DNA重组技术的基本工具-公开课ppt课件

1、1设想设想 能否培养出具有抗虫性状的抗虫棉呢？能否培养出具有抗虫性状的抗虫棉呢？芽孢形成过程中产生芽孢形成过程中产生称为称为-内毒素的杀虫内毒素的杀虫伴胞晶体蛋白，这些伴胞晶体蛋白，这些蛋白具有很高的杀虫蛋白具有很高的杀虫活性活性2 胰岛素是治疗糖尿病的特效药胰岛素是治疗糖尿病的特效药, ,长期以来只能从猪、牛等动物的胰腺中提取，产量低成本高。长期以来只能从猪、牛等动物的胰腺中提取，产量低成本高。 而微生物生长迅速，容易控制。若微生物代谢能产生胰岛素就好了。而微生物生长迅速，容易控制。若微生物代谢能产生胰岛素就好了。设想设想 3 这些定向改造基因的设想能实现吗？基因工程基因工程456抗虫棉的抗

2、虫棉的培育有哪些培育有哪些关键步骤？关键步骤？789DNA DNA 重组技术的基本工具重组技术的基本工具本节知识内容 1-1 DNA1-1 DNA重组技术的基本工具重组技术的基本工具专题一专题一 基因工程基因工程“分子手术刀分子手术刀” 限制酶限制酶 “分子缝合针分子缝合针” DNADNA连接酶连接酶 “分子运输车分子运输车” 基因进入受体细胞的载体基因进入受体细胞的载体 10黏性末端黏性末端平末端平末端4 4、切割方式：、切割方式：错切和平切错切和平切11ATGCATGC限制酶切割磷酸二酯键限制酶切割磷酸二酯键12限制性内切酶作用过程13 1 1、大肠杆菌的一种限制酶（大肠杆菌的一种限制酶（

3、EcoR)EcoR)能识别能识别GAATTCGAATTC序列，并在序列，并在G G和和A A之间切开形成黏性末端。之间切开形成黏性末端。 2 2、SmaSma能识别能识别CCCGGGCCCGGG序列，并在序列，并在C C和和G G之间切割形成平末端之间切割形成平末端 。常见的两种限制酶1415黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端161718基因的针线：DNADNA连接酶G A A T T CC T T A A GG A A T T CC T T A A GG C T T A A A A T T C GG C T T A A A A T T C GG C T T A A A A T T C G用同种

4、限制酶切割用同种限制酶切割19ATGCATGC连接酶连接磷酸二酯键连接酶连接磷酸二酯键DNADNA连接酶的作用过程：连接酶的作用过程：二、分子缝合针二、分子缝合针DNA连接酶连接酶20 T磷酸二酯键1234512345 A21作用部位：作用部位：（扶手）（扶手）（梯子）（梯子）22连接黏性末端连接黏性末端连接黏性末端和平末端连接黏性末端和平末端分类分类作用作用E.coli DNA连接酶连接酶连接酶种类：连接酶种类：T4DNA连接酶连接酶23DNA聚合酶和聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？连接酶有何相同点和不同点？DNA连接酶连接酶DNA聚合酶聚合酶连接连接DNA链链连接部位连接部位双链双

5、链在两在两DNADNA片断之间形成片断之间形成磷酸二酯键磷酸二酯键单链单链将单个核苷酸加到已存在的核酸片将单个核苷酸加到已存在的核酸片断断33末端形成磷酸二末端形成磷酸二酯酯键键24核苷酸分子的连接：核苷酸分子的连接：ATGCATGCDNADNA聚合酶连接单链聚合酶连接单链DNADNA把单个脱氧核苷酸连接到把单个脱氧核苷酸连接到DNADNA片段上片段上25三、分子运输车基因进入受体细胞的载体 要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去！能将外源基因送入受体细胞的工具就是

6、载体。乙生物的细胞内去！能将外源基因送入受体细胞的工具就是载体。1 1、基因工程的载体被喻为、基因工程的载体被喻为：分子运输车分子运输车2 2、基因工程的载体来源、基因工程的载体来源：作为基因工程的载体需要怎样的条件呢？作为基因工程的载体需要怎样的条件呢？2627作为载体的必要条件1. 1.能自我复制能自我复制能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达；2.2.有一个至多个限制酶切位点有一个至多个限制酶切位点能与目的基因结合能与目的基因结合3.3.有遗传标记基因有遗传标记基因便于观察便于观察4.4.对受体细胞无害、易分离对受体细胞无害、易分离安

7、全、比较容易得到安全、比较容易得到2829课本知识回顾 1 1、基因工程又叫做基因工程又叫做 或或 。通俗地说，就是按照人们的意。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种愿，把一种生物的某种 提取出来，加以提取出来，加以 ， 然后放到然后放到另一种生物的细胞里，另一种生物的细胞里， 改造生物的遗传性状。改造生物的遗传性状。基因拼接技术基因拼接技术DNA重组技术重组技术基因基因修饰改造修饰改造定向地定向地302、DNA 重组技术的基本工具重组技术的基本工具“分子手术刀分子手术刀” “分子缝合针分子缝合针” “分子运输车分子运输车”限制（性核酸内切）酶限制（性核酸内切）酶DNA连接酶连接酶基

8、因进入受体细胞的载体基因进入受体细胞的载体31原核生物中分离纯化出来原核生物中分离纯化出来特定的核苷酸序列特定的核苷酸序列磷酸二酯键磷酸二酯键黏性末端黏性末端平末端平末端321、种类：、种类：2、作用部位：、作用部位：两类两类连接黏性末端连接黏性末端Ecoli DNA连接酶连接酶T4 DNA连接酶连接酶磷酸二酯键磷酸二酯键连接黏性末端和平末端连接黏性末端和平末端33通常有三种通常有三种: :作为载体的条件：作为载体的条件： 在进行基因工程操作中在进行基因工程操作中, ,真正被用作载体的质粒都是在真正被用作载体的质粒都是在 质粒质粒噬菌体衍生物噬菌体衍生物动植物病毒动植物病毒天然质粒天然质粒人工改造人工改造的的能自我复制；有切割位点；能自我复制；有切割位点；有遗传标记基因；对受体细胞无害、易分离有遗传标记基因；对受体细胞无害、易分离基础上进行过基础上