第六章ena多肽抗体谱免疫印迹检测ppt课件

1、第六章第六章enaena多肽抗体谱多肽抗体谱免疫印迹检测免疫印迹检测黑龙江中医药大学 临床医学院 诊断教研室黄 萍第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测第一节第一节概述概述一、一、 何为何为ena? ena(extractable nuclear antige) 盐水可提取性核抗原的总称。盐水可提取性核抗原的总称。第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 核抗原：核抗原：组蛋白组蛋白 ：不溶于水不溶于水 dna ；不溶于水不溶于水 ena：可溶于生理盐水可溶于生理盐水是非组蛋白核蛋白，属酸性核蛋白抗原，是非组蛋白核蛋白，属酸性核蛋白抗原

2、，是许多小分子量的是许多小分子量的rna和多肽组成和多肽组成。第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 二、多肽抗体谱二、多肽抗体谱 ena抗体是指能与核中盐水可提取抗体是指能与核中盐水可提取抗原发生特异性结合抗体，既是抗核抗抗原发生特异性结合抗体，既是抗核抗体的一部分。体的一部分。第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 ena多肽抗体谱多肽抗体谱是由许多小分子量的是由许多小分子量的rna和多肽和多肽组成。组成。不同的不同的urna各有其相应的抗体。各有其相应的抗体。目前发现的相应的抗体已有十余种，其目前发现的相应的抗体已有十余种，其中

3、，国际上共认的对风湿有特异的诊断中，国际上共认的对风湿有特异的诊断价值的有七种。故将这七种抗体叫做多价值的有七种。故将这七种抗体叫做多肽抗体谱肽抗体谱第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 三、三、 免疫印迹免疫印迹免疫印迹（免疫印迹（immunoblot ibt）又称免疫转印技术。是一项新的生又称免疫转印技术。是一项新的生化技术。它对研究工作的影响与内切酶化技术。它对研究工作的影响与内切酶的发现和的发现和 pcr的基因扩增技术是等量的基因扩增技术是等量齐观的。齐观的。第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫印迹的基本原理：免疫印

4、迹的基本原理：将凝胶电泳与固相免疫结合起来，将凝胶电泳与固相免疫结合起来，其主要的操作过程分三个步骤。其主要的操作过程分三个步骤。1、分离、分离盐水可提取抗原（盐水可提取抗原（ena）中多）中多肽按分子量的大小，先用肽按分子量的大小，先用sds 聚丙烯酰胺凝胶分离聚丙烯酰胺凝胶分离第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫印迹的基本原理：免疫印迹的基本原理： 2 、转移转移将分离的组份从凝胶上转移到固相将分离的组份从凝胶上转移到固相基质上，如硝酸纤维膜基质上，如硝酸纤维膜第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫印迹的基本原理：免

5、疫印迹的基本原理： 3 、测定测定对转移后的组份进行免疫法测定，对转移后的组份进行免疫法测定，显示出蛋白带。显示出蛋白带。既通过抗体的反应，用酶联免疫吸既通过抗体的反应，用酶联免疫吸附法观察与抗体反应的多肽（呈显色带）附法观察与抗体反应的多肽（呈显色带）的数量与分子量的数量与分子量 第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫印迹的基本原理：免疫印迹的基本原理：免疫转印技术实际上是一项将凝胶电免疫转印技术实际上是一项将凝胶电泳技术、固定化技术及分子亲和技术三泳技术、固定化技术及分子亲和技术三者融为一体的免疫转印技术。者融为一体的免疫转印技术。第第六六章章enaen

6、a多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测免疫转印技术优点：免疫转印技术优点：第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点：免疫转印技术优点： 1、高分辨率高分辨率免疫转印技术综合了电泳技术分辨免疫转印技术综合了电泳技术分辨率强的特点。率强的特点。第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点：免疫转印技术优点： 2、高灵敏度高灵敏度免疫转印技术综合了免疫反应敏感免疫转印技术综合了免疫反应敏感性高的特点，可检出最小蛋白质性高的特点，可检出最小蛋白质1pg(10-12g) 第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫

7、印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点：免疫转印技术优点： 3、高特异性高特异性免疫转印技术综合了免疫反应特异免疫转印技术综合了免疫反应特异性，根据抗原抗体的特异反应，同一条性，根据抗原抗体的特异反应，同一条蛋白印迹上可做多项分析。蛋白印迹上可做多项分析。第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测免疫转印技术优点：免疫转印技术优点： 4、高度稳定性高度稳定性蛋白印迹膜便于保存，可存放蛋白印迹膜便于保存，可存放6-12 个月。个月。第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点：免疫转印技术优点： 5、设备简单，操作容易

8、设备简单，操作容易免疫转印技术在临床检验中必有远免疫转印技术在临床检验中必有远大前程，并可能代替许多现有的传统检大前程，并可能代替许多现有的传统检验方法。验方法。第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 第二节第二节检测对象检测对象 ena多肽抗体谱多肽抗体谱早期诊断早期诊断sle和多种风湿病，和多种风湿病，有较高的特异性和敏感性，有较高的特异性和敏感性，有助于结缔组织病的诊断有助于结缔组织病的诊断和鉴别诊断和鉴别诊断第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 一、风湿病的定义一、风湿病的定义风湿病学是一门以内科学和临床免疫风湿病学是一门以

9、内科学和临床免疫学为基础的新兴学科学为基础的新兴学科其研究的对象是风湿性疾病，包括所其研究的对象是风湿性疾病，包括所有不同原因，以及不明原因引起的骨、关有不同原因，以及不明原因引起的骨、关节、肌疾病。节、肌疾病。第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 广义：涉及所有骨、关节、肌肉疼痛和炎症广义：涉及所有骨、关节、肌肉疼痛和炎症的疾病的疾病感炎性：感炎性：莱姆（莱姆（lyme）氏病）氏病代谢性：代谢性： 痛风痛风内分泌性：内分泌性：甲状旁腺功能亢进甲状旁腺功能亢进遗传性；遗传性；粘液多糖病粘液多糖病退化性：退化性：骨关节炎骨关节炎生态环境性：大骨节病生态环境性：大骨

10、节病第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 狭义：主要指自身免疫性结缔组织疾病狭义：主要指自身免疫性结缔组织疾病 类风湿性疾病骨关节炎类风湿性疾病骨关节炎(ra)系统红斑狼疮系统红斑狼疮(sle)干燥综合症干燥综合症(ss)硬皮病硬皮病(pss)皮肌炎和多发行肌炎皮肌炎和多发行肌炎(dm/pm)混合性结缔组织病混合性结缔组织病(mctd)第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测 二、二、 适应症适应症 1、临床上怀疑有风湿性疾病（结缔临床上怀疑有风湿性疾病（结缔组织病或自身免疫性疾病），需进一步组织病或自身免疫性疾病），需进一步确诊者。

11、确诊者。 2、 已诊断为某种风湿性疾病，但已诊断为某种风湿性疾病，但需明确是否合并其它风湿性疾病，以指需明确是否合并其它风湿性疾病，以指导治疗者。导治疗者。第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测二、二、 适应症适应症 3 、诊断未明，但有下列症状，需排除诊断未明，但有下列症状，需排除或或确诊何种风湿性疾病者：确诊何种风湿性疾病者： 、原因不明发热伴有关节或肌肉疼痛。、原因不明发热伴有关节或肌肉疼痛。、淋巴结肿大或白血球减少或血小板减淋巴结肿大或白血球减少或血小板减少或溶血性贫血。少或溶血性贫血。、皮疹或不典型面部红斑，光敏感。、皮疹或不典型面部红斑，光敏感。、蛋白

12、尿。、蛋白尿。第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测、心包炎或胸膜炎。、心包炎或胸膜炎。、癫痫或精神、神经症状。、癫痫或精神、神经症状。、习惯性流产。、习惯性流产。、雷诺氏现象。、雷诺氏现象。、肿胀手或手指、足趾皮肤变硬。、肿胀手或手指、足趾皮肤变硬。第三章第三章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测、肌肉有压痛或抬臂、下蹲起立时困、肌肉有压痛或抬臂、下蹲起立时困 难。难。、下肢出现网状青紫。下肢出现网状青紫。、肺间质病变或肺动脉高压。肺间质病变或肺动脉高压。、经常口干、眼干、或反复腮腺炎。经常口干、眼干、或反复腮腺炎。、易口腔溃疡或大量脱发。易

13、口腔溃疡或大量脱发。第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测、吞咽困难，食道蠕动减弱。吞咽困难，食道蠕动减弱。、青年女性有偏头痛。青年女性有偏头痛。、荧光抗核抗体阳性。荧光抗核抗体阳性。、关节疼痛。关节疼痛。、长期反复性原因不明低热。长期反复性原因不明低热。第三章第三章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测三三 、送检标本送检标本 血清血清第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测四四 报告方式报告方式反应抗体反应抗体分子量分子量 1. 抗抗sm抗体抗体+/- 29/28kd、13.5kd 2. 抗抗u1rnp抗体抗体+/

14、- 73kd、32kd、17.5kd 3.抗抗scl-70抗体抗体+/- 86kd、70kd 4.抗抗ssa抗体抗体+/- 52kd 5.抗抗ssb抗体抗体+/- 48/47kd、45kd 6.抗抗jo-1抗体抗体+/- 55kd 7.抗抗rib抗体抗体+/- 38kd16kd15kd + 表示有该种自身抗体表示有该种自身抗体 - 表示无该种自身抗体表示无该种自身抗体第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测第三节第三节临床意义临床意义 第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义一抗一抗sm抗体抗体 1.sm为病人为病人smi

15、th（发现抗体的第一位病人）（发现抗体的第一位病人）的名字缩写的名字缩写 2.抗抗sm抗体是酸性糖蛋白抗体是酸性糖蛋白 3.是目前公认的系统性红斑狼疮（是目前公认的系统性红斑狼疮（sle）标记抗体，有利于标记抗体，有利于sle的早期诊断。、的早期诊断。、注意：关键是注意：关键是13.5kd 一般是一般是13.5kd和和 29/28kd同时出现，若单独出现同时出现，若单独出现29/28 kd、无、无13.5kd不能判断不能判断抗抗sm抗体阳性抗体阳性 4.阳性率阳性率30-50%，仅见于本病。，仅见于本病。第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义 二二

16、 、抗抗u1rnp抗体抗体(抗抗rnp)1、是混合性结缔组织病是混合性结缔组织病(mctd)的一项重的一项重要血清学特征。要血清学特征。2、阳性率可达阳性率可达95%以上。以上。3、73 kd（国外报导为（国外报导为70 kd）和）和32kd可可同时出现，也可分别出现。同时出现，也可分别出现。17.5 kd常拌常拌73 kd和和32 kd、一起出现，单独出现少见。、一起出现，单独出现少见。4、其它结缔组织病的阳性率、其它结缔组织病的阳性率系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮（sle ） 30%干燥综合症干燥综合症(ss) 20%硬皮病硬皮病(pss) 7%第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测

17、多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义 三、抗三、抗scl-70抗体抗体 1、抗抗scl-70抗体中的抗体中的sclsclerosis的缩写的缩写70代表抗原分子量，为代表抗原分子量，为70kd（70000） 2、是弥漫型硬皮病是弥漫型硬皮病(pss)的标记抗体。的标记抗体。 3、阳性率可达阳性率可达50-64% 4、在在86 kd和和70kd两区带间有时可见到两区带间有时可见到两条较弱的区带，是两条较弱的区带，是100kd的降解产的降解产物。物。两区带一般同时出现。两区带一般同时出现。第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义 四、抗四、抗ssa抗体

18、（抗抗体（抗ro抗体）抗体）1ss为干燥综合症（为干燥综合症（sjogrens syndrome）的缩写。的缩写。a为抗原子序列号为抗原子序列号2曾以最先查到此抗体患者名字命名，又称曾以最先查到此抗体患者名字命名，又称抗抗ro抗体。抗体。3对干燥综合症（对干燥综合症（ss）诊断有意义。阳性率）诊断有意义。阳性率7080%合并合并sle3050%单纯单纯sle810%第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义 四、抗四、抗ssa抗体（抗抗体（抗ro抗体）抗体）4可见于其它多种自身免疫性疾病。可见于其它多种自身免疫性疾病。包括包括sle，硬皮症，多发性肌炎

19、和类风湿关，硬皮症，多发性肌炎和类风湿关节炎等疾病。节炎等疾病。5、该抗体阳性也可引起亚急性皮肤狼疮的皮该抗体阳性也可引起亚急性皮肤狼疮的皮损与损与sle的广泛光过敏性皮炎也相关，的广泛光过敏性皮炎也相关，igg类类抗抗ssa抗体通过胎盘进入胎儿后可引起新生抗体通过胎盘进入胎儿后可引起新生儿狼疮综合症。儿狼疮综合症。6、个别因抗体与心脏的传导系统相结合可造个别因抗体与心脏的传导系统相结合可造成先天性心脏传导阻滞。成先天性心脏传导阻滞。第第六六章章enaena多肽抗体谱免疫印迹检测多肽抗体谱免疫印迹检测临床意义临床意义 五、抗五、抗ssb抗体抗体1抗抗ssb抗体常伴随抗抗体常伴随抗ssa抗体同时出现。抗体同时出现。2抗抗ssb和抗和抗ssa抗体并存，对诊断抗体并存，对诊断ss（干（干燥燥综合症）有特异性。综合症）有特异性。348kd