定浓度（µg/mL）回收率%平均回收率%RSD%130.09124129.8599.59

21、7.31.19230.08852828.9996.6330.08936729.2696.54150.0459936146.7697.85150.0459863146.7597.86150.0450016143.6194.77300.0923185293.6597.98300.0913334292.2297.99300.0904682287.7895.4表10 正己烷加样回收率次数加入浓度（µg/mL）峰面积测定浓度（µg/mL）回收率%平均回收率%RSD%12.91788683.02104.198.23.1422.91698252.9100.032.91712432.911

22、00.7414.5106112314.3198.7514.5104096314.596.9614.5102006513.7495.0729.0215732428.3397.7829.0207987827.3494.3929.0212820227.9696.6表11 四氢呋喃加样回收率次数加入浓度（µg/mL）峰面积测定浓度（µg/mL）回收率%平均回收率%RSD%17.2269777.1499.297.71.3927.2269827.1399.237.2269757.1499.243613838034.9597.153613885935.5697.463613598434.

23、3495.477228177270.6798.287228031270.3697.797227627569.3796.35、精密度试验取线性关系项下的5#溶液，连续进样6次，结果见表12。表12 精密度试验结果溶剂123456平均峰面积RSD%甲醇787217981676911773077621377080776841.71乙醇956349847895022977249436593575951232.00丙酮4839674899244845544752164731234735164800671.43正己烷11190001100368112217810628981044056105774710843873.14四氢呋喃1480431500051487001443431455221439121467691.726、去氧孕烯残留测定精密称取三个供试品各500mg到10mL西林瓶中，用DMSO溶解并稀释到刻度，分别吸取上述3个溶液各2.00mL到10mL顶空瓶中，加盖密封（每个批号各两个）。标准溶液峰面积，取精密度项下各溶剂峰面积，供试品残留按外标法即得，结果见表13。表13 去氧孕烯中残留溶剂测定结果批号浓度（g/mL）参数甲醇乙醇丙酮正己烷四氢呋喃200602010.050185峰面积平均值/（1）2