chapter5 生物药剂学在新药发现阶段的实际应用

1、药物研究与开发药物研究与开发刘美凤生物药剂学研究内容剂型因素剂型因素1生物因素生物因素2体内吸收机理等研究体内吸收机理等研究3 生物药剂学生物药剂学是研究药物及其制剂在体内是研究药物及其制剂在体内的的吸收、分布、代谢与排泄吸收、分布、代谢与排泄过程中药物的过程中药物的剂型因素剂型因素、生物因素生物因素与与药效药效包括（疗效、包括（疗效、副作用及毒性）三者之间关系的副作用及毒性）三者之间关系的一门学科一门学科研究内容研究内容 药物作用的三个重要药物作用的三个重要相相给药剂量给药剂量剂型崩解药物溶出剂型崩解药物溶出可被吸收的药物可被吸收的药物药物利用度药物利用度吸收、分布、代谢、排泄吸收、分布、代

2、谢、排泄可产生作用的药物可产生作用的药物生物利用度生物利用度药物与靶点相互作用药物与靶点相互作用效应效应药剂相药剂相药代动力相药代动力相药效相药效相影响药物胃肠道吸收的剂型因素药物的脂溶性与解离常数药物的脂溶性与解离常数pkapka药物的溶出速度药物的溶出速度药物的粒径药物的粒径药物的晶型药物的晶型溶剂化物与盐型溶剂化物与盐型药物理化性质的影响药物理化性质的影响隔室模型的种类单室模型单室模型双室模型双室模型多室模型多室模型身体身体x x0 0k k中央室中央室周边室周边室k k1212k k2121x x0 0k k1010中央室中央室周边二室周边二室k k1212k k2121x x0 0k

3、 k1010周边一室周边一室k k1313k k3131定量研究药物在定量研究药物在adme过程中的变化，隔室是具有动力学均一性的模型过程中的变化，隔室是具有动力学均一性的模型药物动力学基本参数生物半衰期（生物半衰期（t1/2t1/2）清除率（清除率（clcl）药物在体内的量或血药浓度药物在体内的量或血药浓度消除一半所需的时间消除一半所需的时间单位时间内机体或某器官能消除单位时间内机体或某器官能消除相当多少毫升血中所含的药物相当多少毫升血中所含的药物生物利用度的种类l绝对生物利用度绝对生物利用度= = 100%100% l相对生物利用度相对生物利用度= = 100%100% l是指制剂中的药物

4、吸收进入体循环的是指制剂中的药物吸收进入体循环的相对程度相对程度和和相对速度相对速度（auc0）试验制剂）试验制剂（auc0）静注）静注（auc0）试验制剂）试验制剂（auc0）标准参比制剂）标准参比制剂生物利用度的三个主要参数两种制剂血药浓度时间曲线比较pampalpampa: 人工膜平行测量细胞通透性的方法l使用卵磷脂和惰性有机溶剂混合液在一个疏水的滤板担体上，作为生物膜评价分子的通透性l不能完全预测出通透性，但能给出分子的被动扩散穿膜能力的趋势l在进行大量化合物库筛选时有一定价值caco-2细胞细胞-体外吸收研究的细胞模型体外吸收研究的细胞模型 l无论是开发新药还是开发新的给药途径，化合

5、物在体内的吸收特性都非常重要。 lcaco-2细胞是人结肠肠癌上皮细胞(the human coclon carcinoma cell line: caco-2)l其标志酶的功能表达及通透特征也与小肠类似，因而被大多数实验采用作为研究小肠表皮细胞转运和代谢的体外模型，在国外，caco-2细胞被广泛用于新药筛选及吸收机制研究l利用人小肠上皮caco-2细胞单层来进行药物小肠吸收的细胞水平实验，现在已经成为一种预测药物在人体小肠吸收以及研究药物转运机制的标准筛选工具。 lcaco-2细胞建立了细胞水平的体外吸收研究模型，并对该模型进行了系统的评价与优化，为高通量筛选与评价候选化合物及天然产物的吸收

6、特性、研究其吸收机制、筛选促吸收剂提供了良好的技术平台 caco-2细胞模型的特点和优势细胞模型的特点和优势l具有相对简单、重复性较好、应用范围较广的特点 l来源于人的直肠癌，结构和功能类似于人小肠上皮细胞，并含有与小肠刷状缘上皮相关的酶系。l在细胞培养条件下，生长在多孔的可渗透聚碳酸酯膜上的细胞可融合并分化为肠上皮细胞，形成连续的单层，这与正常的成熟小肠上皮细胞在体外培育过程中出现反分化的情况不同。l细胞亚显微结构研究表明，caco-2细胞与人小肠上皮细胞在形态学上相似，具有相同的细胞极性和紧密连接l胞饮功能的检测也表明，caco-2细胞与人小肠上皮细胞类似，这些性质可以恒定维持约20天。由

7、于caco-2细胞性质类似小肠上皮细胞，因此可以在这段时间进行药物的跨膜转运实验。l存在于正常小肠上皮中的各种转运系统、代谢酶等在caco-2细胞中大都也有相同的表达，如细胞色素p450同工酶、谷氨酰胺转肽酶、碱性磷酸酶、蔗糖酶、葡萄糖醛酸酶及糖、氨基酸、二肽、维生素b12等多种主动转运系统在caco-2细胞中都有与小肠上皮细胞类似的表达。由于其含有各种胃肠道代谢酶，因此更接近药物在人体内吸收的实际环境。 caco-2细胞模型的应用细胞模型的应用lcaco-2细胞模型在新药吸收评价方面 lcaco-2细胞中存在有与小肠上皮相同的各种转运系统、代谢酶，因此可用来作为研究与吸收相关的药物相互作用的

8、体外模型 l人体小肠中存在着丰富的细胞色素p450同工酶，拓展药物小肠代谢研究 药物吸收体内外相关性研究药物吸收体内外相关性研究 artursson.p等人首次用caco-2细胞模型研究了药物的被动扩散机制,测定了被动扩散吸收的药物的表观通透系数(papp)，发现： 吸收良好的药物 papp10-6cm/s 吸收一般的药物 1.0 10-7 papp 110-6cm/s 吸收差的药物 papp10-7cm/s 药物名称papp （cmsec-1）f(%)氯苄律定4.9910-710.7黄芪甲甙6.6510-82.3盐酸关附甲素4.1410-593.0 试验结果如上表所示, 发现药物的正向表观通

9、透系数papp的大小和药物的生物利用度有很好的相关性,说明caco-2细胞模型可以比较准确地预测药物的吸收情况。二氢吡啶类药物的二氢吡啶类药物的caco-2模型数据库模型数据库 l用alchemy 2000计算几种二氢吡啶类药物的有关参数后用sas程序进行一次回归lpapp=-410-4（logp）2+0.0019logp-0.0021 lpapp = 610-5(pkb)2 - 0.0007 pkb + 0.0022 lpapp= 310-8v2-210-5v+0.0031l本实验研究的五种二氢吡啶类药物的最佳解离度在ph5.3左右，最佳logp值在2.4左右。l分子体积对吸收的影响较小。通

10、过比较我们发现pkb对papp值影响较大。lpkb在5.29时papp达最大值，提示我们今后如果要对二氢吡啶类药物进行结构改造时，可以尝试控制pkb在5.3左右的范围，以提高吸收能力。利用利用caco-2细胞模型研究了细胞模型研究了p-糖蛋白糖蛋白（p-gp）对药物吸收的影响）对药物吸收的影响 l研究显示，盐酸小檗碱及其衍生物、人参皂苷rg1等均为肠上皮p-糖蛋白的底物l使用p-糖蛋白抑制剂可以显著改善其吸收，动物实验发现其吸收在使用p-糖蛋白抑制剂后生物利用度显著提高l相关研究成果已发表于planta medica,biol pharm bull, pharmacol and toxicol

11、等国际权威期刊 caco-2细胞其它相关研究细胞其它相关研究l国际上首次建立caco-2细胞缺氧复氧损伤模型，并结合整体模型研究了烧伤对二肽类物质吸收特性的影响国际上首次建立caco-2细胞缺氧复氧损伤模型，并结合整体模型研究了烧伤对二肽类物质吸收特性的影响 l首次发现缺氧复氧损伤后caco-2细胞寡肽转运体（pept1）的表达下调，重组人生长激素可上调该转运体的表达水平，对创伤后二肽底物等营养物质的促吸收研究具有重要指导意义，相关研究论文发表在world j gastroenterol上 l国际上首次应用caco-2细胞模型研究了布洛芬类药物的系统前转化问题，建立并优化了手性药物系统前转化研究模型 caco-2细胞的缺点和对策细胞的缺点和对策l尽管caco-2细胞模型具有诸多优点，但仍然存在某些缺陷：l如形成完全分化并具有紧密连接的单层细胞生物膜所需培养时间较长(228天)l缺乏分泌黏液的功能，不似小肠上皮能够形成黏液层l缺少或低表达某些药物代谢酶和转运体等l研究者们因此就这些缺陷对模型本身进行的改进和对策：l研究人员选用biocoat肠上皮细胞分化环境(biede)来培养caco-2细胞，优化了细胞培养条件l添加ht29细胞共培养小肠的吸收作用与黏液层的存在密切