第七章 含量测定-uv

1、1第七章第七章 中药制剂的含量测定技术中药制剂的含量测定技术第七章第七章 中药制剂的含量测定技术中药制剂的含量测定技术【学习目标学习目标】v 知识目标知识目标 掌握紫外掌握紫外- -可见分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法可见分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法、气相色谱法测定中药制剂含量的原理和方法、气相色谱法测定中药制剂含量的原理和方法 熟悉紫外熟悉紫外- -可见分光光度计、薄层扫描仪、液相色谱仪、气可见分光光度计、薄层扫描仪、液相色谱仪、气相色谱仪的工作原理、使用方法及操作注意事项相色谱仪的工作原理、使用方法及操作注意事项 了解容量分析法和挥发油测定法的原理和方法了解容量分析法和挥发

2、油测定法的原理和方法v 技能目标技能目标 熟练掌握紫外熟练掌握紫外- -可见分光光度法、薄层扫描法、高效液相色可见分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法、气相色谱法的测定中药制剂含量的基本操作和技能谱法、气相色谱法的测定中药制剂含量的基本操作和技能 学会正确查阅学会正确查阅中国药典中国药典，学会正确选取仪器、试药，学会正确选取仪器、试药，学会配制试液，学会计量器具和检验仪器的操作，规范操学会配制试液，学会计量器具和检验仪器的操作，规范操作，并学会正确计算、处理各种数据、判定检测结果作，并学会正确计算、处理各种数据、判定检测结果2第七章第七章 中药制剂的含量测定技术中药制剂的含量测定技术讲授内容

3、讲授内容v紫外紫外- -可见分光光度法可见分光光度法 简述简述 方法方法 应用实例应用实例v薄层扫描法薄层扫描法 简述简述 方法方法 应用实例应用实例v高效液相色谱法高效液相色谱法 简述简述 方法方法 应用实例应用实例v气相色谱法气相色谱法 简述简述 方法方法 应用实例应用实例川贝枇杷糖浆川贝枇杷糖浆v容量分析法容量分析法 北豆根片中总生物碱的测定北豆根片中总生物碱的测定 克痢痧胶囊中雄黄的测定克痢痧胶囊中雄黄的测定 万氏牛黄清心丸中朱砂的测定万氏牛黄清心丸中朱砂的测定v其他分析法其他分析法 挥发油测定法挥发油测定法 氮测定法氮测定法第七章第七章 中药制剂的含量测定技术中药制剂的含量测定技术中

4、国药典中国药典一部含量测定方法汇总表一部含量测定方法汇总表4类别类别分析方法分析方法品种数品种数项目数项目数新增项新增项仪器分析法仪器分析法高效液相色谱法高效液相色谱法850956709气相色谱法气相色谱法505224薄层扫描法薄层扫描法292912紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法17178原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法221化学分析法化学分析法滴定分析滴定分析27279氮测定法氮测定法11119挥发油测定法挥发油测定法441重量法重量法330鞣质测定法鞣质测定法111第七章第七章 中药制剂的含量测定技术中药制剂的含量测定技术v原理：原理：被测物质、紫外或可见光区被测物质、紫外或可

5、见光区v优点优点 灵敏度高灵敏度高 准确度准确度 仪器设备简单仪器设备简单 操作简便操作简便v缺点缺点 不具分离功能不具分离功能总成分的测定总成分的测定v定量分析的依据定量分析的依据 朗伯朗伯- -比尔定律比尔定律v 方法方法 对照品比较法对照品比较法 吸收系数法吸收系数法 比色法比色法5紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法1lg （）AKcLT第七章第七章 中药制剂的含量测定技术中药制剂的含量测定技术紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法v含量计算含量计算 对照品比较法对照品比较法 吸收系数法吸收系数法6供供对对ACCA供供1%11%cmACEL第七章第七章 中药制剂的含量测定技术中药制剂

6、的含量测定技术紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法v吸光度测量的条件选择吸光度测量的条件选择 测定波长的选择：测定波长的选择： maxmax 吸光度吸光度A A读数范围：读数范围：0.30.30.70.77调节光路调节光路样样参参光学性质和厚度相同光学性质和厚度相同样品池样品池样品溶液样品溶液，参比池参比池空白溶液空白溶液样品池样品池参比池参比池配制样品的溶剂配制样品的溶剂空白溶液空白溶液A AT TA A= = =% %1001000 0第七章第七章 中药制剂的含量测定技术中药制剂的含量测定技术v含量测定方法：对照品比较法含量测定方法：对照品比较法 供试品溶液和对照品溶液各供试品溶液和对照

7、品溶液各2 2份份 平行操作平行操作 每份结果对平均值的每份结果对平均值的偏差偏差应在应在0.5%0.5%以内以内 对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定量的液中被测成分规定量的100%100%10%10% 所用所用溶剂溶剂应完全一致应完全一致 止咳宝片（吗啡）、灯盏细辛注射剂（总咖啡止咳宝片（吗啡）、灯盏细辛注射剂（总咖啡酸酯）、泌石通胶囊（多糖）、黄杨宁片（环酸酯）、泌石通胶囊（多糖）、黄杨宁片（环维黄杨星维黄杨星D D）8紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法第七章第七章 中药制剂的含量测定技术中药制剂的含量测定技术紫外紫外-可见

8、分光光度法可见分光光度法v含量测定方法：含量测定方法：对照品比较法对照品比较法 例题：黄杨宁片中黄杨宁的含量测定例题：黄杨宁片中黄杨宁的含量测定 本品为黄杨宁经加工制成的片剂。每片含环维黄杨本品为黄杨宁经加工制成的片剂。每片含环维黄杨星星D 0.5mgD 0.5mg或或1mg1mg 可用对照品比较法测其含量。可用对照品比较法测其含量。 环维黄杨星环维黄杨星D D9第七章第七章 中药制剂的含量测定技术中药制剂的含量测定技术紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法B + H+BH+HInH+In-(BH+In-)(BH+In-)水相有机相10v含量测定方法：对照品比较法含量测定方法：对照品比较法 例

9、题：黄杨宁片中黄杨宁的含量测定例题：黄杨宁片中黄杨宁的含量测定 测定原理：酸性染料比色法测定原理：酸性染料比色法第七章第七章 中药制剂的含量测定技术中药制剂的含量测定技术紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法-黄杨宁片黄杨宁片v 【含量测定】【含量测定】对照品溶液的制备对照品溶液的制备 取环维黄杨星取环维黄杨星D D对照品对照品25mg25mg，精密称定，置，精密称定，置250ml250ml量瓶中，加甲醇量瓶中，加甲醇70ml70ml使溶解，用使溶解，用0.05mol/L0.05mol/L磷酸二氢钠缓冲液稀释至刻磷酸二氢钠缓冲液稀释至刻度，摇匀，精密量取度，摇匀，精密量取10ml10ml，置，

10、置100ml100ml量瓶中，用量瓶中，用0.05mol/L0.05mol/L磷酸二氢钠缓冲液磷酸二氢钠缓冲液稀释至刻度，摇匀，即得（每稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml1ml含环维黄杨星含环维黄杨星D10gD10g）。）。v 供试品溶液的制备供试品溶液的制备 取本品取本品2020片，精密称定，研细，片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当精密称取适量（约相当于环维黄杨星于环维黄杨星D0.5mgD0.5mg），置，置50ml50ml量瓶中，加量瓶中，加0.05mol/L0.05mol/L磷酸二氢钠缓冲液至磷酸二氢钠缓冲液至近刻度，近刻度，8080水浴恒温水浴恒温1.51.5小时后取出，冷却至室温

11、，加小时后取出，冷却至室温，加0.05mol/L0.05mol/L磷酸二氢磷酸二氢钠缓冲液至刻度，摇匀，离心钠缓冲液至刻度，摇匀，离心6 6分钟（每分钟转速分钟（每分钟转速30003000转），取上清液，即转），取上清液，即得。得。v 测定法测定法 精密量取对照品溶液与供试品溶液各精密量取对照品溶液与供试品溶液各5ml5ml，分别置分液漏斗中，各精，分别置分液漏斗中，各精密加入溴麝香草酚蓝溶液（取溴麝香草酚蓝密加入溴麝香草酚蓝溶液（取溴麝香草酚蓝18mg18mg，置，置250ml250ml量瓶中，加甲醇量瓶中，加甲醇5ml5ml使溶解，加使溶解，加0.05mol/L0.05mol/L磷酸二氢钠

12、缓冲液至刻度，摇匀，即得）磷酸二氢钠缓冲液至刻度，摇匀，即得）5ml5ml，摇，摇匀，立即分别精密加入三氯甲烷匀，立即分别精密加入三氯甲烷10ml10ml，振摇，振摇2 2分钟，静置分钟，静置1.51.5小时，分取三氯小时，分取三氯甲烷层，置含甲烷层，置含0.5g0.5g无水硫酸钠的具塞试管中，振摇，静置，取上清液，照紫无水硫酸钠的具塞试管中，振摇，静置，取上清液，照紫外外- -分光光度法（附录分光光度法（附录 A A），在），在410nm410nm的波长处分别测定吸光度，计算，即的波长处分别测定吸光度，计算，即得。得。11第七章第七章 中药制剂的含量测定技术中药制剂的含量测定技术v含量测定方

13、法含量测定方法-吸收系数法吸收系数法 六味地黄颗粒中牡丹皮的含量测定六味地黄颗粒中牡丹皮的含量测定 取装量差异项下的本品约取装量差异项下的本品约2g2g，研细，精密称定，用水，研细，精密称定，用水蒸汽蒸馏，收集馏出液约蒸汽蒸馏，收集馏出液约450ml450ml，置，置500ml500ml量瓶中，加量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。照分光光度法在水稀释至刻度，摇匀。照分光光度法在274nm274nm波长处波长处测定吸收度，按丹皮酚（测定吸收度，按丹皮酚（C9H10O3C9H10O3）的吸收系数为）的吸收系数为862862计算，即得。药品标准规定每袋（装量为计算，即得。药品标准规定每袋（装量为5g5g

14、）含牡丹）含牡丹皮按丹皮酚（皮按丹皮酚（ C9H10O3 C9H10O3 ）计，不得少于）计，不得少于6.0mg6.0mg。 12紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法含量（含量（mg/g）=A供供1%500.01000平均装量平均装量862m供供第七章第七章 中药制剂的含量测定技术中药制剂的含量测定技术v含量测定方法含量测定方法-标准曲线法标准曲线法 多用于可见分光光度法多用于可见分光光度法 适用于批量样品的分析适用于批量样品的分析 曲线可多次使用曲线可多次使用 主要用于总黄酮的含量测定。如主要用于总黄酮的含量测定。如中国药典中国药典独一味独一味胶囊（片）、消咳喘糖浆、诺迪康胶囊、夏枯草口服

15、胶囊（片）、消咳喘糖浆、诺迪康胶囊、夏枯草口服液、垂盆草颗粒和汉桃叶片中的总黄酮的含量测定；液、垂盆草颗粒和汉桃叶片中的总黄酮的含量测定；另新血宝胶囊和复方皂矾丸中硫酸亚铁的含量测定也另新血宝胶囊和复方皂矾丸中硫酸亚铁的含量测定也用此法用此法13紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法第七章第七章 中药制剂的含量测定技术中药制剂的含量测定技术v含量测定方法含量测定方法-标准曲线法标准曲线法 绘制标准曲线（又称工作曲线）绘制标准曲线（又称工作曲线）：按各品种项下按各品种项下规定的方法，配制一系列不同浓度（规定的方法，配制一系列不同浓度（CiCi）的对照品溶）的对照品溶液（液（5 57 7份），在相

16、同条件下分别测其吸光度（份），在相同条件下分别测其吸光度（AiAi），），以吸光度以吸光度A A为纵坐标，浓度为纵坐标，浓度C C为横坐标绘制为横坐标绘制A-CA-C曲线，即曲线，即得标准曲线（又称工作曲线）。得标准曲线（又称工作曲线）。 测定：测定：按各品种项下规定的方法，配制供试品溶液，按各品种项下规定的方法，配制供试品溶液，在相同条件下测定供试品溶液的在相同条件下测定供试品溶液的A A值，从标准曲线上查值，从标准曲线上查出与之对应的浓度，即可求出被测成分的浓度。也可出与之对应的浓度，即可求出被测成分的浓度。也可将一系列对照品溶液的浓度与相应的吸光度进行一元将一系列对照品溶液的浓度与相应的

17、吸光度进行一元线性回归，求出回归方程（线性回归，求出回归方程（相关系数相关系数r0.999r0.999），将），将供试品溶液的吸光度代入回归方程，计算出被测成分供试品溶液的吸光度代入回归方程，计算出被测成分的浓度（的浓度（C C供供）14紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法第七章第七章 中药制剂的含量测定技术中药制剂的含量测定技术样品样品A A值值对照品溶液：一系列不同浓度的对照品溶液对照品溶液：一系列不同浓度的对照品溶液 相同条件下相同条件下A A为纵坐标，为纵坐标，C C为横坐标为横坐标标准曲线（工作曲线）标准曲线（工作曲线）样品的浓度和含量样品的浓度和含量一系列一系列A A值值紫外紫外

18、-可见分光光度法可见分光光度法-标准曲线法标准曲线法第七章第七章 中药制剂的含量测定技术中药制剂的含量测定技术消咳喘糖浆中总黄酮的测定消咳喘糖浆中总黄酮的测定v 对照品溶液的制备对照品溶液的制备 取芦丁对照品适量，精密称定，加取芦丁对照品适量，精密称定，加60%60%乙乙醇制成每醇制成每1ml1ml含芦丁含芦丁60g60g的溶液，即得。的溶液，即得。v 标准曲线的制备标准曲线的制备 精密量取对照品溶液精密量取对照品溶液0.5ml0.5ml、1ml1ml、2ml2ml、3ml3ml、4ml4ml与与5ml5ml，分别置，分别置10ml10ml量瓶中，各加量瓶中，各加0.1mol/L0.1mol/L三氯化铝溶三氯化铝溶液液2ml2ml、1mol/L1mol/L醋酸钾溶液醋酸钾溶液3ml3ml，