胶体金检测技术课件

1、免疫胶体金快速检测技术免疫胶体金快速检测技术农业农业部部饲饲料料质质量量监监督督检验测试检验测试中心（西安）中心（西安） 培训资料培训资料 主要内容主要内容 一、免疫胶体金技术的发展历史一、免疫胶体金技术的发展历史 二、胶体金检测卡的基本原理及构造二、胶体金检测卡的基本原理及构造 三、免疫胶体金层析法检测原理及应用三、免疫胶体金层析法检测原理及应用 四、四、-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍 五、常见问题分析与注意事项五、常见问题分析与注意事项 六、免疫胶体金技术的发展的方向六、免疫胶体金技术的发展的方向 培训资料培训资料一、免疫胶体金技术的发展史一、免疫胶

2、体金技术的发展史1.1.19391939年（英，植物）年（英，植物）KauscheKausche和和RuskaRuska把烟草叶病毒吸把烟草叶病毒吸附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。 2.2.19711971年（美，微生物）年（美，微生物）FaulkFaulk和和TaylorTaylor首先将兔抗沙门菌首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。 3.3.19741974年（奥）年（

3、奥）RomanoRomano等将胶体金标记在马抗人等将胶体金标记在马抗人IgGIgG上，上，实现了间接免疫金染色法。同年实现了间接免疫金染色法。同年BauerBauer等报道将胶体金标记等报道将胶体金标记在凝集素上的应用。在凝集素上的应用。培训资料培训资料4.4.19781978年年GeogheganGeoghegan等应用免疫金技术检测等应用免疫金技术检测B B淋巴淋巴细胞表面抗原。细胞表面抗原。5.5.19811981年年DanscherDanscher建立了银显影液增强光镜下金颗建立了银显影液增强光镜下金颗粒的免疫金银染色方法粒的免疫金银染色方法 （Immunogold-silver s

4、taining,IGSSImmunogold-silver staining,IGSS）。）。6 6.1986.1986年年FritzFritz（美，生物）等人在美，生物）等人在IGSSIGSS法基础上成法基础上成功地进行了彩色功地进行了彩色IGSSIGSS的染色法的染色法, ,使得检测结果更加鲜使得检测结果更加鲜艳夺目艳夺目这是免疫金检测技术诞生的一次历程碑！这是免疫金检测技术诞生的一次历程碑！培训资料培训资料二、二、 胶体金的概念、原理及结构胶体金的概念、原理及结构 1.1.胶体金概念及来源：胶体金概念及来源： 胶体金又称金溶胶，是由金胶体金又称金溶胶，是由金盐还原成金后形成的金颗粒悬浊液

5、。盐还原成金后形成的金颗粒悬浊液。 2. 2.胶体金颗粒结构：由一个基础金核即金原子与包围胶体金颗粒结构：由一个基础金核即金原子与包围在外的离子层构成，离子层为氯金酸负离子在外的离子层构成，离子层为氯金酸负离子（AuClAuCl2 2- -) )，外层为外层为HH+ +，分散在溶液中。呈球形，分散在溶液中。呈球形( (小颗粒小颗粒) )或椭圆形或椭圆形( (大颗粒大颗粒) )。培训资料培训资料图图1 金颗粒示意图金颗粒示意图 在溶液中金颗粒呈在溶液中金颗粒呈圆形圆形, ,表面带有负电表面带有负电荷荷, ,由于静电的排斥由于静电的排斥力力, ,使其在水中保稳使其在水中保稳定状态，形成稳定定状态，

6、形成稳定的胶体状态。的胶体状态。培训资料培训资料 3. 胶体金试纸条的构造胶体金试纸条的构造样品垫样品垫PVC底板底板层析方向层析方向胶体金垫胶体金垫测试线测试线 （T线）线）控制线（控制线（C线）线）NC膜（硝酸纤维素膜）膜（硝酸纤维素膜）吸水滤纸吸水滤纸培训资料培训资料 4.4.免疫层析法检测原理（双抗体夹心免疫层析法检测原理（双抗体夹心) ) 4.1 4.1（以（以HCGHCG检测为例）检测为例）培训资料培训资料4.2 4.2 免疫层析法检测原理（竞争抑制反应）免疫层析法检测原理（竞争抑制反应）（以吗啡检测为例）（以吗啡检测为例）培训资料培训资料4.3 4.3 免疫层析法检测的原理（应用

7、免疫层析法检测的原理（应用proteinAproteinA金标）金标）（以（以HIVHIV检测为例）检测为例）阴性阴性阳性阳性培训资料培训资料 克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇胶体金试纸条是胶体金层析克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇胶体金试纸条是胶体金层析法的应用法的应用 采用竞争抑制法，将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶采用竞争抑制法，将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记为抗体。以硝酸纤维素膜为载体，样本中的盐酸克伦颗粒，标记为抗体。以硝酸纤维素膜为载体，样本中的盐酸克伦特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制

8、了抗体和硝酸纤维素（制了抗体和硝酸纤维素（NCNC）膜检测线上盐酸克伦特罗）膜检测线上盐酸克伦特罗BSABSA偶联物偶联物（与盐酸克伦特罗的化学结构相似与盐酸克伦特罗的化学结构相似）的结合，使检测线不）的结合，使检测线不显颜色，结果为阳性。反之，检测线显红色，结果为阴性显颜色，结果为阳性。反之，检测线显红色，结果为阴性。 规定尿液中盐酸克伦特罗的胶体金免疫层析测定方法。适用于规定尿液中盐酸克伦特罗的胶体金免疫层析测定方法。适用于猪、牛尿液中盐酸克伦特罗的筛选，最低检测浓度为猪、牛尿液中盐酸克伦特罗的筛选，最低检测浓度为3ng/ml3ng/ml。培训资料培训资料 -结果判定依据结果判定依据 阴性

9、对照出现红色条带，阳性对照不出现红色条带，说阴性对照出现红色条带，阳性对照不出现红色条带，说明检测卡有效。明检测卡有效。 如阴性对照不出现红色条带，或阳性对照出现红色条带，如阴性对照不出现红色条带，或阳性对照出现红色条带，出现任何一种现象或两种同时出现，说明检测卡失效。出现任何一种现象或两种同时出现，说明检测卡失效。 待检尿样检测区出现红色条带为阴性待检尿样检测区出现红色条带为阴性 待检尿样检测区不出现红色条带为阳性待检尿样检测区不出现红色条带为阳性阳性结果阳性结果样品中可能含有样品中可能含有等于或高于等于或高于3ng/ml3ng/ml的盐酸克伦特罗。的盐酸克伦特罗。 培训资料培训资料 四、四

10、、- -激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例一适用范围：一适用范围： 主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要510510分钟左右，灵敏度为分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb)3 ng/ml(3ppb)。也就是说当。也就是说当尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml3 ng/ml时，检时，检测卡才

11、能检测到。测卡才能检测到。培训资料培训资料二二 、包装、包装 每个包装袋中包含盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测卡每个包装袋中包含盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测卡，滴管，滴管1 1个、干燥剂个、干燥剂1 1片。片。三、现场筛查步骤三、现场筛查步骤1 1在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡和待检样本溶液恢复至室温。卡和待检样本溶液恢复至室温。2 2从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内就从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内就地使用。地使用。培训资料培训资料3 3将检测卡平放，用移液器或滴管吸取尿液样品溶液，垂将检测卡平放，用移液

12、器或滴管吸取尿液样品溶液，垂直滴加直滴加3 3滴（约滴（约80ul80ul）于加样孔中，加样后开始计时。）于加样孔中，加样后开始计时。培训资料培训资料4 4结果应在结果应在510510分钟读取，其他时间判读无效，根据示意分钟读取，其他时间判读无效，根据示意图判定结果。图判定结果。培训资料培训资料A A、阴性（、阴性（- -）：）：C C、T T线均出现。表示样品中不含有克伦线均出现。表示样品中不含有克伦特罗或其深度低于检测限。特罗或其深度低于检测限。培训资料培训资料B B、阳性（、阳性（+ +）：检测）：检测T T线不出现，则表示样品中克伦特罗浓线不出现，则表示样品中克伦特罗浓度高于检测限。度

13、高于检测限。培训资料培训资料C C、无效：未出现质控、无效：未出现质控C C线，表明操作过程不正确或检测卡已线，表明操作过程不正确或检测卡已失效，重新使用新卡。失效，重新使用新卡。 培训资料培训资料 经试剂卡检测的阳性样品在未进行确正之前，被称为疑似经试剂卡检测的阳性样品在未进行确正之前，被称为疑似样品，必须进行确证后，才能准确判断，不能提前作结论。样品，必须进行确证后，才能准确判断，不能提前作结论。 因此，对于出现阳性结果的样品，应按因此，对于出现阳性结果的样品，应按官方抽样程序分官方抽样程序分瓶瓶封装样品，并于封装样品，并于0 -4保保存，尽快送到我中心进行确证检测。存，尽快送到我中心进行

14、确证检测。 培训资料培训资料 五、常见问题及注意事项五、常见问题及注意事项 1.1.使用前将检测卡和待检样本恢复至室温使用前将检测卡和待检样本恢复至室温 2. 2.保持干燥，避免受潮，打开包装请尽快使用保持干燥，避免受潮，打开包装请尽快使用 试纸条中的试纸条中的NCNC膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动，膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动，无法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性，无法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性，从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。因此，试纸条必须保持干燥，从包装袋中取出后要尽快使

15、用。因此，试纸条必须保持干燥，从包装袋中取出后要尽快使用。 3. 3.检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹 尿样一开始在尿样一开始在NCNC膜上泳动时，是利用毛细管作用，如膜上泳动时，是利用毛细管作用，如果风吹太阳晒，果风吹太阳晒，NCNC膜上的尿样蒸发后难以到达吸水纸的位膜上的尿样蒸发后难以到达吸水纸的位置，会产生假阳性结果，因此，检测时要避免阳光直射和电置，会产生假阳性结果，因此，检测时要避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹。风扇、空调的风直吹。 培训资料培训资料4.4.尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面 这主要是

16、人手掌的这主要是人手掌的汗液中有钾、钠离子存在，影响汗液中有钾、钠离子存在，影响NCNC膜上泳动时的毛细管作用。膜上泳动时的毛细管作用。5.5.尿样滴管不可混用，以免交叉污染尿样滴管不可混用，以免交叉污染 每一类检测卡的抗体每一类检测卡的抗体都具有独特的特异性选择，但性质相同或结构相似的样品组都具有独特的特异性选择，但性质相同或结构相似的样品组成会产生干扰。成会产生干扰。6.6.加样量为加样量为7070-80l-80l左右（垂直加三滴）左右（垂直加三滴） 如果加样量太大或太小，将会影响实验结果。如样品非常如果加样量太大或太小，将会影响实验结果。如样品非常粘稠，有可能导致样品爬不上去，此时可适当

17、多滴粘稠，有可能导致样品爬不上去，此时可适当多滴1212滴。滴。7.7.以以T T线的条带为观测点线的条带为观测点,C,C线为质量控质线线为质量控质线 由于动物个体的差异使尿样样本中的成分组成不同，检测由于动物个体的差异使尿样样本中的成分组成不同，检测时，有的检测线可能偏淡或颜色偏灰，但只要条带出现，就时，有的检测线可能偏淡或颜色偏灰，但只要条带出现，就可判定为阴性结果。可判定为阴性结果。培训资料培训资料 8.8. 如果尿样出现沉淀或浑浊物，请离心后或静置后再检测；如果尿样出现沉淀或浑浊物，请离心后或静置后再检测；9.9.试纸条应常温保存，防止温度过高或过低试纸条应常温保存，防止温度过高或过低 放在冰箱中要防止温度过低，检测卡受潮，一般风泠冰箱放在冰箱中要防止温度过低，检测卡受潮，一般风泠冰箱最好，温度控制在最好，温度控制在8 8左右较为理想。避免在炎热高湿的环境左右较为理想。避免在炎热高湿的环境中保存。中保存。10.10.阳性疑似样品应在阳性疑似样品应在0 0 -4-4冷冻保存冷冻保存 冷藏和常温条件下，冷藏和常温条件下，尿中的瘦肉精在尿酸和酶的作用下易发生降解，含量会大幅下尿中的瘦肉精在尿酸和酶的作用下易发生降解，含量会大幅下降，表出现最为突出的是盐酸克伦特罗和莱克多巴胺，因此需降，表出现最为突出的是盐酸克伦特罗和莱克多巴胺，因此需确证的尿样必须冷冻保存