实验室病原微生物危害评估报告

1、综合实验室质量管理体系文件实验室病原微生物危害评估报告第1版生效日期：2016年08月02日xx市疾病预防控制中心综合实验室目 录第一章 综合实验室实验活动生物危害评估报告1第二章 结核分枝杆菌的生物危害评估报告7第三章 金黄色葡萄球菌的生物危害评估报告12第四章 副溶血性弧菌的生物危害评估报告15第五章 致泻大肠埃希菌的生物危害评估报告17第六章 伤寒沙门氏菌的生物危害评估报告19第七章 志贺氏菌的生物危害评估报告22第八章 蜡样芽胞杆菌的生物危害评估报告24第九章 单核增生李斯特菌的危害评估报告28第十章 流感病毒的危害评估报告31第十一章 禽流感病毒的危害评估报告33第十二章 肠道病毒7

2、1型的危害评估报告36第十三章 麻疹病毒的生物危害评估报告39第十四章 人类免疫缺陷病毒hiv的生物危害评估报告41第十五章 乙型脑炎病毒的生物危害评估报告43第一章 综合实验室实验活动生物危害评估报告为保证实验室工作人员在工作中不被危害性生物及物品所侵害，保证危害性物品不外泄，对实验室工作环境进行评估，以鉴定生物安全防护等级，保证生物安全。一、危害程度分类及生物安全防护水平评估生物源危害主要是由各种检验标本中的微生物，尤其是病原微生物引起的，包括细菌、病毒、寄生虫等，具有潜在危险性，可能引起实验室感染；微生物室还进行一定数量的各种条件致病性细菌及真菌的分离培养工作，工作过程存在病原微生物对实

3、验人员、环境污染的风险；除之以外实验室还存在触电、火灾、化学品腐蚀、偷盗等危险。根据实验室生物安全通用要求，本实验室不涉及人间传染的病原微生物名录中高致病性微生物的分离培养及高致病性微生物的菌、毒种的保藏，实验室采用一定防护措施就能控制感染或防范灾害，或者对相应病原体存在有效的免疫方法。评估我实验室生物安全防护水平按二级实验室（bsl-2）生物安全要求。二、实验人员和实验室安全防护的一般要求1.吸烟危害评估及防护（1）实验室工作区内绝对禁止吸烟；（2）点燃的香烟是易燃液体的潜在火种；（3）香烟、雪茄或烟斗都是传染细菌和接触毒物的途径。2. 实验区内食用食物、饮料及其它危害评估及防护（1）实验工

4、作区内不得有食物、饮料及存在“手口”接触可能的其它物质（2）实验室工作区内的冰箱禁止存放食物。专用存放食物的冰箱应放置在允许进食、喝水的休息区内。3.使用化妆品危害评估及防护实验工作区内禁止使用化妆品进行化妆，但允许并建议经常洗手的实验人员使用护手霜。4. 实验中眼睛和面部的风险评估及防护（1）处理腐蚀性或毒性物质时，须使用安全镜、面罩或其它保护眼睛和面部的防护用品。（2）工作人员在实验室的危险区内不要佩戴隐形眼镜，除非同时使用护目镜或面罩。（3）使用、处理能够通过粘膜和皮肤感染的试剂，或有可能发生试剂溅溢的情况时，必须佩带护目镜、面罩或面具式呼吸器。5. 实验中服装和个人防护装备的一般要求（

5、1）应穿着符合实验室工作需要的服装，工作服应干净、整洁。当工作中有危险物喷溅到身上的可能时，应使用一次性塑料围裙或防渗外罩。有时还需要佩戴其它防护装备如：手套、护目镜、披肩或面罩等。（2）采血员和其他需要接触病员的工作人员，在接触病员时需穿实验服或工作服。（3）个人防护服装应定期更换以保持清洁，遇被危险物品严重污染，则应立即更换。（4）不得在实验室内设值班床，严禁在实验室内住宿。6. 实验中足部防护的一般要求在工作区内，应穿舒适、防滑、并能保护整个脚面的鞋。在有可能发生液体溅溢的工作岗位，可加套一次性防渗漏鞋套。帆布鞋可吸收化学物品和有传染性的液体，所以最好穿皮革或其它防渗漏的合成材料的鞋。7

6、. 实验中头发和饰物的风险评估及防护留长发的工作人员应将头发盘在脑后，以防止头发接触到被污染物和避免人体脱屑落入工作区。头发不得垂肩，应与离心机、切片机等正在运转的器械保持一定距离8. 实验中胡须的风险评估及防护蓄有胡须的男性工作人员必须遵守上项（7）的规定。9.洗手的要求实验室工作人员在脱下手套后、离开实验室前、接触患者前后、以及在进食或吸烟前都应该洗手。接触血液、体液或其它污染物时，应立即洗手。10.用口移液的危害评估及防护用口液移可导致多种病原体的实验室感染。所有实验室操作禁止用口液移，应使用助吸器具。11.锐利物品的危害评估及防护谨慎处理针头、解剖刀、和碎玻璃等锐利物品。使用后的针具不

7、要折断、弯曲、破损、重复使用或用手重装在针管上。一次性注射器上的针头用后不要取下。锐利物品应立即放置在专用锐器盒内，在完全装满之前或48小时之内更换。12.隔离措施的要求接触患者时，实验室工作人员应遵守医院的隔离措施。13.工作环境的要求（1）“清洁”区和“非清洁”区根据实验室的具体工作情况由主任选择并确定“清洁”和“非清洁”工作区，在清洁区和非清洁区之间设“缓冲室”。被指定为“清洁”的区域，则应努力保持清洁，如采取预防措施，防止电话、视频显示器终端、键盘、门柄及其它经常被手或手上的手套触摸的物品的污染，要求工作人员在触摸设备（如计算机键盘及电话的保护罩等）前取下手套，制定仪器设备和工作面的常

8、规消毒和清洁制度和对严重污染的紧急处理措施办法。被指定为“非清洁”的区域，允许戴手套接触所有物品（如电话、门柄、计算机终端和其它物品），所有这些物品的表面都认为是不清洁的。未戴手套的人员如果使用该区域内的电话、计算机终端或其它设备，应该戴上手套，或在使用后立即彻底洗手。“清洁”和“非清洁”区都应保持整洁。实验台至少应每天清洁、消毒一次，如有必要可以多次清洗、消毒。在处理溅溢的样品或严重污染的工作面时，应戴上手套和其它个人防护装备、使用相应合适的清洁剂清除所有的溅溢物。（2）冰箱、冷冻柜、水浴和离心机应该定期清洗和消毒（时间由实验室主任来决定），在发生严重污染后应立即进行清洗和消毒。进行清洗、消

9、毒时要戴上手套，穿上工作服或其它合适的防护服。（3）外衣：外衣（实验服、工作服、和围裙）应悬挂在远离散热器、蒸汽管道、供暖装置、以及有明火的地方，不要挂在压缩气瓶或灭火器上，也不要挂在门的玻璃隔板上，妨碍视线。“清洁”的和“非清洁”的个人防护服要分开存放。（4）垃圾处理：每天至少清理垃圾一次。（5）装饰：不得在电灯、灯座或仪器上进行装饰，更不要使用电子装饰物、蜡烛、圣诞树等有引起火灾危险的装饰品。（6）为便于清洁消毒，实验室内不应有织物装饰的用具或椅子。（7）个人物品：实验工作区不得存放个人物品，如钱包、外套、皮靴、咖啡杯、运动服、预包装的食品和药品等。（8）实验室内应配备应急设备，如应急洗眼

10、装置，酒精等消毒用品。（9）实验室应安装非手触式洗手装置。（10）实验室内应安装防蚊蝇装置，应定期投撒灭蟑螂、老鼠的药物。（11）用后的废弃物品：实验工作区内的用后废弃物品存量不要太大。具危险性的液体如酸或碱性液体应放在视平线以下。较大的废弃物容器应靠近地面存放。（12）出口通路：实验室的出口和通道必须保持畅通无阻，不准堆放物品、垃圾、装置、或设备。安全门必须保持畅通，不得堵塞。注意：无论任何时间、何种原因都不得阻塞通往灭火器、火警箱、防火毯、安全淋浴或出口的道路。14.使用玻璃器具的危害评估及防护操作玻璃器具时应遵循下述安全规则：（1）不使用破裂或有缺口的玻璃器具。（2）不要用猛力取下玻璃试

11、管上的塞子，粘紧的试管可用刀切开分离。（3）接触过传染性物的玻璃器具，清洗之前，应先行消毒。（4）破裂的玻璃器具和玻璃碎片应丢弃在有专门标记的、单独的、不易刺破的容器里。（5）高热操作玻璃器具时应戴隔热手套。（6）在不影响实验质量的前提下，应尽量减少使用玻璃器具。15. 使用离心机的危害评估及防护感染途径危害评估感染途径危害评估感染途径危害评估皮肤极少粘膜（眼结膜）可能呼吸道可能消化道（经手-口）极少经血（针刺伤、切割伤）极少经血（虫媒介）极少（1）气溶胶：离心过程中应控制气溶胶的产生在最低水平。（2）操作：离心机只有在盖好盖板后，才能启动。（3）传染性物品：所有能够产生气溶胶进行播散的生物制

12、品或标本，都应使用密封的离心管，并在盖紧的离心头或转头中进行。（4）为防止气溶胶飞溢，应在离心停止30分钟后打开离心物。（5）清洗：按照消毒隔离制度要求清洗离心机。（6）平衡：离心时应保持合适的平衡，以保证离心的顺利进行。16采集血样的危害评估及防护感染途径危害评估感染途径危害评估感染途径危害评估皮肤极少粘膜（眼结膜）极少呼吸道可能消化道（经手-口）极少经血（针刺伤、切割伤）可能经血（虫媒介）极少盗窃可能化学腐蚀极少放射无（1）每天早晨用500mg/l的”84”消毒液擦拭抽血台面及其它物表，并开紫外灯消毒至少30分钟，并做好记录。（2）工人每天早晨更换消毒液，包括浸泡锐器、止血带的消毒液和手消

13、毒液。（3）工作人员必须穿工作服，戴好口罩、帽子、和手套。（4）使用合格的一次性用品。严禁使用包装破损，超过有效期的一次性用品。（5）严格执行无菌技术操作规程、静脉采血必须一人一针一管一巾一带。微量采血应做到一人一针一管一片，对每位病人操作前洗手或手消毒。（6）无菌物品如棉球需每天更换，开启后使用不得超过24小时。（7）工作人员需对锐器如采血针采取高度预防措施，用过的采血针需浸泡在含有消毒液的厚壁容器中。17. 标本(血清、血浆、全血、尿)上检验分析仪检测过程的危害评估及防护感染途径危害评估感染途径危害评估感染途径危害评估皮肤极少粘膜（眼结膜）可能呼吸道可能消化道（经手-口）极少经血（针刺伤、

14、切割伤）极少经血（虫媒介）极少盗窃可能化学腐蚀无放射无（1）为了避免液滴和气溶胶和扩散，实验室仪器加样、加液，清洗等过程应在封闭罩内进行的。（2）实验中使后的比色盘，反应杯等废弃物应当收集在封闭的容器内，集中处置。（3）在每一步完成后应根据操作指南对对仪器进行消毒。血液、体液污染物表时，应立即消毒。（4）工作人员要戴手套进行操作。18. 标本(血清、血浆、全血、尿、粪)手工检测过程的危害评估及防护感染途径危害评估感染途径危害评估感染途径危害评估皮肤可能粘膜（眼结膜）可能呼吸道可能消化道（经手-口）可能经血（针刺伤、切割伤）可能经血（虫媒介）极少盗窃可能化学腐蚀可能放射无（1）每天早晨做好实验室

15、的清洁消毒工作。（2）工作人员要戴口罩、手套进行操作。（3）实验中使用的竹签用后要用1000mg/l“84”消毒液浸泡。（4）废弃的标本连同试管、盖帽要用1000mg /l“84”消毒液浸泡，由工人统一清洁后进行无害化处理。（5）实验中使用的吸头、一次性塑料杯用后要用1000mg/l“84”消毒液浸泡。（6）标本污染物表时，应立即消毒。（7）离心时，发生试管破裂或标本溅出，由操作者负责用有效消毒剂对离心机内部进行及时消毒处置。19微生物分离鉴定药敏试验及基因扩增试验活动的危害评估及防护感染途径危害评估感染途径危害评估感染途径危害评估皮肤可能粘膜（眼结膜）可能呼吸道可能消化道（经手-口）可能经血

16、（针刺伤、切割伤）可能经血（虫媒介）可能盗窃可能化学腐蚀极少放射无（1）每天早晨开紫外灯消毒空气至少30分钟，同时做好各物表、仪器的清洁消毒工作。（2）实验人员要戴手套、帽子进行操作。当估计会出现微生物和危险物溅出时要戴好眼罩或面罩。（3）操作中使用的接种环、镊子等金属物品要在酒精灯火焰上烧灼灭菌。（4）可能产生致病性微生物气溶胶或出现溅出的操作如涂片、接种时，应在生物安全柜内操作，并使用个体防护设备。（5）实验室内的各种标本、菌种、培养基和其它废弃物在运出实验室前必须灭活（高压、浸泡），需运出实验室灭活的物品必须放在专用的密闭容器中。（6）操作过程中发生菌种污染物表时，应马上采取措施进行物表

17、消毒。（7）当发生致病性微生物气溶胶污染时，应马上进行人员疏散，通知负责人到现场进行指导消毒。（8）对菌种的保存应严格遵守菌种保存制度，严禁擅自保存各种国家法定传染病菌株或毒株。（9）实验人员离开实验室前要去除手套，确认无污染或污染已排除，后方可洗手离去。（10）微生物、pcr实验室要设置纱窗、挡鼠板。三、特定实验活动危害评估见以下章节之各种病原体的危害评估四、工作人员素质本实验室共有技术人员10名，其中申请进入bsl-2实验室10名。硕士学位3名，5名曾经从事微生物学实验，5名曾经从事无菌实验室活动经历，10名技术人员学习过生物安全手册并通过定期培训及考核成绩合格，经体检无现患严重疾病，本实

18、验室无其他患传染性疾病的技术人员，健康状态良好。五、评估结论本次评估本实验室共14项可能潜在危险的实验活动，在实验操作实验施过程中在无控制措施情况下可能产生的高危害度2项，中度12项，低度0项；对危害发生的可能性分析，实验危害较大可能发生的有0项，可能发生2项，较少可能发生12项；这些危害造成高度严重后果的2项，后果严重性中度的12项，后果严重性低度的0项。根据拟采取的预防控制措施后依然存在的残留风险为高度0项，中度0项，低度危害12项。评 估：xx市疾病预防控制中心综合实验室评估人：审 核：xx市疾病预防控制中心生物安全管理委员会审核人： 2016年8月02日47第二章 结核分枝杆菌的生物危

19、害评估报告结核病是由结核分枝杆菌（偶尔可由牛型或非洲型分枝杆菌）引起的一种细菌性疾病。结核病可累及全身各个器官，但以肺结核最为常见。该病具有传染性强，散播面广，不分地域均可发生。结核病可由呼吸道、消化道、皮肤等途径感染，但其主要传播途径是以空气为传播因子的呼吸道传染，而排菌的肺结核病人传染性更大，是传播感染的主要传染源。1. 传播途径呼吸道感染（respirator tract infection）是肺结核的主要传染途径（routes of infection），飞沬传染（droplet infection）为最常见的方式。传染源主要是排菌的肺结核患者（尤其是痰涂片阳性未经治疗者）。飞沬核（d

20、roplet nuclei） 10m时可被吸人呼吸道，健康人可因吸入患者咳嗽、打喷嚏时喷出的带菌飞沫而受感染。 2. 危害程度分级微生物按其是否致病、致病力强弱、危害人体的严重性、传染性的大小、临近人群的抵抗力、有无免疫制剂和特效治疗药物等综合评价，可分为四个不同的危害等级。结核分枝杆菌属于3级危险。3级危险（对个体具有极大危害，对群体具有较大的危害性）：指有特殊危险的致病菌。感染后症状较重，并可能危及生命，或者缺乏有效的预防方法、发病后不易治疗的微生物。3. 实验室感染的原因及预防（一）技术操作可能导致的感染及其预防措施。1. 接种：应使用无弹力的铂丝接种环，结核菌接种后接种环火焰灭菌易崩散

21、，酒精灯烧灼时要特别注意。2. 混匀：吸管吸吹菌液时不要产生气泡，应沿容器壁排出。3. 研磨：最好使用组织研磨器，乳钵易产生气溶胶。4. 移液：吸管上端的棉花松紧要适度，吸液时要从管底吸取，吹出时要轻缓，不要全部吹净，以免产生气泡，形成气溶胶。5. 开封：要避免压力和气流的急剧变化。6. 离心：离心管套底垫要完好，使用匹配的管、套、离心头，加盖。7. 注射：做好个人防护，正确使用注射器。8. 搬运：室内移动要避免滑落，移出室外要有坚实密闭的外包装。（二）技术保障1. 双人原则，不允许单人操作1、2类病原。2. 入口处应有危险警示标识，并标明所操作的微生物的种类。3. 培训考核上岗，掌握相关技术

22、操作要领，熟悉规章制度，适应工作环境。4. 完备的管理措施，技术操作规范。5. 良好的工作行为可降低生物危害风险。4. 实验室中的分枝杆菌及分枝杆菌气溶胶结核病实验室工作人员，在分枝杆菌检验过程中，会接触到各种潜在感染源标本和各种危险物，特别是许多操作易产生分枝杆菌气溶胶。含有结核分枝杆菌的微滴核（1-5微米）通过呼吸进入人体肺泡，可以黏附在肺泡内生长繁殖。因此，首先要对实验室中生物危险物产生的途径和存在的地点有充分的认识，以便明确生物安全防护的环节。(一) 分枝杆菌存在的地点1、各种临床标本，通常是痰，胃或支气管灌洗液、脑脊液、尿液等。2、被污染的操作台、器械、仪器、试剂等。3、收集的结核分

23、枝杆菌、非结核分枝杆菌菌株等。4、细菌学实验室的部分区域。(二) 产生分枝杆菌气溶胶1、实验室内可疑肺结核患者痰标本的采集。2、样本的制备和涂片的火焰固定。3、分离培养或接种培养物。4、用火焰烧灼接种环。5、使用移液器混合培养物。6、培养管或培养瓶中含有培养物的滴落物。7、溢出的分枝杆菌悬浮液。8、高速混合含有分枝杆菌的液体。9、转移液态培养物和上清液，或培养液、上清液的倾倒。10、离心过程中离心管的破碎。11、用做原代培养所需的组织匀浆。5. 安全防护(一) 严格遵守实验室安全操作规程，任何时侯都要警惕分枝杆菌气溶胶的产生。实验室的技术人员必须经过生物安全培训后方可上岗。(二) 实验室应严格

24、限制非实验人员进入，减少实验室内外交叉生物污染。完成实验工作离开实验室，要关好门窗。(三) 进入实验室应避免携带非必需物品。(四) 进入实验室，工作人员应穿着工作服，操作时应穿戴防护隔离衣、口罩、帽子和手套，长发者应将头发装束在帽子内。(五) 实验过程中绝对禁止吸烟、饮食等，不要以手抚头面部等。(六) 试验前须开启紫外线灯对实验室和操作区域进行照射消毒1小时以上；试验结束后，立即开启紫外灯进行照射消毒2小时以上。(七) 任何试验的开始和结束后，操作人员要用70%酒精浸泡双手或仔细擦后，用清洁剂或清水洗净。(八) 每次试验结束后，必须清理好实验台，并用70%酒精液或3-5%石炭酸擦洗实验台面。(

25、九) 实验室中的生物危险品要根据检查项目和性质不同，局限在相应的试验区间，不得随意将其带到其它的实验室。(十) 实验室内任何微生物的样本，废弃物都必须经高温高压灭菌后，方可按一般垃圾处理。6. 安全保障(一) 首先各级实验室应按等级要求完善实验设施，如简易安全柜内的抽气排风功能、紫外灯消毒功能，生物安全柜维护与除菌滤膜定期更换等。(二) 实验室采集病人痰标本时应在户外进行，避免因病人咳漱造成室内气溶胶污染。(三) 普通实验室应注意气流方向，实验过程中尽量避免强气流变化而产生气溶胶（如涂片、染色过程中）。(四) 细菌的分离培养、菌种开封、转种、研磨、稀释等操作，各级实验室均应在简易安全柜或生物安

26、全柜中进行。(五) 使用接种环进行操作时，接种环应在工作灯的内焰中燃烧，以避免菌液或菌块飞溅。(六) 稀释菌液时，吸管、针管要缓慢插入试管或烧瓶底部，小心操作避免产生气泡或气溶胶。 (七) 使用注射器加样时，用过的针头切勿再重新入套或拔开注射器与针头，应直接放入锐器收集器，以免划破皮肤造成接种感染。(八) 菌株库要设专人管理，并按照国家微生物菌毒种管理办法执行。(九) 进行毒菌操作过程中，不要穿戴巳经污染的防护性手套触摸门柄、仪器或毒菌区以外区域，避免由于粗心扩大污染范围。(十) 试验结束后，操作过程中所有可能与生物危险物接触或被污染的试验器械和物品，能够高压消毒的必须高压消毒，不能进行高压消

27、毒的设备、仪器，应使用有效的消毒剂擦洗后再以紫外灯近距离长时间消毒。 (十一) 实验中发生意外污染情况，应立即通知主管人员并做好处理污染物和相应区域的准备，不得擅自采用其它禁止的方法进行消毒处理。(十二) 实验室主任应制定规章和程序，只有告知潜在风险并符合进入实验室特殊要求(如，经过免疫接种)的人，才能进入实验室。(十三) 操作致病性微生物时，实验室入口处应贴有生物危险标志，并显示以下信息：有关病原、生物安全级别、免疫接种要求、研究人员姓名、电话号码、在实验室中必须佩带的个人防护设施、出实验室所要求的程序。(十四) 实验室主任为实验室人员特别制定的标准操作程序或生物安全手册中，应包括生物安全程

28、序。对于有特殊风险的人员，要求阅读并在工作及程序上遵照执行。(十五) 实验室主任保证实验及其辅助人员接受适当的培训，包括和工作有关的可能存在的风险、防止暴露的必要措施和暴露评估程序。(十六) 实验室所用任何个人防护装备应符合国家有关标准的要求。实验室应确保具备足够的有适当防护水平的清洁防护服供使用。还应穿戴其它的个人防护装备，如手套、防护镜、面具、头部面部保护罩等。(十七) 处理样本的过程中易产生高危害气溶胶时，要求同时使用适当的个人防护装备、生物安全柜和/或其它物理防护设备。如可产生含生物因子的气溶胶，应在适当的生物安全柜中操作。(十八) 实验用鞋应舒适，鞋底防滑。应用皮制或合成材料的不渗液

29、体的鞋类。在从事可能出现漏出的工作时可穿一次性防水鞋套。在实验室的特殊区域（例如有防静电要求的区域）或bsl-3和bsl-4实验室要求使用专用鞋（例如一次性或橡胶靴子）。7. 结核病实验室废物处理 一、实验室废弃物处理的目的：(一) 将操作、收集、运输、处理及处置废弃物的危险减至最小；(二) 将实验室废弃物对环境的有害作用减至最小。二、实验室污物处理及消毒(一) 实验室含有生物危险物的临床标本及被污染的一次性用品，试验完成后，应在操作台或实验区域内以紫外灯近距离照射消毒 2小时以上，再经高压消毒后方可丢弃或焚烧。 (二) 可重复使用的实验用品及器材，完成实验后，应在操作台或实验区域内经紫外灯近

30、距离照射消毒2小时以上后，再交有关人员进行高压消毒和煮沸洗刷。(三) 实验用的试管、吸管、注射器，须装在加盖不漏的容器内，经高压灭菌后取出。 (四) 培养物或实验室垃圾，在丢弃前必须经高压消毒和紫外灯近距离长时间照射处理。不允许积存垃圾和实验室废弃物。已装满的容器应定期运走。在去污染或最终处置之前，应存放在指定的安全地方，通常在实验室区内。(五) 实验室废弃物应置于适当的密封且防漏容器中安全运出实验室。有害气体、气溶胶、污水、废液应经适当的无害化处理后排放，应符合国家相关的要求。 (六)实验过程中，如标本或含标本的前消化处理液被打翻污染了操作台或地面，应以吸满70%酒精的卫生纸覆盖污染区，15

31、分钟以后卫生纸方可移去。 (七) 实验室内未经消毒的污水，禁止直接排入公共排水系统，更不允许混入居民生活垃圾。 8. 意外事故的处理(一) 如果发生意外，必须立即通知实验室主管人员，并在有关人员的指导监督下对出事现场进行处理，绝对禁止未经报告而私自对出事现场给予非规范的处理。 (二) 实验过程中，如污染物溅落到身体表面，或有割伤、刺伤、烧伤、烫伤等情况发生，应立即停止实验工作进行紧急处理，更换被污染的实验服，皮肤表面用消毒液清洗，伤口以碘酒或酒精消毒，眼睛用无菌生理盐水冲洗。 (三) 如果发生菌液溢出，含菌种的培养管破碎等，造成中 、小面积污染，可用比污染面积大25%以上的纱布覆盖污染区域，边

32、缘用脱脂棉围住，向纱布倾倒5%苯酚溶液或70%的酒精，浸泡2小时以上（其间适量加溶液防止干燥），再经紫外灯近距离（1米内）照射2小时以上；被污染的器械、容器等立即浸泡于70%酒精中2小时以上，实验完成后再进行高压消毒处理。 (四) 如果发生气溶胶污染或大面积污染，应立即停止实验并关闭实验室，对污染区域进行紫外灯照射消毒过夜；第二天对污染区进行24小时封闭空气熏蒸消毒（乙醛消毒法5ml乙醛2g高锰酸钾/m3空间）。(五) 绝对禁止使用的事故处理方法1. 任何有可能造成污染面积扩大的去污方法，如使用70%乙醇或甲酚皂液擦洗被污染的区域。2. 直接用火焰对未经任何处理的污染地面、操作台、器械等进行烧

33、灼处理。3. 使用消毒效果未经证实的消毒剂进行消毒。4. 使用低浓度的消毒剂和紫外灯进行短时间、长距离的照射。第三章 金黄色葡萄球菌的生物危害评估报告1. 生物学特性金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属，可引起多种严重感染。金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8m左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37c，最适生长ph 7.4。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%

34、nacl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，vp反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。2. 危害程度分类根据中华人民共和国卫生部制定人间传染的病原微生物名录该菌危害程度为第三类。3. 致病性和感染剂量金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶，有报道目前出现越来越多的耐药菌株，mrsa即耐甲氧西林金黄色葡萄球，菌致病性也随着变强。4. 暴露的潜在后果暴露后可能引起感染，菌量大时可使实

35、验人员出现皮肤软组织感染、全身性感染、呼吸道感染、中毒、肠炎等。被感染后，成为传染源，可能对周围及环境造成污染，应及时得到治疗和控制。5. 感染途径通过污染食品和水源经口传播，也可通过呼吸道和接触传播。6. 微生物在环境中的稳定性葡萄球菌是无芽胞菌中抵抗力最强者，而干燥可达数月，加热8030min才被杀死。5石炭酸，0.1升汞1015min死亡。1:1000001:200000龙胆紫溶液能抑制其生长。对磺胺增效剂、青霉素、红霉素等较敏感，但耐药株逐年增多，mrsa即为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。7. 浓度和浓缩标本的容量一般样本检测。8. 自然和易感人群宿主金黄色葡萄球菌常存在于鼻咽喉、下消化道

36、、毛发和皮肤上，在人类和普通的动物都有存在。致病性依照宿主状状，卫生情况，皮肤和黏膜有否创伤而异。当宿主免疫力下降，皮肤黏膜有创伤或卫生情况不好是易感染，特别是老人和婴儿。9. 实验操作活动巳有文献证明，金黄色葡萄球菌可造成实验人员化脓性和呼吸道感染，人类不是该菌在唯一传染源，在许多动物身上都存在该菌。 这种病原体可以存在于受感染的人或动物的脓液，血液等多种体液中。通过污染食品和水源经口传播，和通过呼吸道和接触传播是该菌的主要传播方式，该菌也是引起院内感染的主要细菌之一。暴露在气溶胶中也可能引起感染。按照国家标准方法对样本（粪便、食品、水样）进行分离，培养，鉴定。建议采用bsl-2级水平的操作

37、技术，防扩散设备和设施。一旦发生意外，按照本实验室的意外事故应对方案和应急程序进行处理。10. 预防和治疗金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。目前疫苗还不可用于人类。该菌能对人体多部位的感染，所以跟据所致疾病的不同也应采取不同的治疗方案，主要是对症处理和针对病原治疗，大体用药可选用红霉素、新型青霉素、庆大霉素、万古霉素或先锋霉素治疗。预防金黄色葡萄球菌感染，首先是要做好个人卫生，和加强餐饮和食品卫生的管理，及时发现带菌者，做好各种动物的管理工作，把能传播该菌的途径有效的控制好。11. 工作人员素质卫

38、生技术专业人员，并经过生物安全培训后获得上岗证书。12. 评估结论该菌生物性状较稳定，但抗生素有滥用，也出现了不少的耐药株。该菌主通过污染食品和水源经口传播，也可通过呼吸道和接触传播，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。预防手段主要预防金黄色葡萄球菌感染，首先是要做好个人卫生，和加强餐饮和食品卫生的管理，及时发现带菌者，做好各种动物的管理工作，把能传播该菌的途径有效的控制好。试验过程建仪采用bsl-2级水平的操作技术、防扩散设备和设施。实验室中应穿着工作服或罩衫等防护服。离开实验室时，防护服必须脱下并留在实验室内。不得穿着外出，更不能携带回家。

39、用过的工作服应先在实验室中消毒，然后统一洗涤或丢弃。 当手可能接触感染材料、污染的表面或设备时应戴手套。如可能发生感染性材料的溢出或溅出，宜戴两副手套。不得戴着手套离开实验室。工作完全结束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用。操作台面用70%酒精或含氯消毒剂擦拭，废弃物处理按本实验室废弃物处理制度进行。第四章 副溶血性弧菌的生物危害评估报告副溶血性弧菌（vibrio parahemolyticus,vp）是一种嗜盐性细菌。副溶血性弧菌食物中毒，是进食含有该菌的食物所致，主要来自海产品，如墨鱼、海鱼、海虾、海蟹、海蜇，以及含盐分较高的腌制食品，如咸菜、腌肉等。本菌存活能力强，在抹布和砧板

40、上能生存1个月以上，海水中可存活47天。临床上以急性起病、腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状。本病多在夏秋季发生于沿海地区，常造成集体发病。由于海鲜空运，内地城市病例也渐增多。此菌对酸敏感，在普通食醋中5分钟即可杀死；对热的抵抗力也较弱。副溶血性弧菌食物中毒多发生在610月，海产品大量上市时。中毒食品主要是海产品，其次为咸菜、熟肉类、禽肉、禽蛋类，约有半数中毒者为食用了腌制品后。中毒原因主要是烹调时未烧熟煮透或熟制品被污染。1. pcr检测用于检测vp的pcr方法主要有任意引物pcr(abritrarilyprimedpcr，ap-pcr)、针对副溶血性弧菌任意引物pcr、多重pcr(muhi

41、plex-pcr)、实时pcr(real-timepcr)。实时pcr常规pcr检测，需要从反应体系中吸取产物做电泳或southern杂交等试验进行鉴定，转移过程中易污染，造成假阳性，而且耗费时间。1996年，tyagi开创了一种实时pcr(real-timepcp,)。实时pcr是在，pcr反应体系中加入标记有报告基团和淬灭基团的线性taqman。探针或茎环型荧光分子信标探针，在墓因扩增过程中，与产物杂交，此时，报告基团和淬灭基团分开，根据能量共振转移现象，报告基团发出荧光而被检测。这种方法操作简单，闭管检测，减少污染，灵敏度高，并且可以在pcr结束或pcr过程进行同步定性或定量检测，面且可

42、以进行临床大规模快速检测。2. 流行病学传染源传染源为病人，集体发病时往往仅少数病情严重者住院，而多数未住院者可能成为传染源，但由于病人仅在疾病初期排菌较多，其后排菌迅速减少，故不至因病人散布病菌而造成广泛流行。传播途径本病经食物传播，主要的食物是海产品或盐腌渍品，常见者为蟹类、乌贼、海蜇、鱼、黄泥螺等，其次为蛋品、肉类或蔬菜。进食肉类或蔬菜而致病者，多因食物容器或砧板污染所引起。地区分布特点：日本及我国沿海地区为副溶血性孤菌食物中毒发病率的高发区。据调查，我国沿海水域、海产品中副溶血性弧菌检出率较高，尤其是气温较高的夏秋季节。但近年来随着海产食品的市场流通，内地也有副溶血性弧菌食物中毒的散在

43、发生。季节性特点及易感性：79月常是副溶血性弧菌食物中毒的高发季节。男女老幼均可患病，但以青壮年为多，病后免疫力不强，可重复感染。食物的种类：主要是海产品，其中以墨鱼、带鱼、虾、蟹最为多见，如墨鱼的带菌率达93%，其次为盐渍食品。食品中副溶血性弧菌的来源：人群带菌者对各种食品的直接污染。沿海地区饮食从业人员、健康人群及渔民副溶血性弧菌带菌率为11.7%左右，有肠道病史者带菌率可达31.688.8%。间接污染，沿海地区炊具的副溶血性弧菌带菌率为61.9%，被副溶血性弧菌污染的食物，在较高温度下存放，食用钱加热不彻底或者生吃，或熟制品受到带菌者、带菌的生食品、带菌容器及工具等的污染。3. 治疗措施

44、支持及对症治疗 脱水者需输入生理盐水及葡萄盐水，或口服补液盐，以纠正失水。血压下降者，除被动补充血容量，纠正酸中毒等外，可酌用血管活性药。抗菌药物 轻度患者可不用抗菌药物，较重者可给复方新诺明或庆大霉素、阿米卡星和诺氟沙星等喹诺酮类抗菌药物【上述抗生素类可能使细菌产生耐药性，使用须谨慎】。发生中毒后要立即停止食用可疑中毒食品，并到医院医治。副溶血性弧菌对氯霉素敏感。呕吐、腹泻严重者要补充水和盐。4. 中毒预防加工海产品的案板上副溶血弧菌的检出率为87.9%。因此，对加工海产品的器具必须严格清洗、消毒。海产品一定要烧熟煮透，加工过程中生熟用具要分开。烹调和调制海产品拼盘时可加适量食醋。食品烧熟至

45、食用的放置时间不要超过4个小时。主要病理变化为空肠及回肠有轻度糜烂，胃粘膜炎、内脏（肝、脾、肺）淤血等。第五章 致泻大肠埃希菌的生物危害评估报告1. 生物学特性大肠埃希氏菌更习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，统称为致泻性大肠杆菌，一般包括五种：即肠毒素性大肠杆菌（etec）、致病性大肠杆菌（epec）、出血性大肠杆菌（ehec）、侵袭性大肠杆菌（eiec）和粘附性 大肠杆菌（eaec）。大肠埃希氏菌为两端钝圆的短小杆菌，一般大小约0.5-0.8m*1.0m-3.0m,因生长条件不同，个别菌体可呈近似球状或长丝状。此菌多单独存在或成双，但不呈长链状排列。约有50%左右的菌株具有

46、周生鞭毛而能运动，但多数菌体只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱；多数菌株生长有比鞭毛细、短、直且数量多的菌毛，有的菌株具有荚膜或微荚膜；不形成芽胞，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37，在42-44条件下仍能生长，生长温度范围为15-46。在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态：光滑型、粗糙型、粘液型。大肠埃希氏菌兼性厌氧，在有氧条件下生长良好，最适生长ph为6.8-8.0，所用培养基ph为7.0-7.5,若ph值低于6.0或高于8.0则生长缓慢。大肠埃希氏菌生华物性是，发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和

47、甘露醇产酸产气，分解蔗糖因菌株而异，录素酶试验阴性，imvi试验+-，有些菌株如碱性异型菌群，微产碱，不产气，无动力，易与志贺菌混淆。大肠埃希氏菌的抗原构造主要由菌体抗原(o)，鞭毛抗原(h)和荚膜抗原(k)三部分组成。现巳知有171个o抗原、99个k抗原和56个h抗原。2. 危害程度分类根据中华人民共和国卫生部制定人间传染的病原微生物名录该菌危害程度为第三类。3. 致病性和感染剂量致泻大肠埃希氏菌在人和动物的大便中大量存在，引起人体以腹泻症状为主的全球性疾病，其中尤以epec、etec所占比例为大。其中有少数几种引起人类食物中毒，部分埃希氏菌株與嬰兒腹瀉有關，並可引起成人腹瀉或食物中毒的暴發

48、，感染剂量约为107108。尽管目前报道各地主要腹泻病是由志贺氏菌或轮状病毒引起的，但是，多年来，致泻性大肠杆菌引起的腹泻病例始终位于第二位，可见大肠杆菌肠道传染的广泛性。还有，致泻性大肠杆菌亦可常年引发人体腹泻，以夏秋季为高峰，在患者感染住院率中，婴幼儿占60%以上4. 暴露的潜在后果摄入是主要的实验室危害，可引起实验人员感染。暴露在气溶胶中能否造成危害尚不清楚。5. 感染途径通过污染食品和水源经口传播。6. 微生物在环境中的稳定性此菌对理化因素的抵抗力，在无芽胞菌中是最强的一种，在室温可存活数周，在土壤、水中存活数月，耐寒力强，但是在30分钟内快速冷冻，将37降至4的过程，可杀死此菌。加热

49、60，30分钟，此菌可灭活。此菌对青霉素有中等抵抗力，对一般消毒剂都比较敏感对漂白粉，酚、甲醛等较敏感，水中1ppb氯可杀死此菌。此菌耐胆盐，在一定程度上能抵抗煌绿等染料的抑菌作用7. 浓度和浓缩标本的容量一般样本检测。8. 自然和易感人群宿主致泻大肠埃希氏菌的宿主主要为牛、猪、羊、鸡等家禽家畜，许多被该微生物污染的食物都不得可以作为传播媒介，幼儿、老人及免疫缺陷者更为易感。9. 实验操作活动致泻大肠埃希氏菌巳证明会对实验人员造成危害。摄入是主要的实验室危害，暴露在气溶胶中能否造成危害尚不清楚。按照国家标准方法对样本（粪便、食品、水样）进行分离，培养，鉴定。建议采用bsl-2级水平的操作技术，

50、防扩散设备和设施。一旦发生意外，按照本实验室的意外事故应对方案和应急程序进行处理。10. 预防和治疗致泻大肠埃希氏菌引起人体以腹泻症状为主疾病，根据菌型不同可引起如一些疾病：轻度水泻，痢疾样腹泻、出血性腹泻，也可引起食物中毒性疾病。目前尚无可用于人类的疫苗。对本病的治疗，病人应予胃肠道隔离，除一般治疗外，可根据大便细菌培养及药物敏感试验选用适当的抗菌药物作病原治疗，如选用庆大霉素、丁胺卡那霉素等。预防致泻大肠埃希氏菌的感染，首先是要做好个人卫生。切实做好饮食卫生、水源及粪便管理,消灭苍蝇,切断传播途径，防止病从口入。第六章 伤寒沙门氏菌的生物危害评估报告伤寒沙门菌，又称伤寒杆菌，属沙门菌属d组

51、。革兰染色阴性，呈短杆状，周有鞭毛，能活动，不产生芽孢，无荚膜。在普通培养基上能生长，在含有胆汁的培养基中生长更好。伤寒杆菌在自然界中的生活力较强，在水中可存活23周，在粪便中能维持12个月，在牛奶中不仅能生存，且可繁殖。耐低温，在冰冻环境中可存活数月，但对光、热、干燥及消毒剂的抵抗能力较弱，日光直射数小时即死，加热至60c后30分钟或煮沸后立即死亡，消毒饮水余氯可迅速致死。伤寒杆菌只感染人类，在自然条件下不感染动物。伤寒杆菌具有菌体(“o”)抗原、鞭毛(“h”)抗原和表面(“i)抗原，均能产生相应的抗体，但这些并非保护性抗体。由于“o”和“h”抗原性较强，故常用于血清凝集试验(肥达反应)以辅

52、助临床诊断，亦可用以制备伤寒菌苗供预防接种。 “i抗原见于新分离(特别是从病人血液分离)的菌株，能干扰血清中的杀菌效能和吞噬功能，是伤寒杆菌的重要毒力因子，但其抗原性不强，所产生的“i抗体的凝集效价一般较低且为时甚短。当病原菌从人体中清除后，“i抗体滴度迅速下降，故“i抗体的检出虽对本病的诊断无多大帮助，但有助于发现带菌者。伤寒杆菌在菌体裂解时可释放强烈的内毒素，对本病的发生和发展起着较重要的作用。1. 流行病学(一)传染源：为病人及带菌者。病人从潜伏期开始即可从粪便排菌，从病程第1周末开始经尿排菌，故整个病程中均有传染性，尤以病程的24周内传染性最大。慢性带菌者是本病不断传播或流行的主要传染

53、源。原有慢性肝胆管疾病(如胆囊炎、胆石症等)的伤寒病人易成为慢性带菌者，约14患者在肠道和胆囊中隐藏伤寒杆菌达数月或数年之久。(二)传播途径 伤寒杆菌随病人或带菌者的粪、尿排出后，通过污染的水或食物、日常生活接触、苍蝇和蟑螂等传播。其中，水源污染是本病传播的重要途径，亦是暴发流行的主要原因。食物污染也可引起本病的流行，而散发病例一般以日常生活接触传播为多。(三)人群易感性 人对伤寒普遍易感。病后可获得持久性免疫，再次患病者极少。(四)流行特征 世界各地均有本病发生，以热带、亚热带地区多见，可散发、地方性流行或暴发流行。在发展中国家主要因为水源污染而暴发流行，发达国家则以国际旅游感染为主。本病终

54、年可见，但以夏秋季最多。其中以儿童和青壮年居多。局部地区流行的伤寒耐药菌株有所增加，耐药谱也在逐渐扩大。除耐氯霉素、复方磺胺甲嗯唑、氨苄西林外，少数菌株对头孢菌素及喹诺酮类抗菌药物也产生耐药性。2. 实验室检查（一）常规检查：血白细胞大多为3109/l4109/l，伴中性粒细胞减少和嗜酸粒细胞消失，后者随病情的好转逐渐回升。极期嗜酸粒细胞2%，绝对计数超过4108/l者可基本除外伤寒。高热时可有轻度蛋白尿。粪便隐血试验阳性。（二）细菌学检查：血培养是确诊的论据，病程早期即可阳性，第710病日阳性率可达90%，第三周降为30%40%，第四周时常阴性；骨髓培养阳性率较血培养高，尤适合于已用抗菌素药

55、物治疗，血培养阴性者；粪便培养，从潜伏期起便可获阳性，第34周可高达80%，病后6周阳性率迅速下降，3%患者排菌可超过一年；尿培养：病程后期阳性率可达25%，但应避免粪便污染；玫瑰疹的刮取物或活检切片也可获阳性培养。（三）免疫学检查1.肥达氏试验：伤寒血清凝集试验即肥达反应阳性者对伤寒，副伤寒有辅助诊断价值。检查中所用的抗原有伤寒杆菌菌体（o）抗原，鞭毛（h）抗原，副伤寒甲，乙，丙鞭毛抗原共5种，目的在于用凝集法测定病人血清中各种抗体的凝集效价。病程第1周阳性反应不多，一般从第2周开始阳性率逐渐增高，至第4周可达90%，病愈后阳性反应可持续数月之久。有少数病人抗体很迟才升高，甚至整个病程抗体效

56、价很低（14.4%)或阴性（7.8%10%），故不能据此而排除本病。widal试验已沿用近100年，60年代曾有人对其特异性提出异议，认为其结果存在着混乱模糊的情况，非伤寒发热性疾病widals试验也呈阳性结果，如各种急性感染，肿瘤，结缔组织病性疾病，慢性溃疡性结肠炎，均可出现阳性结果。perlnan等认为无菌的结肠细胞和肠杆菌可能有共同的抗原，结肠粘膜损害所产生的抗结肠抗体与沙门菌菌体抗原起交叉反应，因此对肥达氏反应结果的判定宜审慎，必须密切结合临床资料，还应强调恢复期血清抗体效价的对比，有人提出应用流行菌株抗原与国际菌株相比，阳性率可提高，建议用当地流行菌株取代国际标准菌株，以提高流行区域伤寒诊断的阳率。2.其他免疫学检查（1）被动血凝试验（pha）：用伤寒杆菌菌体抗原致敏红细胞，使之与被检血清反应，根据红细胞凝集状况判断有无伤寒特异性抗体存在，国内外报道阳性率90%98.35%，假阳性率5%左右。鲍行豪等曾报道lsp-pha对伤寒血培养患者的检出率为89.66%，早期病人90.02%，临床确诊者为82.5%，且主要检测的是特异igm抗体，故可用于早期诊断。（2）对流