采样HAHI洗血配制培养液等步骤ppt课件

1、1采样、ha、hi、洗血、配制培养液等步骤2洗血1ml 肝素可以抗凝 5.5ml血液心脏抽取豚鼠血液2ml在离心管里面加pbs至10ml离心 3000rpm/ 5min用塑料吸管弃上清，再加pbs至10ml离心 13离心 2离心 3000rpm/ 5min弃上清，加pbs至10ml离心 4000rpm/ 10min去上清，用塑料吸管将血细胞吸入玻璃瓶加pbs稀释到0.6%，4%保存备用4采样 地点：汕头大学医学院附属第一医院儿科 时间：周一周五 上午9:00 11:00 发烧儿童体温高达37.7以上，在7天内出现疑似病毒感染的呼吸道症状，年龄0-18岁，经就诊儿童父母同意采集鼻咽拭子，采完装入

2、采样管，放入冰包，同时做好记录。5采样液配制 以100ml为例： 100ml mem 10ml ps 1ml 制霉菌素6标本稀释液100ml mem 5ml ps(青链霉素)7病毒稀释液 100ml mem 200ul tpck胰酶 1ml ps8细胞培养液 100ml mem 10ml fbs 1ml ps9种标本stuc附属第一医院采取流感症状发热儿童咽拭子咽拭子在振荡器上面振荡，使棉签中的标本充分溶解于液体中用移液枪取220ul样本稀释液加入到1ml离心管中吸取275ul标本液加入该离心管中振荡、在室温作用1-2小时后离心：10000rpm/ 3min10用pbs将细胞培养管洗两遍吸取4

3、20ul离心后的标本液加入细胞培养管35吸附1-2h加维持液后放入培养箱里，培养5d，每天观察cpe阳性阴性冻存或者继续接种细胞盲传，同时冻存11ha test红细胞凝集实验12123456789101112abcdefgh100ul virus 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 step1: add 50ul pbs in 2-12step2: add 100ul virus in 1step3: coubling dilutiontiter: 1 2 4 8 16 32 64 128 256

4、512 1024 2048titer=2n-113取96孔板，用记号笔做好标记在212号排列孔里各加入50ml pbs在1号排列里各加入100ml 病毒液用排枪从1号孔吸取50ml，加入2号孔，反复吹吸，吸取50ml加入3号管112号孔里面各加入50ul 火鸡血/豚鼠血火鸡血用火鸡血用u型板型板豚鼠血用豚鼠血用v型板型板静置30min，判读14阳性阴性冻存或者继续接种细胞盲传，同时冻存吸取500ul 病毒液，离心:10000rpm/3min将细胞培养管用pbs洗两遍，之后加入病毒液35吸附1-2h加维持液，培养5d，每天观察cpe15hi test红细胞凝集抑制试验16adjust 4ad t

5、hen the ha titer4titer=2n-1titer=450mlxx=50ml2n-3x 为第一个孔里面要加的病毒量，然后加为第一个孔里面要加的病毒量，然后加pbs至至50ml=或者公式二v总vvirusha817123456789101112abcdefghh2o:50xvirus: x18123456789101112abcdefgh50ul serum 25ul pbs25uladd 25ul virus to every wellwait for 45minadd 50ul blood to every well19cell culturecell culture flas

6、k: s 25cm2 5ml m 75cm2 1015ml l 175cm2 30ml dilution ratio/dilutionrate: two days 1 to 810 three days 1 to 2020plan cell culture tube 1ml 96 well plate 9620ul (1980ul) if you need 200 tubes in 2 days, the plan as follow: total need cell culture fluid: 201ml 20ml/10(dilutionrate for 2 days)=2ml(take 2ml from the 810ml of diluted from m flask)21if you need 20 96-well plates in 2 days, the plan as follow: need total v